龍璠 張湘

（四川省南充市第五人民醫(yī)院檢驗科 南充 637100）

結(jié)核病是一種慢性呼吸道傳染性疾病，主要由結(jié)核分枝桿菌引起，對人類健康造成較大危害，為三大傳染病之一。臨床控制結(jié)核病傳播的關(guān)鍵在于早診斷、早治療，但臨床缺乏快速、高效的診斷方法，既往常用的痰涂片染色鏡檢法診斷效能較低，對結(jié)核分枝桿菌與非結(jié)核分枝桿菌無法進行有效區(qū)分；培養(yǎng)法耗時長，不利于臨床及時制定治療方案[1～2]。臨床診斷方法多樣，但均存在一定弊端，亟需尋找快速、簡便、準(zhǔn)確率高的診斷方法，使肺結(jié)核病患者能夠盡早確診、盡早治療，控制病情傳播。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)能夠在恒溫條件下擴增，初用于臨床時優(yōu)勢突出，操作簡單、特異性高，能夠在短時間內(nèi)獲得診斷結(jié)果[3]。鑒于此，本研究就環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)、痰涂片鏡檢法及固體培養(yǎng)法診斷肺結(jié)核病的臨床價值進行了分析?，F(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年4月～2020年4月期間于本院就診的182例初診有肺結(jié)核可疑癥狀患者，其中男98例，女84例；年齡18～75歲，平均（46.31±10.59）歲。臨床根據(jù)《肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)（WS288-2017）》[4]將入選者分為肺結(jié)核病組（n=106）與非肺結(jié)核病組（n=76），所有入選者依從性均較好。

1.2 研究方法 所有入選者均提供1份痰標(biāo)本，進行痰涂片鏡檢法、固體培養(yǎng)法及環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)檢測。痰涂片鏡檢法采用直接涂片抗酸染色顯微鏡檢測痰標(biāo)本[5]。固體培養(yǎng)法：在痰標(biāo)本中加入4倍體積的4%氫氧化鈉溶液，搖勻后靜置，當(dāng)痰標(biāo)本液化充分后，采用無菌吸管取3滴分布于羅氏培養(yǎng)基斜面的上、中、下部，將培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中，設(shè)置溫度37℃，之后每周觀察1次，并記錄觀察結(jié)果[6]。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)：在痰標(biāo)本中加入2倍體積的4%氫氧化鈉溶液，搖勻后靜置，當(dāng)痰標(biāo)本液化充分后，取1 ml放入1.5 ml離心管，離心10 min，速度為1 300 r/min，去除上清液，沉淀加入1 ml生理鹽水懸浮，采用1 300 r/min的速度離心10 min，洗滌2次，僅保留沉淀物。之后將40μl核酸提取液加入離心管中，搖勻，用超過95℃的沸水浸泡10 min，冷卻至室溫后離心5 min，速度1 300 r/min。取20μl密封液與23μl聚合酶放入0.2 ml反應(yīng)管，反應(yīng)體系數(shù)目根據(jù)檢測樣本數(shù)據(jù)進行準(zhǔn)備，并設(shè)置陽性、陰性對照，再在恒溫擴增熒光檢測儀上放置反應(yīng)管，儀器將自動判斷結(jié)果。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，在ABI PRISM 377DNA自動測序儀上對擴增產(chǎn)物進行測序，使用直接測序法，測序結(jié)果在NCBI網(wǎng)站進行比對分析。

1.3 觀察指標(biāo) 以臨床診斷結(jié)果為參考，分析環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)、痰涂片鏡檢法及固體培養(yǎng)法在肺結(jié)核病中的診斷效能，計算靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值。臨床診斷結(jié)果為肺結(jié)核，痰涂片鏡檢法、固體培養(yǎng)法及環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)也檢出陽性的即為真陽性；若臨床診斷結(jié)果為非肺結(jié)核，各方法檢出的陽性即為假陽性。以n表示總例數(shù)，a表示真陽性，b表示假陽性，c表示假陰性，d表示真陰性。準(zhǔn)確度=（a+d）/n×100%；靈敏度=a/（a+c）×100%；特異度=d/（b+d）×100%；陽性預(yù)測值=a/（a+b）×100%，陰性預(yù)測值=d/（d+c）×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)靈敏度、準(zhǔn)確度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均高于痰涂片鏡檢法，環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)靈敏度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值均高于固體培養(yǎng)法，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1～表4。

表1 痰涂片鏡檢法診斷結(jié)果（例）

表2 固體培養(yǎng)法診斷結(jié)果（例）

表3 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)診斷結(jié)果（例）

表4 痰涂片鏡檢法、固體培養(yǎng)法及環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)診斷效能對比[例（%）]

3 討論

當(dāng)前臨床診斷肺結(jié)核病主要還是依賴結(jié)核桿菌培養(yǎng)與涂片抗酸染色，結(jié)核桿菌涂片法檢出率通常為40%左右，診斷效能較差，結(jié)核桿菌培養(yǎng)檢出率雖較涂片法更高，但其耗時較長，在早期診斷中效果較差[7]。傳統(tǒng)的診斷方法均存在一定弊端，已無法滿足臨床對于診斷肺結(jié)核病的時效需求，需尋找其他更為理想的診斷方法[8]。

本研究結(jié)果顯示，環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)靈敏度、準(zhǔn)確度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均高于痰涂片鏡檢法，靈敏度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值也均高于固體培養(yǎng)法，表明肺結(jié)核病診斷中環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)診斷價值較高，利于患者早診斷、早治療，在結(jié)核病防治機構(gòu)中應(yīng)用前景較佳。痰涂片鏡檢法主要是依賴檢驗人員的識別能力從形態(tài)學(xué)進行鑒別，但菌體在個體發(fā)育中以多種形態(tài)存在，極易出現(xiàn)誤診、漏診，診斷敏感度較低；固體培養(yǎng)法在進行處理時會對標(biāo)本中50%～80%的結(jié)核菌活性造成損傷，以致陽性檢出率較低[9]。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)對儀器設(shè)備要求不高，不需要用復(fù)雜、昂貴的檢測設(shè)備，能夠快速檢出結(jié)核桿菌，在1 h內(nèi)即可獲得結(jié)果[10]。該項技術(shù)操作簡單，在1個裝置中就能完成所有反應(yīng)，且反應(yīng)裝置為封閉狀態(tài)可減少污染。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)針對結(jié)核分枝桿菌設(shè)置不同的引物，利用鏈置換反應(yīng)，大量擴增目標(biāo)DNA，擴增效率較高[11]。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)雖具有方便、快捷等突出優(yōu)勢，但在臨床操作時仍需注意以下幾點：因該項技術(shù)對設(shè)備要求不高，基層醫(yī)院可進行相關(guān)檢測，但需注意對工作人員的培訓(xùn)，以確保操作過程不要出現(xiàn)差錯；該項技術(shù)實驗過程中需進行陰性、陽性對照，為節(jié)約成本，應(yīng)在每日痰標(biāo)本＞10份的實驗室中開展[12]。