羅偉強(qiáng)，唐水秀，毛慧珊，劉寶，盤鵬慧

（1.廣西民族大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，廣西 南寧 530008；2.來(lái)賓民族中學(xué)，廣西 南寧 546100；3.廣西民族大學(xué)預(yù)科教育學(xué)院，廣西 南寧 530008）

絲瓜為葫蘆科一年生攀緣性草本植物，在我國(guó)南北各地均有種植。絲瓜中含豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、維生素B、維生素E、生物堿、木糖膠以及鐵、鎂、鋅、鈣等人體所需要的無(wú)機(jī)元素[1-3]，且其根、藤、葉、果、籽、絡(luò)等全身都可入藥[4-6]，故絲瓜的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值都很高。絲瓜籽仁中含有極豐富的植物油脂，脂肪酸含量與花生油相似，極具開發(fā)利用價(jià)值。目前，各種關(guān)于植物油脂的提取、成分及抗氧化能力的研究時(shí)有報(bào)道[9-13]，而有關(guān)絲瓜籽油的研究主要集中在提取方法、工藝和成分分析方面[14-18]，在抗氧化研究方面則未見報(bào)道。

本研究采用索氏提取回流法對(duì)絲瓜籽油進(jìn)行提取，用KOH-甲醇溶液法對(duì)絲瓜籽油進(jìn)行酯化處理，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)機(jī)（gas chromatography-mass spectro-metry online，GC-MS）對(duì)絲瓜籽油的成分進(jìn)行檢測(cè)分析，鑒定其主要成分，并對(duì)其進(jìn)行抗氧化活性研究，為更好地開發(fā)利用絲瓜籽油提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

絲瓜籽：福州閩皇種業(yè)有限公司；石油醚（分析純）：天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；水楊酸（分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；無(wú)水乙醇（分析純）、甲醇（分析純）、鄰苯三酚（分析純）、Tris-HCl（分析純）：天津市大茂化學(xué)試劑廠；三氯化鐵（分析純）、三氯乙酸（分析純）、氫氧化鉀（分析純）：成都市科龍化工試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；752N紫外可見分光光度計(jì)：北京合悅達(dá)科技有限公司；AB204-S電子天平：上海帥寧儀器有限公司；Clarus500氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國(guó)鉑金埃爾默公司。

1.3 方法

1.3.1 絲瓜籽油的提取

絲瓜籽逐粒剝殼，將帶膜絲瓜籽鋪于潔凈的搪瓷盤上，置于70℃的烘箱中6 h。取出，室溫（25℃）冷卻，并于干燥環(huán)境下逐粒搓去籽膜，然后取適量干燥去膜的絲瓜籽仁于高速粉碎機(jī)中攪拌1 min左右，得到絲瓜籽仁細(xì)粉。

準(zhǔn)確稱取39.484 1 g絲瓜籽仁細(xì)粉，將細(xì)粉完全無(wú)損的轉(zhuǎn)移至500 mL索氏提取器中，以石油醚為溶劑回流提取4 h左右至溶劑用濾紙檢測(cè)無(wú)油跡為止。提取液用玻璃漏斗過(guò)濾后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋去溶劑，將蒸出溶劑后的提取燒瓶置沸水浴中加熱蒸發(fā)掉殘余溶劑，得到15.454 1 g淺黃綠色絲瓜籽仁油，總提取率為39.14%[19]。

1.3.2 絲瓜籽油脂肪酸GC-MS分析

1.3.2.1 氣相色譜條件

PE-5彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.25mm，0.25μm），載氣為高純氦氣（99.99%），載氣流速1.00 mL/min，進(jìn)樣量 1.0 μL，進(jìn)樣口溫度 260 ℃，分流比 40∶1，程序升溫：柱箱初溫80℃，以14℃/min速度升到195℃、保持9min，接著以6.0℃/min速度升到280℃、保持3min。

1.3.2.2 質(zhì)譜條件

溶劑延遲2 min，質(zhì)譜掃描質(zhì)量：33～500，EI離子源，電子能量70 eV，傳輸線溫度：280℃，離子源溫度：230℃。

1.3.3 酯化條件

取100 mg絲瓜籽油置于10 mL具塞試管中，加入1 mL 1 mol/LKOH-甲醇溶液，在40℃下振蕩60 min，靜置15 min，加入2 mL正己烷，靜置10 min，取上層清液，加入少許無(wú)水硫酸鈉，進(jìn)行色譜分析，歸一化面積法計(jì)算其百分含量[20]。

