郭合伏 馮志廣 王居峰

顱內(nèi)膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，是神經(jīng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)的原發(fā)性惡性腫瘤，其發(fā)病率約占顱內(nèi)惡性腫瘤30%，其中以多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤居多[1-2]。該腫瘤的臨床特征、組織及基因均存在異質(zhì)性，通?；颊哳A(yù)后較差，5年生存率低于10%[3]。骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是近年來(lái)在多種腫瘤患者組織及血清中發(fā)現(xiàn)的分泌型的磷酸化糖蛋白，相關(guān)研究表明：通過(guò)上調(diào)OPN的表達(dá)可促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，表明其參與膠質(zhì)瘤的發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程[4-5]。Rac1是重要肌動(dòng)蛋白骨架調(diào)控蛋白，可誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白骨架重組并產(chǎn)生片狀偽足，從而促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)：Rac1在乳腺癌、結(jié)腸癌及卵巢癌中表達(dá)均明顯增高，且其高表達(dá)與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而在膠質(zhì)瘤中，其表達(dá)水平隨膠質(zhì)瘤惡性程度增加升高[6]。本研究對(duì)顱內(nèi)膠質(zhì)瘤患者組織OPN和Rac1表達(dá)情況進(jìn)行研究，并進(jìn)一步分析其與患者生存期的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年3月至2019年3月中原油田濮東醫(yī)院收治的60例行膠質(zhì)瘤切除術(shù)的顱內(nèi)膠質(zhì)瘤患者為膠質(zhì)瘤組，其中WHO 1級(jí)11例，2級(jí)16例，3級(jí)26例，4級(jí)7例。另隨機(jī)選擇同期65例行顱內(nèi)減壓術(shù)的非惡性腫瘤患者為正常對(duì)照組。2組患者一般資料見(jiàn)表1，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可進(jìn)行比較。本研究經(jīng)本院倫理學(xué)委員會(huì)審查，所有患者均知情同意本研究。

表1 患者一般資料

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①顱內(nèi)膠質(zhì)瘤組均經(jīng)影像學(xué)MRI及病理學(xué)檢查確診為顱內(nèi)膠質(zhì)瘤；②均為首次手術(shù)；③未經(jīng)過(guò)放化療及免疫治療；④均順利完成手術(shù)并出院。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并其他惡性腫瘤患者；②中途退出本研究患者；③具有免疫功能障礙患者；④罹患可能對(duì)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果造成影響的疾病患者等。

1.3 方法

1.3.1 OPN和Rac1表達(dá)的檢測(cè) 取患者膠質(zhì)瘤術(shù)后切除的病灶組織樣本，正常對(duì)照組顱內(nèi)減壓術(shù)取術(shù)后切除的部分正常腦組織樣本，研磨為組織勻漿后，采用人OPN和Rac1酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒(雙抗體夾心)檢測(cè)患者組織中OPN和Rac1的含量，于反應(yīng)體系中加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37 ℃反應(yīng)30 min，洗板5次后加入酶標(biāo)試劑，繼續(xù)37 ℃反應(yīng)30 min，然后加入顯色液A、B，37 ℃顯色10 min，加入終止液，15 min內(nèi)讀取OD值，計(jì)算OPN和Rac1水平。

1.3.2 生存期統(tǒng)計(jì)及分組 患者出院后隨訪至2020年4月1日，期間每周通過(guò)微信、電話以及上門(mén)訪問(wèn)等方式了解患者預(yù)后情況，并對(duì)其生存期情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。然后將60例膠質(zhì)瘤患者根據(jù)生存期長(zhǎng)短排序平均分為2組：長(zhǎng)期生存組和短期生存組，各30例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組患者組織中OPN和Rac1的含量比較

與正常對(duì)照組相比，膠質(zhì)瘤組患者組織中OPN含量和Rac1含量均顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2組患者組織中OPN和Rac1的含量比較

2.2 膠質(zhì)瘤患者生存期情況

入選膠質(zhì)瘤患者均順利完成顱內(nèi)膠質(zhì)瘤相關(guān)手術(shù)，隨訪至2020年4月1日，平均隨訪時(shí)長(zhǎng)(23.17±3.88)個(gè)月，患者生存率36.66%(22/60)。見(jiàn)圖1。

圖1 膠質(zhì)瘤患者生存函數(shù)圖

2.3 不同生存期患者組織中OPN和Rac1的含量比較

與長(zhǎng)期生存組相比，短期生存組膠質(zhì)瘤患者組織中OPG和RANKL的含量均顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同生存期患者組織中OPN和Rac1的含量比較

