張媛媛 陳選英 薛曉會

臨床上鼻咽癌的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊呓诓∏檫M展速度的顯著加快，增加了鼻咽癌患者遠期的病死風險[1-2]。臨床上對于鼻咽癌的發(fā)生機理的研究，可以為疾病的診療及預后隨訪提供參考。葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1(GLUT-1)的表達上升，能夠通過提高葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的激活程度，促進癌細胞對于ATP的能量利用代謝，最終促進腫瘤細胞的持續(xù)性自我增殖[3]；血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)是血管內(nèi)皮誘導生長因子，其對于腫瘤新生血管的形成促進作用，能夠提高腫瘤病灶的血流灌注量，提高腫瘤細胞的血氧供應(yīng)程度，最終影響腫瘤細胞的持續(xù)性異常分裂過程[4]。部分研究者探討了VEGF在鼻咽癌患者病灶組織中的表達情況，認為在鼻咽癌患者中，VEGF蛋白的表達濃度可明顯上升[5]，但缺乏對于GLUT-1、VEGF的表達與鼻咽癌患者體內(nèi)微血管密度(MVD)的關(guān)系分析。為了揭露GLUT-1、VEGF的表達與鼻咽癌患者的病情關(guān)系，從而為臨床上鼻咽癌的診療提供參考，本次研究選取我院病理中心收集的80 例鼻咽癌組織標本，探討了GLUT-1、VEGF蛋白的表達情況。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年5月至2019年10月收集的80例鼻咽癌組織標本(鼻咽癌組)及其癌旁組織(對照組)。入選標準：①鼻咽癌的診斷標準參考中華醫(yī)學會制定的標準[6]；②所有標本均為手術(shù)后獲?。虎凼中g(shù)前患者未接受放化療、免疫學治療、內(nèi)分泌治療；④本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)醫(yī)學倫理規(guī)定，經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準，對研究對象的各項資料嚴格保密。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤的患者；②未經(jīng)病理學檢查確診；③資料缺失；④伴有風濕免疫系統(tǒng)疾病。其中男性60例、女性20例，年齡44～75歲，平均(55.2±9.8)歲；臨床分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期25例、Ⅲ期30例、Ⅳ期5例；浸潤深度：T1～T2 48例、T3～T4 32例；病灶最大徑≥3 cm 48例、病灶最大徑<3 cm 32例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性43例。

1.2 免疫組化染色技術(shù)

免疫組化結(jié)果判定：GLUT-1蛋白陽性染色表達于細胞膜或細胞質(zhì)中，VEGF蛋白陽性染色表達于細胞膜中，兩種蛋白的陽性染色呈黃色、棕黃色、褐色表達。①依據(jù)染色的程度分為：未染色(0分)、僅僅淡黃色染色(1分)、棕黃色染色(2分)、染色呈褐色、黑色(3分)；②根據(jù)染色的細胞占比結(jié)果：占比≤10%計分1分、占比范圍11%～50%計分2分、占比范圍51%～75%計分3分、占比>75%計分4分，染色程度與陽性細胞計分之乘積<3分為陰性、≥3分為陽性。石蠟切片采用二甲苯進行脫臘至水，5%的雙氧水常溫在孵育10 min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，5%的山羊血清抗體封閉10 min，不沖洗，滴加一抗(購自abcum公司 批號：20119304 濃度：1∶500)，4 ℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，滴加生物素標記好的二抗(購自北京康泰生物 批號：20104856 濃度：1∶1000)，37 ℃孵育30 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，滴加第二代辣根酶標記的工作液體，37 ℃孵育10 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 鼻咽癌組織與鼻咽正常組織中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達差異

鼻咽癌組織中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白陽性表達率分別為71.25%、62.50%，均顯著高于對照組標本中的30.00%、25.00%，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 鼻咽癌組織與鼻咽正常組織中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達差異(例，%)

2.2 鼻咽癌組織GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達與臨床病理學特征的關(guān)系

鼻咽癌組織中的GLUT-1蛋白、VEGF蛋白陽性表達率在不同臨床分期、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的組織中比較，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；在不同病灶大小、不同浸潤深度的組織中比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2，表3。

表2 GLUT-1蛋白與鼻咽癌病理特征的關(guān)系(例，%)

表3 VEGF蛋白與鼻咽癌病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 不同GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達的鼻咽癌組織中MVD計數(shù)比較

GLUT-1蛋白、VEGF蛋白陽性表達鼻咽癌組織中的MVD計數(shù)均顯著高于陰性表達的鼻咽癌組織，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4，表5。

