林文生 黃芳

CA 是由人乳頭瘤病毒(HPV)感染所引起的一種性傳播疾病,有研究表明HPV 感染會(huì)造成免疫應(yīng)答異常,導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不能及時(shí)清除病原體［1］。持續(xù)性感染會(huì)造成細(xì)胞凋亡障礙,因細(xì)胞增生而出現(xiàn)菜花樣或乳頭樣贅生物。TLR9 作為Toll 樣受體(TLRs)的物質(zhì)之一,參與HPV 的識(shí)別,因此探討TLR9 與免疫應(yīng)答、細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系,有利于掌握CA 發(fā)展過(guò)程中的特征［2］。本研究回顧性分析本院CA 患者的病歷資料,總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2018 年9 月～2020 年9 月收治的61 例CA 患者作為觀察組,其中,初發(fā)患者34 例(觀察組A),年齡27～44 歲,平均年齡(31.26±4.28)歲；復(fù)發(fā)患者27 例(觀察組B),年齡28～45 歲,平均年齡(32.91±4.06)歲；另選取同期行包皮環(huán)切術(shù)的非CA 患者42 例作為對(duì)照組,年齡27～44 歲,平均年齡(31.27±4.29)歲。三組患者的一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn) 觀察組患者符合衛(wèi)健委疾病控制司制訂的CA 診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并惡性腫瘤、乙型肝炎等疾??；②合并人類免疫缺陷病毒(HIV)感染；③合并自身免疫疾病和(或)使用免疫抑制劑。

1.3方法 取觀察組病灶及對(duì)照組包皮組織,固定后制為標(biāo)本。采用RNA 提取試劑盒收集標(biāo)本中RNA；采用cDNA、去離子試劑、反向、正向引物溶液、UltraSYBR Mixture 試劑。試劑混合后經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)儀器處理,檢測(cè)基因表達(dá)。

1.4觀察指標(biāo) 對(duì)比三組TLR9 的mRNA 表達(dá)水平、免疫應(yīng)答情況、細(xì)胞凋亡情況,分析CA 病灶內(nèi)TLR9的mRNA 表達(dá)水平與免疫應(yīng)答和細(xì)胞凋亡的相關(guān)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗(yàn)。相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman 相關(guān)分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1三組TLR9 的mRNA 表達(dá)水平對(duì)比 觀察組A患者TLR9 的mRNA 水平高于觀察組B 及對(duì)照組,觀察組B 患者TLR9 的mRNA 水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 三組TLR9 的mRNA 表達(dá)水平對(duì)比()

表1 三組TLR9 的mRNA 表達(dá)水平對(duì)比()

注：與對(duì)照組對(duì)比,aP＜0.05；與觀察組B 對(duì)比,bP＜0.05

2.2三組免疫應(yīng)答情況對(duì)比 觀察組A 的IFN-γ、IL-17 水平高于觀察組B 及對(duì)照組,觀察組B 的IFN-γ、IL-17 水平高于對(duì)照組；觀察組A 的IL-4、IL-10 水平低于觀察組B 及對(duì)照組,觀察組B 的IL-4、IL-10 水平低于對(duì)照組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 三組IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 水平對(duì)比()

表2 三組IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 水平對(duì)比()

注：與對(duì)照組對(duì)比,aP＜0.05；與觀察組B 對(duì)比,bP＜0.05

2.3三組細(xì)胞凋亡情況對(duì)比 觀察組B 的PCNA、Survivin 水平高于觀察組A 及對(duì)照組,觀察組A 的PCNA、Survivin 水平高于對(duì)照組；觀察組B 的FasL、Fas 水平低于觀察組A 及對(duì)照組,觀察組A 的FasL、Fas 水平低于對(duì)照組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 三組細(xì)胞凋亡情況對(duì)比()

表3 三組細(xì)胞凋亡情況對(duì)比()

注：與對(duì)照組對(duì)比,aP＜0.05；與觀察組A 對(duì)比,bP＜0.05

2.4CA 病灶內(nèi)TLR9 的mRNA 表達(dá)水平與免疫應(yīng)答和細(xì)胞凋亡的相關(guān)性分析 CA 病灶內(nèi)TLR9 的mRNA表達(dá)與IFN-γ、IL-17、FasL、Fas 的表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05),與IL-4、IL-10、PCNA、Survivin 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。見(jiàn)表4。

