呂文偉 魏澎濤

前列腺癌是常見(jiàn)的男性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)病率逐年上升[1]。前列腺癌的治療方案有手術(shù)治療和激素治療，患者治療后仍易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[2]。miRNA是一種內(nèi)源性非編碼小分子單鏈RNA，可以通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控蛋白質(zhì)的表達(dá)[3]。miR-34b、miR-320a是目前已知的可能與前列腺癌相關(guān)的兩條MicroRNA，目前很少有miR-34b、miR-320a與前列腺癌病情及預(yù)后的相關(guān)性研究。因此，本次旨在分析前列腺癌組織中miR-34b、miR-320a的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，為臨床診斷前列腺癌提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年3月至2017年2月本院收治的前列腺癌患者80例作為觀察組，另選40例良性前列腺增生患者作為對(duì)照組。觀察組患者年齡50～70歲，平均年齡為(65.1±4.8)歲，對(duì)照組患者50～69歲，平均年齡為(64.9±4.7)歲，兩組年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。手術(shù)切取前列腺癌患者癌組織及癌旁組織各80份，切取良性前列腺增生患者增生組織40份。納入標(biāo)準(zhǔn)：①前列腺癌患者均符合2014年前列腺癌指南中診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②所有患者均知情同意，配合隨訪；③認(rèn)知功能正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重心肝腎功能不全、合并其他惡性腫瘤、糖尿病患者。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且患者和家屬均自愿參加實(shí)驗(yàn)并簽署知情同意書(shū)。隨訪3年，定期為患者進(jìn)行直腸指檢、血清PSA、B超等檢查。根據(jù)PSA的倍增時(shí)間來(lái)判斷隨訪患者的病情。

1.2 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)組織miR-34b、miR-320a的表達(dá)

將離體的前列腺癌組織、癌旁組織、良性前列腺增生組織置于液氮中速凍，然后放置-80 ℃冰箱中備用。應(yīng)用RNAiso PLUS試劑盒(上海百賽生物技術(shù)有限公司)提取細(xì)胞總RNA，以總RNA為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。miR-34b定量引物上游序列為5’-CAATCACTAACTCCACTGCCAT-3’，下游序列為5’-TGGTGTCGTGGA GTCG-3’。miR-320a定量引物上游序列為5’-ACACTCCAGCTGGGAAAAGCUGGGUUGAGGA-3’，下游序列為5’-TGGTGTCGTGGAGTCG-3’。RT-PCR總反應(yīng)體系為 20 μl，其中c DNA，引物，Master Mix 試劑和純水。所有反應(yīng)均在PCR儀完成，每個(gè)樣本重復(fù)3次。以 2-ΔΔCt代表目的基因的相對(duì)表達(dá)量，計(jì)算公式為ΔCt=Ct目的基因-CtU6，ΔΔCt =ΔCt癌組織-ΔCt癌旁組織。分別計(jì)算各組織中miR-320a、miR-34b的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 臨床病理特征評(píng)價(jià)

將所有患者前列腺組織標(biāo)本石蠟切片交由本院病理科醫(yī)生進(jìn)行Gleason評(píng)分和TNM病理分期，組織學(xué)分級(jí)依據(jù)前列腺癌Gleason分級(jí)[5]。臨床分期按Jewett.whitmore分期標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組miR-34b、miR-320a表達(dá)量對(duì)比

觀察組中miR-34b、miR-320 a相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組miR-34b、miR-320a相對(duì)表達(dá)量對(duì)比

2.2 miR-320、miR-34b與前列腺癌臨床參數(shù)的相關(guān)性

前列腺癌患者組織中miR-320a、miR-34b的表達(dá)與年齡、初始PSA無(wú)關(guān)，與Gleason評(píng)分、腫瘤大小、腫瘤分期、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 miR-320a、miR-34b的表達(dá)與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 觀察組不同預(yù)后患者miR-34b、miR-320a表達(dá)情況

隨訪36個(gè)月，至2020年2月2日，前列腺癌患者死亡36例，存活44例。死亡組miR-320a、miR-34b表達(dá)水平顯著低于存活組(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 觀察組不同預(yù)后患者miR-34b、miR-320a表達(dá)情況

3 討論

miRNA是一類(lèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，其轉(zhuǎn)錄與一般mRNA不同，并不翻譯成蛋白質(zhì)。癌癥的發(fā)生與多種致癌基因和抑癌基因有關(guān)，而miRNA在腫瘤的發(fā)生中類(lèi)似于致癌基因和抑癌基因，可通過(guò)與特定mRNA結(jié)合來(lái)調(diào)控基因的表達(dá)，因此miRNA被一些臨床研究者視為潛在的腫瘤標(biāo)志物[6-7]。miRNA具有高度的進(jìn)化保守性，在血清和血漿中的存在形式較為穩(wěn)定，可作為潛在的血清標(biāo)志物應(yīng)用于腫瘤的診斷中[8-9]。miR-34b、miR-320a都是與前列腺癌可能有一定聯(lián)系的miRNA，臨床中針對(duì)二者表達(dá)水平與前列腺癌的病理特征和預(yù)后的研究報(bào)道較少[10]。本次研究探討了前列腺癌組織中miR-34b、miR-320a的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，以期為臨床診斷提供新思路。

miR-34b為1種抑癌基因，可通過(guò)多種通路調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和繁殖。本研究結(jié)果表明，前列腺癌患者miR-34b、miR-320 a表達(dá)水平較健康對(duì)照患者明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。呂曉婷等[11]通過(guò)研究上調(diào)miR-320a對(duì)注射用核糖核酸Ⅱ誘導(dǎo)的肝癌 Bel-7402細(xì)胞凋亡和遷移的影響，發(fā)現(xiàn)與正常細(xì)胞相比，腫瘤表達(dá)的miR-320a表達(dá)水平明顯下調(diào)，與本次研究結(jié)果類(lèi)似。前列腺癌患者中組織中miR-320a、miR-34b的表達(dá)與年齡、初始PSA無(wú)關(guān)，與Gleason評(píng)分、腫瘤大小、腫瘤分期、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；死亡組miR-320a、miR-34b表達(dá)水平顯著低于存活組。分析其原因可能有：①前列腺癌的進(jìn)展與SOX4基因有著緊密的聯(lián)系，miR-320a可作用于SOX4的非翻譯區(qū)[12]。miR-320a表達(dá)量增多時(shí)可抑制細(xì)胞的增殖和發(fā)育，從而抑制前列腺癌腫瘤的生長(zhǎng)，相對(duì)表達(dá)量越低，腫瘤體積越大。②miR-34家族可通過(guò)調(diào)節(jié)下游靶基因的表達(dá)抑制癌細(xì)胞的作用。miR-34在多種腫瘤中表達(dá)水平均下降，其機(jī)制可能與基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化有關(guān)。在前列腺癌患者的組織中的表達(dá)水平明顯低于非前列腺癌者，可能與DNA損傷的自我修復(fù)有關(guān)[13]。miR-34b是調(diào)節(jié)P53的重要分子，P53的異?？梢餸iR-34b表達(dá)水平下降，進(jìn)而導(dǎo)致miR-34b下游靶基因水平下降，導(dǎo)致腫瘤的增值。

總之，miR-34b、miR-320a低表達(dá)的前列腺癌患者病情更易惡化，患者預(yù)后差。