李 苗，李寶新，李秉哲，郭淑芹，常文龍，翟 娜，王 翯，張云良△

(1.承德醫(yī)學院研究生學院，河北承德 067000；2.保定市第一中心醫(yī)院內(nèi)分泌科/河北省光學感知技術創(chuàng)新中心，河北保定 071000)

2型糖尿病(T2DM)與高血壓作為心血管疾病的主要風險因素，因具有相似致病機制，如異常糖脂代謝、氧化應激、血管炎癥等引起人們的廣泛關注[1]。腦啡肽酶(NEP)是一種廣泛表達于多種細胞表面，并與胰島素抵抗、血壓和脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)有關的整合膜鋅金屬內(nèi)肽酶[2]。α-klotho蛋白是一種主要由腎臟分泌的多功能蛋白，在促進能量代謝，抗氧化應激，抑制炎性反應等方面發(fā)揮重要作用[3]。有研究證實，α-klotho蛋白與NEP參與了T2DM的發(fā)生、發(fā)展，但二者在T2DM合并高血壓患者中的變化及二者相互作用關系仍不明確[4]。本研究通過觀察血清NEP和α-klotho蛋白水平在單純T2DM與T2DM合并高血壓患者血清中的變化分析其影響因素，研究二者在糖尿病合并高血壓診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取保定市第一中心醫(yī)院內(nèi)分泌科于2018年12月至2020年1月收治的T2DM患者154例，其中，男81例，女73例。依據(jù)1999年WHO糖尿病診斷標準，2017年中國高血壓防治指南推薦的高血壓診斷和分級標準[5]，將T2DM患者分為兩組：單純T2DM組(DS組)79例，收縮壓(SBP)<140 mm Hg和(或)舒張壓(DBP)<90 mm Hg；T2DM合并高血壓組(DH組)75例，SBP≥140 mm Hg 和(或)DBP≥90 mm Hg。另選同期在該院體檢的性別、年齡相匹配的健康者70例作為對照組(NC組)。排除標準：(1)1型糖尿病、妊娠期糖尿病、繼發(fā)性糖尿病患者；(2) 糖尿病病程大于或等于15年，合并酮癥酸中毒、高血糖高滲狀態(tài)等急性并發(fā)癥者；(3)肝、腎功能嚴重異常者；(4)精神異常患者。收集受試者年齡、糖尿病病程、高血壓病程；測量其身高、體重、腰圍、臀圍，并連續(xù)3 d在清晨安靜狀態(tài)下測量雙上肢的血壓；計算腰臀比(WHR)及體重指數(shù)(BMI)。本研究獲得保定市第一中心醫(yī)院倫理委員會批準，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

所有受試者均禁食8～10 h 后次日清晨采集空腹靜脈血10 mL，以4 000 r /min 離心5 min，-80 ℃儲存。采用日立7600 生化儀器檢驗空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血尿素氮(BUN)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、血肌酐(Scr)，糖化HA8180 儀器檢驗糖化血紅蛋白(HbA1c)，電化學發(fā)光法(德國Cobas6000-E601)測定空腹胰島素(FINS)，通過穩(wěn)態(tài)模型評估法計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，HOMA-IR=FINS(mU/L)×FPG(mmol/L)/22.5。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法測定血清α-klotho蛋白和NEP水平，試劑盒購自上海酶聯(lián)免疫生物有限公司(Elabscien)。根據(jù)試劑盒說明書的指示，NEP的有效檢測范圍是6.25～200.00 U/L，α-klotho蛋白有效檢測范圍是0.04～2.00 ng/mL，批內(nèi)變異系數(shù)小于10%，批間變異系數(shù)小于15%。操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結 果

2.1 3組對象一般資料比較

3組對象年齡、BMI比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，DS組與DH組患者糖尿病病程比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；DS、DH組WHR均明顯高于NC組(P<0.05)，且DH組WHR高于DS組(P<0.05)；與NC、DS組比較，DH組SBP和DBP水平明顯升高(P<0.05)，NC組與DS組的SBP和DBP水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 3組對象一般資料比較

2.2 3組對象生化及相關指標比較

各組間TC、TG、ALT、AST、Scr、BUN水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與NC組比較，DS、DH組的FPG、HbA1c、FINS、HOMA-IR及NEP水平均明顯升高(P<0.05)，α-klotho蛋白水平均明顯降低(P<0.05)，且DH組NEP高于DS組，α-klotho蛋白水平低于DS組，兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組生化及相關指標比較

2.3 血清α-klotho蛋白、NEP水平與各臨床指標的Spearman相關分析

Spearman相關分析顯示，血清NEP水平與BMI、WHR、糖尿病病程、高血壓病程、SBP、DBP、TC、FPG、HbA1c、FINS、HOMA-IR均呈正相關(P<0.01)，與α-klotho蛋白呈負相關(P<0.01)。血清α-klotho蛋白水平與WHR、糖尿病病程、高血壓病程、SBP、DBP、TC、FPG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、NEP均呈負相關(P<0.01)，見表3。

