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        卵巢癌患者癌組織中nm23-H1蛋白和N-cad的表達及意義#

        2021-06-10 10:40:52戎鳳敏秦海霞張景航張嬌
        四川生理科學(xué)雜志 2021年4期
        關(guān)鍵詞:卵巢癌分化陽性率

        戎鳳敏 秦海霞 張景航 張嬌

        (新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科,河南 新鄉(xiāng) 453100)

        卵巢癌是臨床常見惡性腫瘤之一,發(fā)病率位居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第3位,死亡率位居婦科惡性腫瘤第1位[1]。由于卵巢癌發(fā)病隱匿,目前缺乏有效的普查和早期診斷方法,約有70%以上的患者就診時發(fā)現(xiàn)腫瘤已處于晚期,預(yù)后極差[2]。惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲與患者的預(yù)后密切相關(guān),是患者死亡的直接原因,而nm23-H1基因重要的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因[3],通過橡黃素上調(diào)肝癌細(xì)胞的nm23-H1可明顯抑制肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力[4]。研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)型鈣粘附蛋白(N-cadherin,Ncad)可通過上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial- mesenchymal transition,EMT)途徑參與腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移,對妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有一定影響[5]?;诖?,本文對118例卵巢癌患者癌組織中nm23-H1蛋白及N-cad表達及其臨床意義進行探究,現(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2011年1月至2013年12月間我院收治的118例卵巢癌患者的臨床資料以及保存的癌組織和癌旁組織標(biāo)本進行研究。所有患者年齡35~65歲、平均年齡51.61±10.65歲,≤60歲者44例、>60歲者74例,絕經(jīng)前者43例、絕經(jīng)后者75例,病理類型:漿液型腺癌71例、黏液型腺癌39例、其他8例,病理分級:Ⅰ級49例、Ⅱ級40例、Ⅲ級29例,F(xiàn)IGO分期:Ⅰ~Ⅱ期47例、Ⅲ~Ⅳ71例。

        納入標(biāo)準(zhǔn):所有患者均經(jīng)病理檢查確診為卵巢癌;年齡>18歲;經(jīng)我院倫理委員會審核通過。

        排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他惡性腫瘤者;其他卵巢疾病者。所有患者術(shù)前均未接受放化療、激素治療等新輔助抗腫瘤治療,早期患者采用手術(shù)治療為主,晚期患者均接受新輔助化療及姑息性減瘤術(shù)。

        1.2 方法

        所有卵巢癌組織、癌旁組織標(biāo)本均采用免疫組化SP法[6]:所有病例標(biāo)本均經(jīng)石蠟包埋,切片機5 μm連續(xù)切片,溫箱烤干,切片經(jīng)常規(guī)二甲苯脫蠟,梯度酒精脫水干燥,3%過氧化氫去內(nèi)源性過氧化物酶,pH 6.0枸櫞酸緩沖液抗原修復(fù),血清工作液封閉10 min后加兔抗人nm23-H1單克隆抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)),4℃冰箱孵育過夜后加入生物素標(biāo)記二抗,二氨基聯(lián)苯(DAB)顯色,蘇木精復(fù)染,梯度乙醇脫水、二甲苯透明、干燥后封片;利用光學(xué)顯微鏡 觀察腫瘤細(xì)胞的染色情況。若細(xì)胞質(zhì)或者是細(xì)胞核內(nèi)部出現(xiàn)棕黃色的顆粒,則將nm23-H1和Ncad標(biāo)記為陽性,用符號“+”代表,若沒有觀察到棕黃色顆粒,則將其標(biāo)記為陰性,用符號“-”代表[7]。

        陽性染色為胞漿(少數(shù)為胞漿和胞核)有細(xì)小棕色顆粒沉著,陰性切片中午棕色物質(zhì)出現(xiàn);陽性程度[8]按陽性細(xì)胞所占比例分為4級:0(-)、1%~30%(+)、31%~60%(++)、>60%(+++);無病生存期指首次化療日期開始至出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)和(或)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的時間[9]。

        1.3 觀察指標(biāo)

        根據(jù)卵巢癌病理分為Ⅰ級(n=49)、Ⅱ級(n=40)、Ⅲ級(n=29),全部隨訪者98例根據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為轉(zhuǎn)移組(n=35)和無轉(zhuǎn)移組(n=63),分析nm23-H1蛋白、N-cad表達陽性率與卵巢癌病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間的關(guān)系;以陽性++級及以上為高表達(nm23-H1高表達組,n=69;Ncad高表達組,n=34)、以陽性++級為低表達(nm23-H1低表達組,n=49;N-cad低表達組,n=84),比較臨床病理特征之間的nm23-H1、N-cad表達差異和兩組間的生存率。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

        采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±SD)表示,行t檢驗或單因素方差分析;計數(shù)資料以例或率(n(%))表示,行χ2檢驗或Fisher精確概率檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 卵巢癌組織及癌旁組織中nm23-H1、N-cad蛋白表達情況

        118例卵巢癌組織中nm23-H1蛋白(見圖1-①)陽性表達率為78.81%(93/118),其中-級25例、+級24例、++級37例、+++級32例;癌旁組織nm23-H1蛋白陽性表達率為91.53%(108/118),癌組織nm23-H1蛋白陽性表達率明顯低于癌旁組織(χ2=7.548,P=0.006)。