1.3.4 絲瓜籽油的抗氧化活性

1.3.4.1 還原Fe3+能力

在比色管中依次加入2.5 mL磷酸鹽緩沖溶液、1 mL不同質(zhì)量濃度的樣品試液和2.5 mL 1 g/100 mL鐵氰化鉀溶液，搖勻，蓋上塞子，將混合物置于50℃恒溫水浴鍋中，水浴20min。再加入2.5mL10g/100mL三氯乙酸，混勻，3 000 r/min離心10 min后，取上清液2.5 mL于試管中，加去離子水2.5 mL和0.1 g/100 mL三氯化鐵0.5 mL，常溫（25℃）反應(yīng)5 min后于700 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以VC為陽(yáng)性對(duì)照，去離子水做空白對(duì)照[21]。

1.3.4.2 清除DPPH自由基能力

用無(wú)水乙醇配制0.2 mmol/L的DPPH溶液。取樣品溶液3 mL于試管中，加入2 mL 0.2 mmol/L的DPPH溶液，混勻后避光靜置30 min，在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以VC為陽(yáng)性對(duì)照，去離子水做空白對(duì)照[22-23]。

式中：A1為樣品溶液和DPPH溶液的吸光值；A2為樣品溶液和無(wú)水乙醇的吸光值；A3為去離子水和DPPH溶液的吸光值。

1.3.4.3 羥基自由基清除能力

分別取1 mL不同濃度絲瓜籽油溶液于具塞試管中，依次加入6 mmol/L FeSO4溶液1 mL、6 mmol/L水楊酸乙醇溶液1 mL和8 mmol/L H2O2溶液1 mL，37℃水浴加熱30 min，于510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以VC為陽(yáng)性對(duì)照，去離子水做空白對(duì)照[24]。

式中：A1為樣品溶液、FeSO4溶液、水楊酸乙醇溶液、H2O2溶液的吸光值；A2為樣品溶液、FeSO4溶液、水楊酸乙醇溶液、無(wú)水乙醇的吸光值；A3為去離子水、FeSO4溶液、水楊酸乙醇溶液、H2O2溶液的吸光值。

1.3.4.4 超氧陰離子自由基的清除能力

分別取1mL不同濃度絲瓜籽油溶液于具塞試管中，加入0.05 mol/L的Tris-HCl緩沖液4.5 mL和3 mmol/L的鄰苯三酚溶液0.1 mL，25℃反應(yīng)5 min后加入1 mL 8 mmol/L HCl，在299 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以VC為陽(yáng)性對(duì)照，去離子水做空白對(duì)照[25]。

式中：A1為樣品溶液、Tris-HCl緩沖液、鄰苯三酚溶液、HCl溶液的吸光值；A2為樣品溶液、Tris-HCl緩沖液、無(wú)水乙醇、HCl溶液的吸光值；A3為去離子水、Tris-HCl緩沖液、鄰苯三酚溶液、HCl溶液的吸光值。

2 結(jié)果與分析

2.1 絲瓜籽油脂肪酸組成結(jié)果

采用GC-MS法對(duì)絲瓜籽油的脂肪酸組成進(jìn)行分析，圖1為絲瓜籽甲酯化后的總離子流色譜圖。

圖1 絲瓜籽油甲酯化后的總離子流色譜圖Fig.1 The total ion chromatogram of luffa oil after methyl ester

根據(jù)各脂肪酸甲酯出峰時(shí)間和保留時(shí)間，通過(guò)計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)和人工譜圖解析相結(jié)合的手段進(jìn)行檢索，分析各峰相應(yīng)的質(zhì)譜圖，共鑒定出9種化合物，再根據(jù)面積歸一化法得到脂肪酸的相對(duì)含量，結(jié)果見表1。

表1 絲瓜籽油脂肪酸組成的分析結(jié)果Table 1 The composition analysis results of fatty acid in luffa oil

由表1可看出，絲瓜籽油中的脂肪酸含量達(dá)到98%以上，其中不飽和脂肪酸含量達(dá)到58%（以亞油酸居多），說(shuō)明絲瓜籽油具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。盧奎等[8]對(duì)絲瓜籽油的脂肪酸組成進(jìn)行了分析，鑒定出9種主要的脂肪酸，除了棕櫚酸甲酯、油酸甲酯、硬脂酸甲酯和亞油酸甲酯外還含有少量的十七碳酸、豆蔻酸、山崳酸和亞麻酸。