表3 α-klotho蛋白、NEP和各臨床指標的Spearman相關分析

續(xù)表3 α-klotho蛋白、NEP和各臨床指標的Spearman相關分析

2.4 血清α-klotho蛋白、NEP水平影響因素的多元線性回歸分析

多元線性逐步回歸分析結果顯示，以NEP為因變量，糖尿病病程、高血壓病程、SBP、FPG、TC、α-klotho蛋白與其獨立相關；以α-klotho蛋白為因變量，糖尿病病程、高血壓病程、SBP、NEP為其獨立影響因素，見表4。

表4 血清α-klotho蛋白、NEP水平影響因素的多元線性回歸分析

3 討 論

T2DM與高血壓是中老年人常見的兩種疾病，有研究發(fā)現(xiàn)，T2DM人群患高血壓及其他心血管疾病的概率明顯高于非T2DM人群[6]。近年來，隨著人們飲食習慣的改變，出現(xiàn)T2DM及高血壓的概率明顯增加，因此，對于T2DM合并高血壓患者的早期診斷及干預已成為近年來的關注熱點。本文通過對健康人群，單純T2DM患者及T2DM合并高血壓患者血清α-klotho蛋白、NEP水平的檢測，研究這兩種指標在T2DM合并高血壓患者體內(nèi)的水平變化及其與多種影響因素的相關性。

NEP是一種哺乳動物完整的膜鋅金屬內(nèi)肽酶，可通過降解血管緊張素、內(nèi)皮素、P物質(zhì)等多種生物活性肽調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能[7]。有研究表明，NEP抑制劑可減輕NEP對一氧化氮(NO)生成的抑制作用，也可間接抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)，緩解心力衰竭患者的收縮功能障礙[8]。NEP還可通過增強胰島素介導的磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)加速脂肪生成[9]。JORDAN等[10]證實NEP抑制劑可降低高血壓患者的外周胰島素抵抗，增加皮下、腹部脂肪組織的動員。一項對NEP抑制劑在糖尿病合并高血壓大鼠體內(nèi)作用研究發(fā)現(xiàn)，隨著藥物持續(xù)時間的延長，大鼠的血壓和血糖水平逐漸下降[11]。本研究中，與NC、DS組比較，DH組NEP水平明顯升高，參照Spearman相關分析，血清NEP水平與BMI、WHR、糖尿病病程、高血壓病程、SBP、DBP、TC、FPG、HbA1c、FINS、HOMA-IR均呈正相關(P<0.01)，與α-klotho蛋白呈負相關(P<0.01)；多元線性回歸分析結果顯示，糖尿病病程、高血壓病程、SBP、FPG、TC、α-klotho蛋白為NEP的獨立影響因素。證明血清NEP水平可能與血壓波動、血脂異常、血糖控制程度及胰島素抵抗有關，同時可知α-klotho蛋白與NEP均參與糖尿病合并高血壓發(fā)病機制中，且二者作用相反，相互作用、相互影響。

α-klotho蛋白是由klotho基因編碼的一種相對分子質(zhì)量為130×103的抗衰老蛋白，主要在腎臟表達，能夠以自分泌或旁分泌方式保護局部臟器功能，調(diào)節(jié)能量代謝[12]。α-klotho蛋白可通過刺激NO的產(chǎn)生保護血管內(nèi)皮細胞,擴張血管，減少心血管疾病的發(fā)生[13]；也可通過參與 PI3K-Akt/內(nèi)皮型一氧化氮合酶信號轉(zhuǎn)導通路抵抗體內(nèi)氧化應激；還可通過抑制轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)通路減輕血管炎性反應[14]。CITTERIO等[15]通過觀察高血壓患者血清α-klotho蛋白水平發(fā)現(xiàn)，血清α-klotho蛋白水平與血壓水平呈負相關。JI等[16]以不同程度糖尿病微血管病變患者為研究對象，證明α-klotho蛋白通過激活PI3K-Akt信號通路，抑制軟脂酸誘導的細胞凋亡，延緩糖尿病微血管病變進程。由此可推斷，α-klotho蛋白與糖尿病合并微血管病變的發(fā)生存在相關性，但其與糖尿病合并高血壓的關系尚不明確。本研究通過測定不同血壓對象的血清α-klotho蛋白水平發(fā)現(xiàn)，T2DM合并高血壓患者的血清α-klotho蛋白水平較單純T2DM患者及健康人群明顯降低。Spearman相關分析顯示，血清α-klotho蛋白水平與WHR、糖尿病病程、高血壓病程、SBP、DBP、TC、FPG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、NEP呈負相關，證明α-klotho蛋白在T2DM合并高血壓的發(fā)生中發(fā)揮一定保護作用。參考多元線性回歸分析結果，糖尿病病程、高血壓病程、SBP、NEP為α-klotho蛋白的獨立影響因素，提示血清α-klotho蛋白水平受到血壓、血糖、胰島素抵抗水平及肥胖程度的影響。

綜上所述，T2DM合并高血壓患者血清中α-klotho蛋白水平明顯降低，NEP水平明顯升高，二者為負相關關系，證明α-klotho蛋白與NEP在疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著反向調(diào)控作用。這為T2DM合并高血壓及其他大血管并發(fā)癥的治療提供了思路，但目前樣本量較小，兩種因子具體作用機制尚未闡明，仍需擴大樣本量，進行深入研究。