張秀芳 張軍營 王 培

放化療治療在非小細胞肺癌(NSCLC)的治療過程中具有重要的作用，其能夠抑制腫瘤細胞的增殖，降低癌細胞活性，進而降低肺癌復發(fā)和轉移的風險[1]。臨床上的流行病學隨訪分析發(fā)現(xiàn)，NSCLC化療后耐藥的發(fā)生率可超過15%以上，同時隨著化療次數(shù)的增多，NSCLC化療耐藥的風險可進一步上升[2]。胰島素樣生長因子結合蛋白(IGFBP)是胰島素生長因子，其對于癌細胞膜上膜蛋白受體的結合，能夠降低癌細胞內信號通路的激活程度，抑制腫瘤細胞的活化[3]；核苷酸切除修復交錯互補基因1(ERCC1)是基因調控修復因子，其對于癌基因的切除修復作用，能夠避免癌基因激活導致的腫瘤異常轉錄的增強[4]。為了揭示IGFBP3、ERCC1的表達與NSCLC患者化療的關系，從而為臨床上NSCLC的診療提供參考，本次研究選取2017年8月至2020年2月我科實施一線化療的NSCLC患者107例，探討了IGFBP3、ERCC1在不同化療結局患者中的表達情況，并分析了IGFBP3、ERCC1對于化療敏感性的影響。

1 材料與方法

1.1 對象

選取2017年8月至2020年2月我科實施一線化療的NSCLC患者107例，所有患者符合中華呼吸學會制定的診斷標準[5]，在完成4～6個療程后，根據(jù)WHO實體瘤療效評估結果分為敏感組77例、不敏感組30例。敏感組77例，年齡44～72歲，平均(58.7±8.2)歲；男性44例、女性33例。不敏感組30例，年齡42～75歲，平均(59.4±9.4)歲；男性21例、女性9例。兩組患者就上述一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

納入標準：①患者年齡在19～75歲以內；②均為初次診斷的NSCLC患者，既往無放化療病史；③患者不愿意接受手術或不能采取手術治療：④具有影像學可測定的實體瘤；⑤本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關醫(yī)學倫理學方面的規(guī)定，研究對象知情并同意。排除標準：①合并肺結核、哮喘、慢阻肺、肺部纖維化等疾??；②長期使用糖皮質激素、免疫抑制劑；③既往手術后復發(fā)的患者、具有放化療病史；④合并其他部位的惡性腫瘤。

1.2 方法

1.2.1 一線化療方案 吉西他濱(江蘇紅豆杉藥業(yè)有限公司 批號TFJ20130101 )化療，1 000 mg/m2，第1、8天，順鉑注射液(南京揚子江藥業(yè) 批號20150312)，20 mg/m2，第1～5 d，連續(xù)治療28 d為一個周期，連續(xù)治療3個周期。

1.2.2 療效判定標準 近期療效判定依據(jù)WHO實體瘤療效評價標準，共分為四個等級：1為完全緩解(CR)、2為部分緩解(PR)、3為疾病穩(wěn)定(SD)、4為疾病進展(PD)；CR+PR患者為化療敏感。

1.2.3 指標檢測方法 取患者肘部靜脈血5 ml，并進行1 000 r/min離心10 min后，取其上清液待測。從密封袋中取出實驗的板條，然后將空白孔中加入樣品或者100 μl/孔的稀釋液，在檢測孔中加入100 μl/孔的標本，并用膠紙封閉實驗表條孔，放置于36 ℃條件下進行孵育60～90 min，用磷酸鹽緩沖液進行5次清洗，在空白對照孔中加入100 μl的生物素抗體稀釋液，檢測孔中加入100 μl的生物素抗體檢測液，然后再次用膠紙封閉實驗表條孔，放置于36 ℃條件下孵育30～60 min，空白對照孔中加入酶結合100 μl的稀釋液，檢測孔中加入酶結合100 μl的檢測液，再用膠紙封閉實驗表條孔，用磷酸鹽緩沖液進行5次清洗，加入有湖州英創(chuàng)生物科技公司生產的YSRIBIO的TMB顯色底液，避光36 ℃孵育15 min，加入終止液100 μl，并在3 min內檢測OD450值，BioTek酶標儀由美國伯騰儀器有限公司生產。

1.3 統(tǒng)計分析

2 結果

2.1 二組患者化療前的血清IGFBP3、ERCC1水平比較

經過4～6個周期的化療，其中CR 22例、PR 55例、SD 24例、PD 6例；化療敏感組患者化療前的血清IGFBP3、ERCC1水平顯著的高于不敏感組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 二組患者化療前血清IGFBP3、ERCC1水平比較

2.2 二組患者臨床病理學特征比較

化療敏感組患者與不敏感組患者TNM分期、腫瘤分化程度比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；兩組年齡、性別、吸煙、病理類型、病灶直徑、淋巴結轉移情況差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 二組患者臨床病理學特征比較(例，%)