        圖1 代表性免疫組化圖

        N-cad蛋白(見圖1-②)陽性表達率為38.98%(46/118),其中-級72例、+級11例、++級19例、+++級16例;癌旁組織N-cad陽性表達率16.10%(19/118),癌組織N-cad蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織(χ2=15.479,P<0.0001)。

        2.2 不同病理分級癌組織中nm23-H1和N-cad表達水平

        Ⅰ級卵巢癌組織nm23-H1表達總陽性率最高,N-cad總陽性率最低(P<0.05),見表1和表2。

        表1 不同病理分級癌組織中nm23-H1(n(%))

        表2 不同病理分級癌組織中N-cad表達水平(n(%))

        2.3 nm23-H1蛋白和N-cad表達與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

        隨訪40個月,獲得全部隨訪資料者98例,失訪率16.95%(20/118),其中轉(zhuǎn)移者35例,無轉(zhuǎn)移者63例;轉(zhuǎn)移者nm23-H1表達陽性率低于無轉(zhuǎn)移組(P<0.05),轉(zhuǎn)移者N-cad表達陽性率(見圖1)高于無轉(zhuǎn)移組(P<0.05),見表3。

        表3 nm23-H1和N-cad表達與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

        2.4 nm23-H1蛋白表達與卵巢癌臨床病例特征關(guān)系

        nm23-H1低表達組漿液型腺癌比例更高(P<0.05),nm23-H1低表達組和N-cad高表達組病理分級中Ⅲ級比例高、FIGO分期中Ⅲ~Ⅳ比例高(P<0.05),見表4和表5。

        表4 nm23-H1蛋白表達與卵巢癌臨床病理特征關(guān)系

        表5 N-cad蛋白表達與卵巢癌臨床病理特征關(guān)系

        2.5 生存分析

        本文研究隨訪時間自首次化療日期開始,末次隨訪日期為2018年4月,隨訪40個月。獲得全部隨訪資料者98例,nm23-H1低表達組和N-cad高表達組3年生存率更低(P<0.05),見表4。

        表5 nm23-H1和N-cad表達與生存率的關(guān)系

        3 討論

        人類nm23基因位于17號染色體長臂,該基因編碼具有二磷酸核苷激酶活性的蛋白質(zhì),對腫瘤的增殖、分化、侵襲及轉(zhuǎn)移起重要作用[10]。研究表明,nm23基因編碼的蛋白幾乎存在于所有正常細(xì)胞中,而在高分化腫瘤細(xì)胞中的表達較高,在低分化及具有高度轉(zhuǎn)移潛能的腫瘤細(xì)胞中不表達或僅有微弱表達[11]。

        既往nm23基因家族研究較多,目前已知nm23基因家族包括H1~H10等10個基因,其中nm23-H1與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[12]。E-cad是一種鈣依賴性跨膜糖蛋白,在細(xì)胞極化、細(xì)胞間黏附以及組織結(jié)構(gòu)當(dāng)中起到重要作用,E-cad的表達和分布異常與腫瘤細(xì)胞的去分化、侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)[13]。近年來研究發(fā)現(xiàn)N-cad在腫瘤發(fā)生進展中的相關(guān)作用[14]。但在卵巢癌組織中nm23-H1蛋白及N-cad表達水平的研究較少。

        本研究結(jié)果顯示,nm23-H1蛋白表達與卵巢腫瘤分化程度,卵巢癌病情進展相關(guān)。故nm23-H1的表達有利于維持細(xì)胞的正常分化,其高表達水平能夠下調(diào)卵巢腫瘤細(xì)胞的生長速率。nm23抑制基因的兩個重要作用分別是參與二磷酸鳥苷轉(zhuǎn)化,排斥腫瘤細(xì)胞微管蛋白的聚合,影響細(xì)胞骨架狀態(tài)以抑制腫瘤細(xì)胞移動;參與G蛋白調(diào)控的跨膜信息傳遞,阻斷生長信號傳導(dǎo)[15]。

        基質(zhì)金屬蛋白酶是卵巢癌敏感性標(biāo)志物,可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜來影響腫瘤細(xì)胞的侵襲和擴散[16-17]。nm23-H1基因可正向調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1mRNA與蛋白表達,負(fù)向調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-9 mRNA與蛋白表達,從而改變細(xì)胞的黏附能力,最終抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移[18]。而N-cad在卵巢癌患者中的表達水平與腫瘤發(fā)生、病理分期明顯相關(guān),這說明N-cad高表達能促進細(xì)胞的去分化,增強腫瘤病情進展。由于高表達N-cad可促進腫瘤發(fā)生EMT,使相對靜止的腫瘤細(xì)胞變?yōu)橛羞\動能力的細(xì)胞[19],因此在腫瘤轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮重要作用。

        本次結(jié)果顯示,N-cad高表達確能使卵巢癌患者預(yù)后不良風(fēng)險提高。

        綜上所述,卵巢癌組織中的nm23-H1蛋白及N-cad高表達均能影響腫瘤細(xì)胞分化、干擾臨床病情進展,從而影響卵巢癌患者的生存期。

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