表4 GLUT-1蛋白陽性與陰性表達組織中MVD計數(shù)比較

表5 VEGF蛋白陽性與陰性表達組織中MVD計數(shù)比較

3 討論

長期吸煙、HPV病毒感染等內(nèi)外環(huán)境誘導的鼻粘膜上皮細胞的損傷，能夠在異常增殖分裂過程中增加鼻咽癌的發(fā)生風險[7]。臨床上鼻咽癌的發(fā)生總體呈現(xiàn)出了高發(fā)態(tài)勢和年輕化的發(fā)病趨勢，長期的鼻咽癌病情進展，能夠?qū)е禄颊哌h期總體生存時間的顯著縮短[8]。部分研究者報道的鼻咽癌的5年內(nèi)病死率可超過15%以上，同時其5年內(nèi)的復發(fā)或者遠處轉(zhuǎn)移的風險可超過20%以上[9]。在研究鼻咽癌發(fā)病機理的過程中，越來越多的研究關(guān)注到腫瘤蛋白在惡性腫瘤發(fā)生過程中的價值。雖然有研究探討了上皮非特異性腫瘤標志物對于鼻咽癌病情評估的非標注作用，但依靠普通非特異性腫瘤標志物評估鼻咽癌病情的靈敏度及可靠性均較低[10]。而通過尋找可靠而高靈敏度的腫瘤病情評估指標，能夠在揭露鼻咽癌發(fā)病機理的同時，為臨床上鼻咽癌的診療提供臨床方面的參考。

GLUT-1是葡萄糖轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白，其能夠通過運載葡萄糖蛋白，提高癌細胞對于葡萄糖氧化呼吸鏈的吸收利用速率，最終影響到腫瘤細胞的增殖過程。GLUT-1對于葡萄糖轉(zhuǎn)運體結(jié)構(gòu)的調(diào)控作用，能夠影響到腫瘤細胞膜上受體的激活程度，提高腫瘤細胞內(nèi)第二信使的上調(diào)水平；VEGF作為生長因子家族成員，其能夠通過影響到血管內(nèi)皮細胞的損傷修復過程，加劇腫瘤新生血管的形成速度，最終參與到惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中[11]。已有的現(xiàn)階段研究主要探討了VEGF對于鼻咽癌細胞的生長影響，認為VEGF能夠顯著影響到鼻咽癌細胞的浸潤過程[12]，但缺乏對于GLUT-1、VEGF的表達與MVD的關(guān)系分析。

本次研究中免疫組化的相關(guān)探討發(fā)現(xiàn)，在鼻咽癌病灶組織中，GLUT-1、VEGF蛋白的表達陽性率水平明顯的上升，高于良性病變組，統(tǒng)計學差異顯著，表明GLUT-1、VEGF蛋白的高表達能夠顯著影響到鼻咽癌的病情進展。GLUT-1、VEGF的蛋白高表達，能夠在癌基因的激活、葡萄糖代謝轉(zhuǎn)運、腫瘤血管的重塑化等方面發(fā)揮作用，從而最終影響到鼻咽部惡性腫瘤的發(fā)生。例如有其他研究者也發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生了局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，鼻咽癌病灶組織中GLUT-1蛋白的表達陽性率可上升25%～55%，同時GLUT-1蛋白的表達還與鼻咽癌患者遠期的總體生存時間有關(guān)[13-14]。在探討GLUT-1、VEGF蛋白的表達與鼻咽癌患者臨床病理特征的關(guān)系時，發(fā)現(xiàn)在不同的臨床分期或者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，GLUT-1、VEGF蛋白的表達具有顯著的差異，提示了GLUT-1、VEGF蛋白的表達能夠影響到鼻咽癌患者的臨床病理特征進展。GLUT-1對于鼻咽癌臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響，在于其能夠影響到癌細胞膜上ATP控制的膜離子通道蛋白的開放程度，提高了腫瘤細胞的浸潤和粘附能力，最終促進了臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生；VEGF的高表達對于鼻咽癌臨床病理特征的影響，在于其能夠提高病灶組織細胞的血流灌注量和血氧水平，從而影響到鼻咽部腫瘤的淋巴結(jié)浸潤和侵犯過程[15]。MVD是評估腫瘤病灶血管形成的相關(guān)指標，MVD的過度上升能夠顯著增加遠期腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移的風險，GLUT-1、VEGF蛋白陽性表達的鼻咽癌組織中的MVD計數(shù)均明顯上升，提示了GLUT-1、VEGF的表達還能夠影響到腫瘤血管的分布密度。

綜上所述，鼻咽癌組織中GLUT-1、VEGF蛋白表達上調(diào)，與腫瘤發(fā)生發(fā)展及微血管形成均具有一定的關(guān)系。但關(guān)于GLUT-1、VEGF蛋白影響MVD表達的具體機制仍然需要進一步的探討。