2.3 對NSCLC患者一線化療敏感性影響的多因素分析

經Logistic回歸分析，TNM分期增高、分化程度降低是NSCLC患者采用一線化療不敏感的獨立危險因素(P<0.05)；血清IGFBP3水平升高、ERCC1水平升高可提高NSCLC患者一線化療的敏感性(P<0.05)，見表3。

表3 NSCLC患者一線化療敏感性影響的多因素分析

3 討論

NSCLC的發(fā)生，能夠導致肺癌患者總體生存時間的縮短，影響到肺癌患者的病情進展速度[6-7]。在中晚期NSCLC患者中，靜脈化療治療能夠在NSCLC生存時間的獲益或者生存率的改善方面發(fā)揮作用。不同的因素均能夠影響到NSCLC的化療結局，其中越來越多的研究關注到，分子生物學領域的相關蛋白改變，能夠在癌基因的修復、細胞內化療藥物的代謝及ATP泵的調控方面發(fā)揮作用，最終影響到一線化療方案的耐藥。鱗狀上皮癌抗原或者癌胚抗原能夠在NSCLC的診療過程中發(fā)揮作用，但鱗狀上皮細胞抗原或者癌胚抗原與NSCLC化療敏感性并無明確的關系[8]。臨床上尋找可靠而有效的復制化療評估指標，能夠在NSCLC的化療結局的預測、化療方案的制定等方面發(fā)揮作用。本次研究通過對于NSCLC患者血清中IGFBP3、ERCC1的表達分析，能夠在揭示NSCLC病情進展機理的同時，為臨床上NSCLC的診療提供定量化指標。

IGFBP3是胰島素生長調控結合蛋白家族成員，其對于癌細胞膜上糖蛋白配體的阻斷作用，能夠避免癌細胞內第二信使的激活，降低癌細胞的增殖活性。IGFBP3對于癌細胞周期的調控，能夠避免G1/S期細胞比例的紊亂，降低癌細胞的異常分裂的風險[9-10]；ERCC1是癌基因錯配修復相關成員，其對于癌基因的切除過程，能夠避免癌基因累積誘導的癌細胞DNA的擴增。ERCC1對于癌細胞內囊泡體系的激活，能夠提高靜脈化療藥物的作用時間[11]。有部分研究者探討了IGFBP在肺癌患者中的表達情況，認為在肺癌患者中IGFBP蛋白的表達陽性率明顯上升[12]，但缺乏對于IGFBP3、ERCC1的表達與肺癌化療結局的關系分析。

對于肺癌患者外周血中IGFBP3、ERCC1蛋白的表達分析研究，發(fā)現(xiàn)在化療敏感組患者中，IGFBP3、ERCC1蛋白的表達濃度明顯高于化療不敏感組，統(tǒng)計學差異顯著，表明IGFBP3、ERCC1的高表達均能夠改善肺癌的化療結局，提高化療敏感性。這分析其原因，主要由于IGFBP3、ERCC1能夠影響到化療藥物的代謝半衰期，干預到化療藥物進入腫瘤細胞內的時間，影響到了癌細胞膜上ATP泵的主動轉運過程，最終影響到了化療敏感性[13-14]。有其他研究者也發(fā)現(xiàn)，在肺癌采用順鉑為基礎的化療過程中，ERCC1高表達的患者，其化療后病情部分緩解率或者完全緩解率可超過55%以上，同時患者病程越短、遠處轉移比例越低，化療后肺癌病情改善的敏感程度越高[15]。在其他臨床病理特征的影響中，可以發(fā)現(xiàn)臨床分期的增加或者癌細胞的低分化，均能夠影響到NSCLC的化療敏感性，提示了一般性臨床特征對于NSCLC的化療結局的影響。這主要由于臨床分期的增加或者癌細胞低分化行為，能夠導致癌細胞生物學行為的惡化，加劇癌細胞對于化療藥物的排泄速度，影響到了一線靜脈化療方案的敏感性。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)淋巴結轉移或者腫瘤病理類型對于肺癌化療結局的影響，排除了癌細胞發(fā)生來源對于化療結局的影響。危險因素分析也可見，TNM分期增高、分化程度降低、血清IGFBP3水平降低、ERCC1水平降低是NSCLC患者采用一線化療不敏感的獨立危險因素，臨床上對于具有相關高危因素的患者，或者合并化療前IGFBP3、ERCC1明顯上升的患者，可以通過聯(lián)合二線化療方案或者靶向治療，從而改善NSCLC的化療結局。

綜上所述，IGFBP3、ERCC1蛋白水平的上升，能夠提高NSCLC一線化療方案的敏感性，TNM分期增高、分化程度降低、血清IGFBP3水平降低、ERCC1水平降低是NSCLC患者采用一線化療不敏感的獨立危險因素。