表4 CA 病灶內(nèi)TLR9 的mRNA 表達(dá)水平與免疫應(yīng)答和細(xì)胞凋亡的相關(guān)性分析

3 討論

HPV 感染后如機(jī)體免疫應(yīng)答及時(shí)有利于快速清除病毒,而免疫應(yīng)答紊亂則不利于病毒的清除,同時(shí)還會(huì)增加CA 復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)［3］。因此免疫應(yīng)答與CA 轉(zhuǎn)歸密切相關(guān),TLR9 能夠識(shí)別HPV,下調(diào)免疫應(yīng)答,促進(jìn)病毒的清除［4］。本研究中,觀察組A 患者TLR9 的mRNA 水平高于觀察組B 及對(duì)照組,觀察組B 患者TLR9 的mRNA 水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。這一結(jié)果提示CA 的復(fù)發(fā)可能與TLR9 表達(dá)下降影響對(duì)HPV 的識(shí)別以及對(duì)免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)有關(guān)。

在免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)中T 淋巴細(xì)胞發(fā)揮了重要作用,Th1、Th2 等作為CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群,參與免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)［5］。IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 為上述亞群所分泌的因子,分析因子水平能夠了解CA 患者免疫應(yīng)答情況［6,7］。本研究中,觀察組A 的IFN-γ、IL-17 水平高于觀察組B 及對(duì)照組,觀察組B 的IFN-γ、IL-17水平高于對(duì)照組；觀察組A 的IL-4、IL-10 水平低于觀察組B 及對(duì)照組,觀察組B 的IL-4、IL-10 水平低于對(duì)照組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。IFN-γ、IL-17 為促炎因子,IL-4 為抑炎因子,IL-10 為免疫抑制細(xì)胞因子,患者 Th1/ Th2 以及 Th17/Treg 比值改變,Th1 數(shù)量上升引起IFN-γ 表達(dá)提高,Th17 數(shù)量上升引起IL-17 表達(dá)提高進(jìn)而誘發(fā)介導(dǎo)促炎效應(yīng)加速病毒的清除［8］。而CA 復(fù)發(fā)患者因Th1/ Th2 以及 Th17/Treg比值相比初發(fā)患者更低,為此不利于病毒的清除［9］。經(jīng)過(guò)研究還了解到,觀察組B 的PCNA、Survivin 水平高于觀察組A 及對(duì)照組,觀察組A 的PCNA、Survivin水平高于對(duì)照組；觀察組B 的FasL、Fas 水平低于觀察組A 及對(duì)照組,觀察組A 的FasL、Fas 水平低于對(duì)照組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。這一結(jié)果說(shuō)明CA病灶中存在細(xì)胞凋亡異常表現(xiàn),CA 復(fù)發(fā)患者抗凋亡基因(BPCNA、Survivin)水平最高,抑制凋亡基因(FasL、Fas)水平最低,表示CA 復(fù)發(fā)患者的細(xì)胞增殖更明顯,進(jìn)而疾病復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)更高。CA 病灶內(nèi)TLR9 的mRNA表達(dá)與IFN-γ、IL-17、FasL、Fas 的表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05),與IL-4、IL-10、PCNA、Survivin 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。這一結(jié)果也驗(yàn)證了TLR9 表達(dá)異常將對(duì)免疫應(yīng)答、細(xì)胞凋亡有影響,TLR9 降低將導(dǎo)致下游免疫應(yīng)答的啟動(dòng)受到干擾［10］。免疫系統(tǒng)清除HPV 能力不足,細(xì)胞凋亡受到抑制,增加CA 復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn),細(xì)胞異常增殖最終導(dǎo)致菜花樣增生或乳頭樣增生［11］。

總之,在CA 發(fā)展過(guò)程中如果患者免疫應(yīng)答發(fā)生紊亂,細(xì)胞凋亡就會(huì)受到抑制,進(jìn)而促進(jìn)病情發(fā)展或引起復(fù)發(fā)。