王旻凱，于斐，魏新亭

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 神經(jīng)外科，河南 鄭州 450052；2.鄭州大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院，河南 鄭州 450001)

腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤，目前腦膠質(zhì)瘤的治療多在安全范圍內(nèi)采用最大限度手術(shù)切除結(jié)合術(shù)后放化療，但經(jīng)積極治療后腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍不理想，特別是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的平均生存期不足2 a[1-2]。研究膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展過程中關(guān)鍵因子水平的變化，為膠質(zhì)瘤診治提供新思路，成為了近年來的研究熱點(diǎn)[3-4]。腱糖蛋白C(tenascin C，TNC)是一種多結(jié)構(gòu)域細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，在神經(jīng)細(xì)胞遷移和軸突發(fā)育中發(fā)揮作用，在腫瘤中可通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞延伸、遷移等影響血管生成。TNC高表達(dá)于原發(fā)性肝細(xì)胞癌[5]、食管鱗癌[6]、乳腺癌[7]、前列腺癌[8]，但TNC在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)特征及臨床意義報(bào)道較少。本研究回顧性分析中國腦膠質(zhì)瘤基因組圖譜(Chinese Glioma Genome Atlas，CGGA)數(shù)據(jù)庫中1 018例腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織及20例非膠質(zhì)瘤患者正常對(duì)照腦組織的測序數(shù)據(jù)及相應(yīng)臨床資料，探討TNC在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)特征及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)獲取及處理從CGGA數(shù)據(jù)庫納入的 1 018例腦膠質(zhì)瘤患者及20例非膠質(zhì)瘤患者中，獲得腦膠質(zhì)瘤患者的腫瘤組織以及非膠質(zhì)瘤患者正常腦組織的測序數(shù)據(jù)，并獲得腦膠質(zhì)瘤患者年齡、性別、世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)病理分級(jí)、組織病理學(xué)分類、異檸檬酸脫氫酶(isocitrate dehydrogenase，IDH)基因突變狀態(tài)、O6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase，MGMT)基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)、1p/19q染色體共缺失情況以及是否接受放化療等臨床數(shù)據(jù)及隨訪信息。

2 結(jié)果

2.1 TNC的表達(dá)水平從CGGA數(shù)據(jù)庫中獲得格式為每千個(gè)堿基轉(zhuǎn)錄每百萬映射讀取的片段數(shù)(fragments per kilobase million，F(xiàn)PKM)的1 018例腦膠質(zhì)瘤組織及20例正常對(duì)照腦組織的TNC表達(dá)量。1 018例患者中共740例患者臨床資料完整，其組織病理學(xué)診斷為少突細(xì)胞瘤84例，少突星形細(xì)胞瘤63例，星形細(xì)胞瘤291例，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤302例；病理分級(jí)Ⅱ級(jí)197例，Ⅲ級(jí)241例，Ⅳ級(jí)302例。TNC中位表達(dá)水平在膠質(zhì)瘤組織和正常對(duì)照腦組織中分別為25.65和4.54，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=4.728，P<0.001)； TNC中位表達(dá)水平在少突細(xì)胞瘤、少突星型細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤及膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中分別為10.14、7.45、23.91、52.72，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=180.805，P<0.001)；TNC中位表達(dá)水平在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中分別為11.41、21.51、56.19，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=134.411，P<0.001)。

2.2 TNC表達(dá)水平與患者臨床特征的關(guān)系740例臨床資料完整的患者TNC表達(dá)量中位數(shù)為28.96，根據(jù)各患者膠質(zhì)瘤組織中TNC表達(dá)量與中位數(shù)的關(guān)系將患者分為高表達(dá)組(370例)和低表達(dá)組(370例)。結(jié)果顯示，年齡、病理分級(jí)、IDH基因突變狀態(tài)、MGMT基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)均與腦膠質(zhì)瘤組織TNC表達(dá)水平有關(guān)(P<0.05)，性別與膠質(zhì)瘤組織TNC表達(dá)水平無關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1 TNC表達(dá)水平與患者臨床特征的關(guān)系

2.3 TNC表達(dá)水平與患者生存期的關(guān)系共937例患者獲得隨訪，在全部組織病理分級(jí)(Ⅱ～Ⅳ級(jí))膠質(zhì)瘤患者、低級(jí)別(Ⅱ～Ⅲ級(jí))膠質(zhì)瘤患者、高級(jí)別(Ⅳ級(jí))膠質(zhì)瘤患者中，TNC高表達(dá)組患者總生存期均短于TNC低表達(dá)組患者(P<0.05)。見圖1、2、3。對(duì)獲得隨訪信息且臨床資料完整的686例患者進(jìn)行單因素及多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，病理分級(jí)、術(shù)后化療、1p/19q染色體共缺失和TNC表達(dá)水平是腦膠質(zhì)瘤患者生存期的影響?yīng)毩⒁蛩?P<0.05)。見表2、3。

