李國濤 朱豫萌 張 盼 張國強

快速增殖原發(fā)性肝細胞癌的主要生物學特征之一,是導致患者預后差的重要原因。研究肝細胞癌細胞快速增殖的機制對改善患者預后具有重要的臨床意義。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類不編碼蛋白的RNA，廣泛存在于真核生物中，其作用是調(diào)控基因表達。了解lncRNA的基因調(diào)控方式，研究疾病發(fā)生機制，為臨床治療有望提供新的靶點[1-2]。目前l(fā)ncRNA成為研究癌癥發(fā)病機制的熱點，本文研究肝細胞癌組織以及肝細胞癌患者血清中l(wèi)incRNA-UFC1的表達水平，以期為臨床診斷、指導治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2016年1月至2019年1月，選擇在醫(yī)院治療的原發(fā)性肝細胞癌患者的68例的石蠟標本進行研究，其中男性52例，女性16例，年齡43～71歲，平均(54.9±8.1)歲。所有患者均經(jīng)病理證實為肝細胞癌；Edmondson分級：Ⅰ、Ⅱ級16例，Ⅲ、Ⅳ級52例；BCLC分期：A期48例，B期13例，C期5例，D期2例；手術治療，術前未進行其他相關治療。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會同意。

1.2 檢測方法

應用原位雜交的方法檢測68例肝細胞癌組織以及其相對應的癌旁組織中l(wèi)incRNA-UFC1水平的表達。肝細胞癌組織脫水、浸蠟、包埋，切片5 μm。石蠟經(jīng)二甲苯、梯度酒精脫蠟水化，切片置入3% H2O2中10 min，滅活內(nèi)源性過氧化物酶，無菌蒸餾水洗滌3次。暴露lncRNA核酸片段，后固定，預雜交，雜交，洗滌，加封閉液，滴加生物素標記的鼠抗地高辛，滴加SABC，滴加生物素化過氧化物酶，DAB顯色，蘇木精染核，梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片，顯微鏡下觀察。染色強度判斷：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；陽性細胞數(shù)計分：1分為1%～10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%，4分為>75%；得分為染色強度積分+陽性細胞數(shù)積分；得分≥3分為高表達，<3分為低表達。

1.3 分析方法

比較癌組織與癌旁組織lincRNA-UFC1表達水平，比較不同臨床病理參數(shù)患者癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達水平。

1.4 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件。計數(shù)資料用百分比或者例數(shù)表示，用χ2檢驗。P<0.05為差異顯著。

2 結果

2.1 肝細胞癌組織與癌旁組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達水平比較

癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1高表達率顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 肝細胞癌組織與癌旁組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達水平比較(例，%)

2.2 不同臨床病理參數(shù)患者肝細胞癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達水平比較

無包膜、AFP>20 ng/ml、有門靜脈癌栓、癌腫直徑>5 cm、BCLC分期B+C+D患者癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1高表達率更高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床病理參數(shù)患者肝細胞癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達水平比較(例，%)

3 討論

90%的原發(fā)性肝細胞癌是肝細胞肝癌,具有發(fā)病率高、預后差的特點。長鏈非編碼RNA屬于功能性RNA，轉(zhuǎn)錄長度大于200nt，發(fā)揮調(diào)控基因的作用，參與生理、病理過程。目前發(fā)現(xiàn)的參與哺乳動物基因活動的lncRNA有上千個。最初發(fā)現(xiàn)lncRNA時認為其無生物學功能。但隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)許多l(xiāng)ncRNA有功能，調(diào)控染色體的修飾，轉(zhuǎn)錄激活、干擾等[3-6]。lncRNA調(diào)節(jié)蛋白編碼基因，表達異常與疾病發(fā)病有關。許多發(fā)生基因沉默的抑癌基因均可轉(zhuǎn)錄lncRNA，誘導癌癥的發(fā)生[7-10]。

lncRNA與多種疾病相關，例如癌癥、心臟病、阿爾茨海默病、牛皮鮮、脊髓小腦共濟失調(diào)癥、X染色體易損綜合征等[11]。研究顯示過表達lincRNA-UFC1的癌細胞增殖能力明顯增強，癌細胞克隆形成能力明顯增強[12]。過表達lincRNA-UFC1的肝細胞癌細胞皮下瘤的增殖能力增強[13-15]。lincRNA-UFC1過表達的肝細胞癌細胞G0/G1期的比例明顯下降,而S期的比例明顯升高,癌細胞促細胞周期進展蛋白cyclin D1、CDK4、CDK6表達增加。過表達lincRNA-UFC1癌細胞株凋亡比例降低。lincRNA-UFC1沉默表達的癌細胞中促凋亡蛋白水平下降。lincRNA-UFC1結合RNA結合蛋白HuR(屬于果蠅胚胎致死異常視覺家族，ELAV)發(fā)揮調(diào)節(jié)β-catenin水平。癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1與β-catenin mRNA表達呈正相關關系。癌細胞株中,lincRNA-UFC1上升與β-catenin表達水平增加呈正相關。研究顯示miR-34a與lincRNA-UFC1直接結合并下調(diào)其表達。癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1與miR-34a表達呈負相關關系，miR-34a可以通過縮短lincRNA-UFC1的半衰期來調(diào)控lincRNA-UFC1的表達水平。本次研究結果顯示，肝細胞癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1呈高表達，并且與 Edmondson病理學分級、是否有包膜、AFP水平、門靜脈血栓、癌腫直徑、BCLC分期有關。提示lincRNA-UFC1參與了肝細胞癌的發(fā)生與發(fā)展。曹傳輝[16]研究lincRNA-UFC1在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用以及機制，結果顯示其在肝癌組織中呈高表達，可以作為預測肝癌患者預后的1個有價值的分子標志物，其通過誘導肝癌細胞周期進展及抑制肝癌細胞凋亡促進肝癌細胞增殖，可以與RNA結合蛋白HuR直接結合，上調(diào)β-catenin的表達，進而促進肝癌細胞增殖。曹傳輝的研究結果與本次研究結果相似。本次研究的不足之處是未能對其作用機制進行分析，期待在今后的工作中，增加文獻閱讀，收集相關資料，進一步分析。

綜上所述，肝細胞癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1高表達率更高，其高表達與是否有包膜、AFP水平、是否有門靜脈癌栓、癌腫直徑、BCLC分期有關。