2.4 OPN和Rac1含量與患者生存期的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示：膠質(zhì)瘤患者生存期與其組織中OPN和Rac1含量均呈顯著負(fù)相關(guān)，即患者膠質(zhì)瘤組織中OPN和Rac1含量均隨其生存期縮短而顯著增加(γ=-0.832、-0.774，P均<0.05)。

3 討論

膠質(zhì)瘤為神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤，目前臨床上其主要治療手段為手術(shù)聯(lián)合放、化療等，但因其侵襲性較強(qiáng)的特點(diǎn)，因此患者治療后復(fù)發(fā)率較高[7]。目前該腫瘤發(fā)生、進(jìn)展的具體機(jī)制目前仍未完全明確，相關(guān)內(nèi)容的進(jìn)一步探討對(duì)于該腫瘤患者預(yù)后評(píng)估及改善具有重要意義[8]。

相關(guān)研究表明：在神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)展過(guò)程中，OPN及其他相關(guān)通路蛋白(如：Notch-1)介導(dǎo)血管生成和神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的維持，并在新血管生成邊界的星形膠質(zhì)細(xì)胞中占主導(dǎo)地位，但這些分子與膠質(zhì)瘤之間的關(guān)系尚不清楚[9-10]。細(xì)胞遷移對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移是必需的，包括Rac1在內(nèi)的小GTP酶的Rho家族的激活在轉(zhuǎn)移級(jí)聯(lián)反應(yīng)的初始步驟中占有重要地位，并且在肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重排和細(xì)胞遷移中起著重要作用，相關(guān)研究顯示：Rac1可能通過(guò)調(diào)節(jié)皮層肌動(dòng)蛋白進(jìn)而影響細(xì)胞片狀偽足的大小來(lái)促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，因此抑制Rac1是治療膠質(zhì)瘤的關(guān)鍵所在[6，11-12]。

本研究選擇2016年3月至2019年3月中原油田濮東醫(yī)院收治的60例行膠質(zhì)瘤切除術(shù)的顱內(nèi)膠質(zhì)瘤患者為膠質(zhì)瘤組，另隨機(jī)選擇同期65例行顱內(nèi)減壓術(shù)的非惡性腫瘤患者為正常對(duì)照組，檢測(cè)顱內(nèi)膠質(zhì)瘤患者組織中OPN和Rac1表達(dá)，并分析二者水平與患者生存期的相關(guān)性，結(jié)果表明：與正常對(duì)照組相比，膠質(zhì)瘤組患者組織中OPN含量和Rac1含量均顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，表明OPN和Rac1的高表達(dá)與膠質(zhì)瘤的發(fā)生密切相關(guān)。本研究中入選膠質(zhì)瘤患者均順利完成顱內(nèi)膠質(zhì)瘤相關(guān)手術(shù)，平均隨訪時(shí)長(zhǎng)(23.17±3.88)個(gè)月，患者生存率為36.66%(22/60)，與相關(guān)研究結(jié)果較為接近[13-14]。

本研究將患者根據(jù)生存期情況進(jìn)行排序，并均分為2組：長(zhǎng)期組和短期組，分析其膠質(zhì)瘤組織勻漿中OPN和Rac1的含量，結(jié)果表明：與長(zhǎng)期生存組相比，短期生存組膠質(zhì)瘤患者組織中OPN和Rac1的含量均顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，相關(guān)性分析結(jié)果顯示：膠質(zhì)瘤患者生存期與其組織中OPN和Rac1 含量均呈顯著負(fù)相關(guān)(P均<0.05)。表明：膠質(zhì)瘤患者病灶組織中OPN和Rac1的表達(dá)水平與其術(shù)后生存期具有關(guān)聯(lián)性，其表達(dá)水平可在一定程度上對(duì)患者手術(shù)及治療預(yù)后情況進(jìn)行預(yù)測(cè)。另外，本研究不足之處在于未對(duì)不同病理特征或WHO分級(jí)膠質(zhì)瘤患者OPN和Rac1的表達(dá)水平進(jìn)行深入分析，未能進(jìn)一步明確這兩個(gè)指標(biāo)在膠質(zhì)瘤發(fā)生進(jìn)展中的具體機(jī)制。

總而言之，OPN和Rac1參與顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的發(fā)生和進(jìn)展，并與患者生存期及預(yù)后密切相關(guān)，可作為評(píng)估患者預(yù)后的參考指標(biāo)。