沙金平 徐 赟 刁云輝

胃癌是起源于胃粘膜上皮的惡性腫瘤，該病常隱匿發(fā)病，無特異性癥狀，患者多表現(xiàn)為惡心、嘔吐等消化不良癥狀[1]。近些年，有研究發(fā)現(xiàn)，特異AT序列結(jié)合蛋白2(Special AT-rich sequence-binding protein 2，SATB2)、叉頭框轉(zhuǎn)錄因子1(forkhead box k1，F(xiàn)OXK1)與乳腺癌、大腸癌、結(jié)直腸癌的發(fā)生密切相關(guān)，而胃腺癌與結(jié)直腸癌的形態(tài)學(xué)較為相似，免疫表型也存在共同點(diǎn)[2]，但目前有關(guān)其與胃癌的關(guān)系尚不可知，故本研究分析癌組織FOXK1、SATB2在胃癌組織中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，旨在探究其對(duì)胃癌的診斷價(jià)值及預(yù)后的相關(guān)性，為胃癌的早期診斷及治療提供理論參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

以2013年7月至2015年7月在我院就診的胃癌患者153例為研究對(duì)象，其中男性90例，女性63例；年齡46～78歲，平均(63.27±6.39)歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者91例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者64例；分化程度：高分化51例、中分化62例、低分化40例；TNM分期：Ⅰ期46例、Ⅱ期68例、Ⅲ期21例、Ⅳ期18例；組織學(xué)分型：管狀腺癌69例、印戒細(xì)胞癌41例、黏液腺癌25例、乳頭狀腺癌18例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①符合《胃癌規(guī)范化診療指南(試行)》[3]關(guān)于胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者均知曉本研究的研究?jī)?nèi)容，且已簽署同意書；③經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為胃癌患者；④行手術(shù)治療者。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①嚴(yán)重肝腎功能異常者；②其他原發(fā)性腫瘤患者；③臨床資料缺失者；④入組前已接受抗腫瘤治療者；⑤嚴(yán)重感染性疾病患者；⑥嚴(yán)重免疫缺陷疾病患者。

1.4 方法

取距腫瘤邊緣5 cm的癌旁組織(經(jīng)快速病理檢查確定為正常組織，且切緣腫瘤細(xì)胞存留為陰性)經(jīng)胃鏡活檢切除后放置于-80 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

FOXK1表達(dá)情況檢測(cè)：取備用標(biāo)本應(yīng)用10%甲醛溶液固定，然后分別應(yīng)用95%乙醇及無水乙醇浸泡12 h、2 h，用石蠟包埋后切片，采用蘇木精-伊紅進(jìn)行染色染色，在高倍鏡下分析FOXK1表達(dá)情況，根據(jù)顯色及陽性細(xì)胞率進(jìn)行量化評(píng)分。判斷標(biāo)準(zhǔn)[4-5]：顯色：0分：不顯色，1分：淺黃色，2分：黃色，3分：棕黃色，4分：棕褐色；陽性細(xì)胞率：0分：無陽性細(xì)胞，1分：陽性細(xì)胞數(shù)占視野的25%以下，2分：陽性細(xì)胞數(shù)占視野的25%～50%，3分：陽性細(xì)胞數(shù)占視野的50%～75%，4分：占視野的75%以上，如顯色+陽性細(xì)胞率得分>3分即為陽性表達(dá)。

SATB2表達(dá)情況檢測(cè)：取備用組織切片后在60 ℃下烘烤2 h，然后應(yīng)用枸緣酸鈉修復(fù)10 min，冷卻后在3%的過氧化氫下浸泡，加PBS水洗，在4 ℃環(huán)境下孵育過夜，再次用PBS沖洗后滴加二抗，用二聯(lián)苯胺進(jìn)行顯色處理，然后用蘇木精復(fù)染、脫水后封固。SATB2表達(dá)于細(xì)胞核，故可根據(jù)顯色及陽性細(xì)胞率量化評(píng)分來判斷表達(dá)情況，判斷標(biāo)準(zhǔn)同F(xiàn)OXK1檢測(cè)。

1.5 觀察指標(biāo)

①比較胃癌組織及癌旁組織FOXK1、SATB2表達(dá)情況。②收集患者的臨床資料，分析患者胃癌組織FOXK1、SATB2表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，采用logistics回歸分析影響胃癌患者FOXK1、SATB2表達(dá)的相關(guān)因素。③采用電話隨訪的方式對(duì)患者術(shù)后生存情況進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為術(shù)后6個(gè)月、1年、2年、3年、5年，分析胃癌患者FOXK1、SATB2表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織及癌旁組織中FOXK1、SATB2陽性表達(dá)率比較

胃癌組織中FOXK1、SATB2陽性表達(dá)率均高于癌旁組織(P<0.05)，見表1。

表1 胃癌組織及癌旁組織中FOXK1、SATB2陽性表達(dá)率比較/%

2.2 FOXK1、SATB2表達(dá)對(duì)胃癌的診斷價(jià)值分析

FOXK1、SATB2表達(dá)聯(lián)合檢測(cè)診斷胃癌的AUC大于單獨(dú)檢測(cè)(P<0.05)，見表2、圖1。

表2 FOXK1、SATB2表達(dá)對(duì)胃癌的診斷價(jià)值分析

圖1 FOXK1、SATB2陽性表達(dá)診斷胃癌的ROC曲線分析

2.3 胃癌患者FOXK1、SATB2表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

FOXK1陽性在腫瘤大小≥5 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期、分化程度高方面的例數(shù)比例高于FOXK1陰性組，SATB2陽性在腫瘤大小≥5 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度高方面的例數(shù)比例高于SATB2陰性組(P<0.05)，見表3。

