艾 敏 高 嵐

口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)具有生長迅速、浸潤性強、淋巴結(jié)易轉(zhuǎn)移等特點，發(fā)生率占頜面部惡性腫瘤的90.0%及以上，全世界每年新增病例>30萬，年死亡數(shù)可達14.5萬例，5年生存率<50.0%[1-2]。故早期發(fā)現(xiàn)OSCC并準確評估預(yù)后是當前提高患者生存質(zhì)量的關(guān)鍵。目前臨床尚未完全明確OSCC病理機制，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，免疫細胞及炎性反應(yīng)作為腫瘤微環(huán)境中重要組成部分，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[3-4]。白細胞介素(IL)-17為Th17主要分泌細胞因子，在炎癥相關(guān)的腫瘤疾病中扮演重要角色，外周血IL-17與OSCC患者臨床病理特征關(guān)系現(xiàn)已得到臨床證實[5]，但關(guān)于血清IL-17與OSCC預(yù)后關(guān)系仍缺乏相關(guān)報道。IL-24不僅可誘導(dǎo)癌細胞凋亡、抑制腫瘤血管生成及癌細胞浸潤、轉(zhuǎn)移，還能提高放、化療敏感性，在抑制乳腺癌、非小細胞肺癌等多種腫瘤細胞生長方面均已得到臨床證實[6-7]，但其在OSCC中的具體機制有待進一步深入研究?；诖?，本研究綜合探討血清IL-17、IL-24對OSCC的診斷價值，以期為臨床個性化診療提供循證指導(dǎo)。具體分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2019年5月我院61例OSCC患者作為研究組，另取73例癌前病變患者作為對照組。2組年齡、性別、吸煙史、飲酒史、基礎(chǔ)疾病史等基本資料均衡可比(P>0.05)，見表1。

表1 2組一般資料比較

1.2 選取標準

1.2.1 納入標準 ①研究組均符合《口腔頜面部惡性腫瘤治療指南》[8]中相關(guān)標準，并經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實為OSCC；②對照組經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為癌前病變；③本研究符合我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準 ①處于妊娠期或哺乳期等特殊時期女性；②合并食管癌、胃癌等其他惡性腫瘤者；③肝腎等重要臟器器質(zhì)性病變者；④既往有口腔手術(shù)史者；⑤先天發(fā)育異常者；⑥精神行為異常者。

1.3 方法

空腹取6 ml肘靜脈血，1000×g離心20 min(離心半徑10 cm)，分離取血清，置于-70 ℃低溫保存。(1)采用酶標儀以酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清IL-17、IL-24水平，具體操作方法：設(shè)標準管8管，各孔中均加入50 μl生物素化抗體工作液，酶標板覆膜，37 ℃孵育1.5 h，加樣時注意減少碰觸酶標板底部孔壁，輕晃混勻，防止氣泡產(chǎn)生，加樣時間≤10 min。甩干孔內(nèi)液體，各孔均加入350 μl洗滌液，浸泡1～2 min，吸去或甩掉酶標板內(nèi)液體，拍干。重復(fù)上述步驟3次。各孔均加入100 μl酶結(jié)合物工作液，蓋上覆膜，37 ℃溫育30 min。棄去孔內(nèi)液體，甩干，重復(fù)洗板步驟后加入90 μl底物溶液，覆膜，37 ℃避光孵育15 min至標準孔產(chǎn)生明顯梯度時終止。每孔加入50 μl終止液終止反應(yīng)。立刻以酶標儀測量計算450 nm波長各孔光密度(OD值)，以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在雙對數(shù)坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)標準曲線。(2)采用微粒子化學(xué)發(fā)光儀以化學(xué)發(fā)光法檢測血清Cyfra 21-1、SCCAg水平，儀器購自美國雅培公司，試劑盒購自安徽經(jīng)科生物技術(shù)有限公司，嚴格按照儀器、試劑盒說明書操作。

1.4 觀察指標

(1)比較2組血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg水平。(2)比較研究組不同臨床病理特征患者血清IL-17、IL-24水平。(3)分析血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg對OSCC的診斷價值。(4)統(tǒng)計OSCC患者1年生存率。(5)比較不同血清IL-17、IL-24水平OSCC患者1年生存率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg水平

研究組血清IL-17、Cyfra 21-1、SCCAg水平高于對照組，IL-24水平低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 2組血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg水平

2.2 OSCC血清IL-17、IL-24與臨床病理特征關(guān)系

OSCC不同分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清IL-17、IL-24水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 OSCC患者血清IL-17、IL-24水平與臨床病理特征關(guān)系

2.3 血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg診斷OSCC價值

ROC顯示，診斷OSCC價值的AUC Cyfra 21-1>SCCAg>IL-17>IL-24，當Cyfra 21-1 Cut-off值為2.07 ng/ml時，診斷敏感性及特異性分別為68.85%、84.93%。見表4，圖1。