2.2 絲瓜籽油抗氧化活性結(jié)果

2.2.1 絲瓜籽油還原Fe3+能力

絲瓜籽油還原Fe3+能力的效果見圖2。

圖2 絲瓜籽油還原Fe3+能力的效果Fig.2 Effect of luffa seed oil on reducing Fe3+

由圖2可知，絲瓜籽油和VC在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對(duì)Fe3+都具有還原能力，且還原能力隨著質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)，但絲瓜籽油對(duì)Fe3+的還原能力低于對(duì)照組VC。

2.2.2 絲瓜籽油清除DPPH自由基能力

不同濃度絲瓜籽油對(duì)DPPH自由基的清除效果見圖3。

圖3 不同濃度絲瓜籽油對(duì)DPPH自由基的清除效果Fig.3 Scavenging effect of luffa seed oil concentration on DPPH free radicals

由圖3可知，在2 mg/mL～10 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，VC對(duì)DPPH自由基的清除率基本無(wú)變化，均為95%左右，說(shuō)明VC溶液對(duì)DPPH自由基具有很強(qiáng)的清除能力；絲瓜籽油對(duì)DPPH自由基的清除率則隨著質(zhì)量濃度的增大而逐漸增強(qiáng)，表現(xiàn)出良好的劑量依賴關(guān)系，其對(duì)DPPH自由基的清除率低于VC。絲瓜籽油IC50值為26.17 mg/mL，由于VC溶液對(duì)DPPH自由基具有很強(qiáng)的清除能力，VC的IC50值比絲瓜籽油的IC50值小很多。

2.2.3 清除羥基自由基能力

不同濃度絲瓜籽油對(duì)羥基自由基的清除效果見圖4。

圖4 不同濃度絲瓜籽油對(duì)羥基自由基的清除效果Fig.4 Scavenging effect of luffa seed oil concentration on hydroxyl free radicals

由圖4可知，VC清除羥基自由基能力隨濃度升高而增加，當(dāng)VC濃度為0.8 mg/mL時(shí)，清除率達(dá)到最大值，繼續(xù)提高濃度清除率基本不發(fā)生改變；絲瓜籽油清除羥基自由基能力隨絲瓜籽油濃度增加而增加，當(dāng)絲瓜籽油濃度達(dá)到0.8 mg/mL后，繼續(xù)提高絲瓜籽油濃度，清除率上升緩慢。絲瓜籽油清除羥基自由基的IC50為2.24 mg/mL，當(dāng)其質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時(shí)，對(duì)羥基自由基的清除率達(dá)到32%以上，體現(xiàn)出良好的清除羥基自由基的活性，但與對(duì)照組VC同濃度的清除率（99%）相比仍有差距。

2.2.4 清除超氧陰離子自由基能力

不同濃度絲瓜籽油對(duì)超氧陰離子的清除效果見圖5。

圖5 不同濃度絲瓜籽油對(duì)超氧陰離子的清除效果Fig.5 Scavenging effect of luffa seed oil concentration on superoxide anion free radicals

由圖5可知，絲瓜籽油和VC溶液對(duì)超氧陰離子自由基的清除活性均隨著質(zhì)量濃度的增大而增強(qiáng)，當(dāng)絲瓜籽油質(zhì)量濃度為0.09 mg/mL時(shí)，其對(duì)超氧陰離子自由基的清除率高達(dá)80%以上，絲瓜籽油清除超氧陰離子自由基的IC50為0.069 mg/mL，VC的IC50值是0.135 mg/mL，可見絲瓜籽油對(duì)超氧陰離子自由基的清除率高于對(duì)照組VC，表現(xiàn)出良好的清除超氧陰離子自由基的能力。

3 結(jié)論

結(jié)果表明，絲瓜籽油中脂肪酸的含量高達(dá)98%以上，不飽和脂肪酸含量達(dá)58%（以亞油酸居多）。通過(guò)絲瓜籽油體外抗氧化活性表明，絲瓜籽油具有一定的還原能力，并且對(duì)DPPH自由基、羥基自由基、超氧陰離子自由基具有良好的清除能力，絲瓜籽油對(duì)DPPH自由基的IC50值為26.17 mg/mL，對(duì)羥基自由基的IC50值為2.24 mg/mL，對(duì)超氧陰離子的IC50值為0.069 mg/mL。其清除能力隨著絲瓜籽油質(zhì)量濃度的增加而逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)了良好的量效關(guān)系，尤其是對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力較強(qiáng)，比VC高。絲瓜籽油具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性，在天然抗氧化劑和保健食品中有良好的開發(fā)利用價(jià)值。