表3 FOXK1、SATB2表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

2.4 影響胃癌患者FOXK1、SATB2表達(dá)的危險(xiǎn)因素分析

腫瘤大小≥5 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期、分化程度高是影響FOXK1表達(dá)的危險(xiǎn)因素，腫瘤大小≥5 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度高是影響SATB2表達(dá)的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表4。

表4 影響胃癌患者FOXK1、SATB2表達(dá)的危險(xiǎn)因素分析

2.5 FOXK1、SATB2表達(dá)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系分析

FOXK1陽性組生存率低于FOXK1陰性組，SATB2陽性組生存率低于SATB2陰性組(P<0.05)，見表5、圖2。

圖2 胃癌患者中FOXK1、SATB2表達(dá)的生存曲線分析

表5 FOXK1、SATB2表達(dá)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系分析/%

3 討論

FOXO1是FOX家族中的一員，其參與了蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化過程，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和代謝具有調(diào)控作用[6]。孫宇等[7]報(bào)道指出，正常機(jī)體的FOXO1陽性表達(dá)率較低，而乳腺癌患者存在過表達(dá)的現(xiàn)象，提示其可能與腫瘤的發(fā)生過程有關(guān)。FOXO1可與轉(zhuǎn)錄因子蛋白結(jié)合，抑制DNA損傷誘導(dǎo)基因的表達(dá)，降低DNA修復(fù)能力，易使細(xì)胞發(fā)生突變[8]。FOXO1正常情況下均在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，但信號(hào)通路發(fā)生變化后后，F(xiàn)OXO1轉(zhuǎn)移至細(xì)胞質(zhì)，影響細(xì)胞的DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄過程。導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織的FOXK1陽性表達(dá)率高于癌旁組織，表明胃癌組織中存在FOXK1過表達(dá)的現(xiàn)象。

SATB2位于2號(hào)染色體上，既是順序特異性DNA結(jié)合蛋白，也是組織特異性的 核基質(zhì)結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)錄因子，參與了染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的形成和組織特異性基因的表達(dá)調(diào)控，與多種器官分化密切相關(guān)[10]。有研究證實(shí)，SATB2蛋白參與了骨骼的形成及神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程[11]。徐衛(wèi)國(guó)等[12]研究指出，其肽鏈一致性較高的SATB2基因過表達(dá)可促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移，提示其可能也與某類腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織的SATB2陽性表達(dá)率高于癌旁組織，表明SATB2在胃癌組織中存在高表達(dá)的現(xiàn)象，提示其可能與胃癌的發(fā)生過程有關(guān)，或可通過檢測(cè)SATB2表達(dá)對(duì)胃癌進(jìn)行初步診斷。為此，本研究進(jìn)行了進(jìn)一步分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FOXK1、SATB2表達(dá)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌具有較高的診斷價(jià)值，故可通過檢測(cè)胃部組織中的FOXK1、SATB2表達(dá)情況判斷其是否患有胃癌。

胃癌在我國(guó)各種惡性腫瘤的發(fā)病率中居于首位，患者多表現(xiàn)為上腹部隱痛、噯氣等癥狀，易于胃部良性疾病混淆，該病早期預(yù)后較好，但較多患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)已至中晚期，延誤了最佳治療時(shí)機(jī)，但是死亡率升高[13-14]。田浩等[15]研究指出，大腸癌患者存在SATB2表達(dá)異常的現(xiàn)象，且其表達(dá)情況與分化程度呈正相關(guān)。SATB是一種重要的核基質(zhì)結(jié)合蛋白，在轉(zhuǎn)錄、調(diào)控和染色質(zhì)重組等過程中發(fā)揮重要作用，可與核基質(zhì)附著區(qū)結(jié)合改變?nèi)旧|(zhì)構(gòu)象從而發(fā)揮調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄功能，其過表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞增殖及癌細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[16-17]。本研究結(jié)果顯示，腫瘤大小≥5 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度高是影響FOXK1、SATB2表達(dá)的危險(xiǎn)因素，表明癌細(xì)胞增殖分化及轉(zhuǎn)移會(huì)導(dǎo)致胃癌組織的FOXK1、SATB2過表達(dá)。而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理組織分化程度高會(huì)影響患者預(yù)后，因而FOXK1、SATB2表達(dá)可能與預(yù)后有關(guān)。Chen等[18]研究指出，SATB2過表達(dá)提高患者術(shù)后3年死亡率。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXK1陽性及SATB2陽性表達(dá)患者的預(yù)后較差，這可能與FOXK1、SATB2表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度有關(guān)，F(xiàn)OXK1、SATB2過表達(dá)或會(huì)促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、周圍組織浸潤(rùn)，進(jìn)而影響患者預(yù)后。

綜上所述，胃癌組織的FOXK1、SATB2陽性表達(dá)率均較高，腫瘤大小≥5 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期、分化程度高是影響胃癌組織FOXK1、SATB2的危險(xiǎn)因素，并且FOXK1、SATB2陽性表達(dá)患者預(yù)后較差。