圖1 Ⅱ～Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤患者生存曲線

圖2 Ⅱ～Ⅲ級(jí)膠質(zhì)瘤患者生存曲線

圖3 Ⅳ級(jí)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者生存曲線

表2 影響CGGA數(shù)據(jù)庫686例腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的 單因素Cox回歸分析

表3 影響CGGA數(shù)據(jù)庫686例腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的 多因素Cox回歸分析

3 討論

腦膠質(zhì)瘤無明確的邊界，腫瘤細(xì)胞具有較高的侵襲性，經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)治療后大多數(shù)腦膠質(zhì)瘤會(huì)在手術(shù)部位復(fù)發(fā)，且難以通過二次手術(shù)實(shí)現(xiàn)根治，致使腦膠質(zhì)瘤患者生存期較短。中國腦膠質(zhì)瘤分子診療指南(2014)和WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類(2016)已應(yīng)用一些分子標(biāo)志物預(yù)測膠質(zhì)瘤預(yù)后和指導(dǎo)治療，如IDH突變、TERT啟動(dòng)子突變、MGMT啟動(dòng)子甲基化等，染色體1p/19q聯(lián)合缺失也有助于少突細(xì)胞瘤、少突星形細(xì)胞瘤的診治。

本研究對(duì)CGGA數(shù)據(jù)庫1 018例腦膠質(zhì)瘤患者臨床資料及轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并與20例非膠質(zhì)瘤患者正常對(duì)照腦組織的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)對(duì)比，發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤組織中TNC的表達(dá)水平高于正常對(duì)照腦組織，且TNC的表達(dá)水平隨著膠質(zhì)瘤WHO病理分級(jí)的增高而升高。IDH基因突變多見于預(yù)后相對(duì)較好的低級(jí)別膠質(zhì)瘤和繼發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤[2]。本研究結(jié)果顯示，TNC在IDH突變型膠質(zhì)瘤中表達(dá)水平較低，但在預(yù)后較差的IDH野生型膠質(zhì)瘤中高表達(dá)。MGMT啟動(dòng)子甲基化可導(dǎo)致MGMT基因沉默，MGMT啟動(dòng)子甲基化的膠質(zhì)瘤患者接受替莫唑胺等烷化劑藥物治療效果較好[9]，本研究中TNC于烷化劑療效較差的MGMT非甲基化患者中高表達(dá)。結(jié)合單因素及多因素Cox回歸分析結(jié)果，TNC高表達(dá)的腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后更差且腫瘤惡性程度更高，因此認(rèn)為TNC表達(dá)水平在預(yù)測腦膠質(zhì)瘤惡性程度及患者預(yù)后方面具有重要價(jià)值。

TNC于20世紀(jì)80年代被發(fā)現(xiàn)，可對(duì)腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移、血管生成等過程產(chǎn)生作用。TNC可作為toll樣受體4的內(nèi)源性激活劑，通過影響小膠質(zhì)細(xì)胞及巨噬細(xì)胞多種細(xì)胞因子的表達(dá)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[10]， TNC能促進(jìn)肝組織中的細(xì)胞由上皮型向間質(zhì)型轉(zhuǎn)化并增強(qiáng)細(xì)胞遷移能力[5]。在食管鱗狀細(xì)胞癌中，TNC通過Akt/HIF1α軸促進(jìn)上皮型向間質(zhì)型轉(zhuǎn)化并增強(qiáng)癌細(xì)胞的干細(xì)胞樣特征[6]；在乳腺癌和前列腺癌組織中，TNC高表達(dá)與更高的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[7-8]。TNC還可作為結(jié)腸癌的診斷標(biāo)志物[11]。

使用GEPIA(http://gepia.cancer-pku.cn/)在線篩選出腦膠質(zhì)瘤中與TNC表達(dá)相關(guān)系數(shù)|r|≥0.6的382個(gè)基因并使用DAVID(https://david.ncifcrf.gov)對(duì)這些基因進(jìn)行京都百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG)信號(hào)通路分析，發(fā)現(xiàn)其主要參與PI3K-Akt信號(hào)通路和NF-κB信號(hào)通路。近期有研究發(fā)現(xiàn)，TNC在具有高NF-κB信號(hào)活性的間質(zhì)亞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中高表達(dá)，且TNC可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向腫瘤干細(xì)胞轉(zhuǎn)化[12]。間質(zhì)型膠質(zhì)瘤在膠質(zhì)瘤4種分子亞型中惡性程度最高且預(yù)后最差，而腫瘤細(xì)胞向腫瘤干細(xì)胞的轉(zhuǎn)化表明了其惡性程度的增高，這都提示TNC在膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展過程中發(fā)揮重要作用。

綜上，TNC在惡性程度較高的多種膠質(zhì)瘤亞型中高表達(dá)，高級(jí)別和低級(jí)別膠質(zhì)瘤患者中TNC基因高表達(dá)者預(yù)后均較差，提示TNC在腦膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展中發(fā)揮作用，可作為腦膠質(zhì)瘤診斷標(biāo)志物和預(yù)后指標(biāo)，具有成為潛在治療靶點(diǎn)的潛質(zhì)。