表4 血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg診斷OSCC價值

圖1 ROC曲線

2.4 OSCC患者1年生存率

隨訪1年，61例OSCC患者共脫落2例，生存率為84.75%(50/59)，生存曲線見圖2。

圖2 生存曲線

2.5 不同血清IL-17、IL-24水平OSCC患者1年生存率比較

圖3 生存曲線

3 討論

3.1 研究背景

相關(guān)研究指出，OSCC的形成與浸潤、炎性刺激及反應(yīng)損傷修復(fù)密切相關(guān)[9]。同時，多項流行病學(xué)和分子生物學(xué)研究也表示[10-11]，炎癥反應(yīng)可大大提高癌癥發(fā)生風險，而慢性炎癥可誘導(dǎo)組織持續(xù)損傷，改變組織微環(huán)境中存在的炎癥細胞及細胞因子，并與腫瘤細胞遷移、侵襲、增殖有關(guān)。因此，早期評估OSSC患者免疫炎癥反應(yīng)是目前OSSC臨床研究重點。

3.2 血清IL-17水平在OSCC患者中的表達及對預(yù)后的預(yù)測價值

IL-17具有強大促炎作用及誘導(dǎo)中性粒細胞功能，其與腫瘤的研究現(xiàn)已成為臨床新熱點?，F(xiàn)有資料表明[12-13]，乳腺癌、原發(fā)性肝癌患者血清IL-17水平過度升高，并隨病情進展而出現(xiàn)明顯變化。而本研究通過酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測可知，血清IL-17水平在OSCC患者中呈異常高表達，并隨分化程度、臨床分期增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移出現(xiàn)增長趨勢，與丁麗娜等[14]研究結(jié)果具有一致性，這可能歸因于以下機制：①IL-17可誘導(dǎo)纖維細胞、間質(zhì)細胞分泌促血管生成因子，上調(diào)細胞間粘附分子表達，通過IL-17/血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)通路，刺激轉(zhuǎn)化生長因子β等其它促血管生成因子產(chǎn)生，進而加快腫瘤新生血管形成[15-16]；②IL-17可刺激腫瘤細胞及腫瘤微環(huán)境中樹突狀細胞、成纖維細胞、內(nèi)皮細胞等過度釋放IL-6，而IL-6反過來可激活致癌信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，刺激轉(zhuǎn)錄激活因子3產(chǎn)生，從而進一步上調(diào)促生長因子、促血管生成基因的表達，促進腫瘤生長，加快腫瘤轉(zhuǎn)移、分化。初步推斷，血清IL-17在OSCC發(fā)展中起到一定作用。進一步經(jīng)ROC曲線分析可知，與血清Cyfra 21-1、SCCAg等常規(guī)腫瘤標志物相比，當cut-off值設(shè)定為740.72 pg/ml時，血清IL-17診斷OSCC的特異性可達75.34%，說明血清IL-17對OSCC早期診斷具有一定價值，有望成為診斷OSCC的特異指標，為臨床診治提供新靶點。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，血清IL-17水平過度升高可能降低OSCC患者生存率，主要與血清IL-17水平升高干擾正常免疫系統(tǒng)功能，影響治療效果存在一定聯(lián)系，推測早期予以有效干預(yù)，控制血清IL-17表達可能為改善OSCC患者預(yù)后提供新途徑，但具體機制有待今后研究進一步深入。

3.3 血清IL-24水平與OSCC患者臨床病理特征的相關(guān)性及對預(yù)后的預(yù)測價值

IL-24具有廣譜抗瘤活性，可抑制多種腫瘤細胞體內(nèi)外增殖能力，刺激機體抗腫瘤免疫反應(yīng)功能，發(fā)揮雙重抗腫瘤作用[17-18]。本研究通過對比表明，OSCC患者血清IL-24水平低于癌前病變患者，與史亦南[19]研究結(jié)果不一致，這可能是由于本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清IL-24，而其則采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測同一患者腫瘤組織。提示血清IL-24作為一種新型抑癌基因，其水平過度下調(diào)可能參與OSCC的發(fā)生、發(fā)展過程。進一步經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，血清IL-24與OSCC患者分化程度存在正相關(guān)關(guān)系，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在負相關(guān)關(guān)系，分析機制在于，血清IL-24水平上調(diào)不僅可抑制腫瘤iNOS表達，調(diào)控腫瘤細胞周期，還能抑制IL-6、腫瘤壞死因子-α等炎癥因子表達，刺激機體產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答，反之，血清IL-24水平下降一定程度則會激活腫瘤基因，促進腫瘤細胞生長。最后，通過KM曲線可知，血清IL-24水平升高可能提高OSCC患者1年生存率，機制可能在于血清IL-24水平高表達通過調(diào)控MAPK/ERK、PI3K-AKT、NF-κB、JNK及AP-1等多條信號通路，可上調(diào)促凋亡蛋白Bax基因的表達，活化Caspase-3，從而阻斷腫瘤細胞周期，進一步誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，控制腫瘤細胞增長。由此可見，早期檢測血清IL-24水平，有望為OSCC治療、預(yù)后評估提供理論依據(jù)。

綜上可知，血清IL-17、IL-24水平均在OSCC患者中呈異常表達，早期檢測可為臨床OSCC診斷、實施個性化治療、評估預(yù)后提供新思路。