崔新剛 王穎瑩

【摘 要】 目的：通過主成分分析和聚類分析評(píng)價(jià)不同廠家維C銀翹片的質(zhì)量。方法：采用HPLC法測(cè)定維C銀翹片中綠原酸、牛蒡苷、維生素C、對(duì)乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏含量，基于測(cè)定結(jié)果進(jìn)行主成分分析和聚類分析，評(píng)價(jià)不同廠家維C銀翹片質(zhì)量。結(jié)果：5個(gè)廠家維C銀翹片有效成分含量均符合規(guī)定，但存在較大差異，主成分分析和聚類分析結(jié)果表明，同一廠家樣品質(zhì)量穩(wěn)定。結(jié)論：主成分分析和聚類分析結(jié)果可為不同廠家維C銀翹片的質(zhì)量控制提供參考。

【關(guān)鍵詞】 HPLC;維C銀翹片;有效成分;聚類分析;主成分分析

Abstract：Objective The quality of Vitamin C Yinqiao Tablets from different manufacturers was evaluated using principal component analysis （PCA） and cluster analysis （CA）. Method high performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine the main components of Vitamin C Yinqiao Tablets from different manufacturers and perform cluster analysis. PCA and CA were conducted by using IBM SPSS 18.0 software to evaluate the quality of Vitamin C Yinqiao Tablets. Results The samples from different manufacturers met the requirements of China Phamacopoeia. And it was found that there were differences in the effective ingredient contents of Vitamin C Yinqiao Tablets. The results of PCA and CA showed that that the sample quality from the same manufacturer was uniform. Conclusions The results of CA and PCA can provide reference for quality control of Vitamin C Yinqiao tablet.

Keywords：HPLC; Vitamin C Yinqiao Tablet;Bioactive Compounds;Hierarchical Cluster Analysis;Principal Component Analysis

維C銀翹片為《中國藥典》2015年版收載的中西藥復(fù)方制劑，由金銀花、連翹、牛蒡子、蘆根、桔梗及維生素C、對(duì)乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和薄荷素油制成，具有疏風(fēng)解表，清熱解毒之功效[1]。用于外感風(fēng)熱所致的流行性感冒，癥見發(fā)熱，頭痛，咳嗽，口干，咽喉疼痛。研究表明不同廠家維C銀翹片存在較大的質(zhì)量差異[2]。目前，維C銀翹片質(zhì)量評(píng)價(jià)方法多采用藥典收錄的HPLC法，方法較為繁瑣，本研究同時(shí)測(cè)定維生素C、對(duì)乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏含量，方法簡(jiǎn)單、快速。藥典法測(cè)定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷含量，結(jié)合聚類分析和主成分分析，探討不同廠家維C銀翹片質(zhì)量差異，旨在為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 Agilent1200型高效液相色譜儀，包括G1315B型二極管陣列檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器（美國安捷倫科技有限公司）;KQ-100ES超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;賽多利斯BSA8201電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）;易普易達(dá)Smart-S2型超純水機(jī)（南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司）。

1.2 藥品與試劑 綠原酸對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110753-201713）;牛蒡苷對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110819-201807）;對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：批號(hào)：100018-201508）;馬來酸氯苯那敏對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100047-201606）;維生素C對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100425-201804）。10批樣品分別為貴州的A廠（批號(hào)：190906;191001）、廣東的B廠（批號(hào)：190904;190702）、廣西的C廠（批號(hào)：181202;190904）、云南的D廠（批號(hào)：180605;180801）、江蘇的E廠（批號(hào)：20190106;20181103）;乙腈為色譜純（天津天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）;磷酸為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 綠原酸的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 參考《中國藥典》及相關(guān)文獻(xiàn)[3]，通過多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，最終確定色譜條件為，色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;柱溫：25℃;流速：1.0mL·min-1;流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸（13∶[KG-*3/5]87）;進(jìn)樣量：10μL;檢測(cè)波長(zhǎng)：327nm。

2.1.2 對(duì)照品制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含對(duì)照品30μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。

2.1.3 供試品制備 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密稱定，研細(xì)粉，取約1g細(xì)粉，置于具塞棕色瓶中，精密加入甲醇100mL，密塞，稱定重量。將所制得供試品溶液進(jìn)行超聲處理（功率250W，頻率50kHz）30min，放冷，再次稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，置棕色瓶中，即得供試品溶液。

2.1.4 樣品測(cè)定 按2.1.3制備樣品溶液，精密吸取樣品溶液和對(duì)照品溶液各10μL，按2.1.1色譜條件，分別測(cè)定10個(gè)樣品中的綠原酸，以外標(biāo)法計(jì)算含量。色譜圖如圖1所示，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.2 牛蒡苷的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;柱溫：25℃;流速：1.0mL·min-1;流動(dòng)相：乙腈-5mL/L冰醋酸溶液（18∶[KG-*3/5]82）;進(jìn)樣量：10μL;檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。

2.2.2 對(duì)照品制備 精密稱取牛蒡苷對(duì)照品適量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含對(duì)照品50μg 的溶液，即得對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品制備 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密稱定，研細(xì)粉，取0.5g細(xì)粉，置于50mL棕色量瓶中，加甲醇約45mL，將所制得供試品溶液進(jìn)行超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，離心機(jī)離心，取上清液，即得供試品溶液。

2.2.4 樣品測(cè)定 按2.1.4樣品測(cè)定方法。色譜圖如圖2所示，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.3 維生素C、對(duì)乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;柱溫：25℃;流速：1.0mL·min-1;流動(dòng)相：0.05mol/L KH2PO4（pH 3.0，含1%三乙胺）-乙腈（75∶[KG-*3/5]25）;進(jìn)樣量：10μL;檢測(cè)波長(zhǎng)：260nm。

2.3.2 對(duì)照品制備 分別準(zhǔn)確稱取維生素C、對(duì)乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏對(duì)照品適量，以流動(dòng)相溶解，置于同一50mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，制得含維生素C 103μg/mL，對(duì)乙酰氨基酚102μg/mL，馬來酸氯苯那敏218μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)粉，稱取適量（約相當(dāng)于1片藥物的質(zhì)量），置于100mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量，將所制得供試品溶液進(jìn)行超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30min，放冷，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3.4 樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。色譜圖如圖3所示，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.4 主成分分析 主成分分析是利用降維的思想，在損失最少信息的前提下把多個(gè)指標(biāo)轉(zhuǎn)化為幾個(gè)綜合指標(biāo)的多元統(tǒng)計(jì)方法[4]。從不同廠家維C銀翹片中有效成分含量主成分分析結(jié)果可得，前2個(gè)主成分分析的累積方差貢獻(xiàn)率分別達(dá)到65.608%、90.593%，表明前2個(gè)主成分可以解釋分類信息的90.593%，能夠反映不同廠家維C銀翹片的質(zhì)量，結(jié)果見表2和圖4。由圖4可知不同生產(chǎn)廠家的維C銀翹片分為3類，編號(hào)3、4、7和8為一類，編號(hào)1、2、9和10為一類，5和6為一類。

2.5 聚類分析 聚類分析是用距離來測(cè)定樣品之間的相似程度，為相似樣品歸類的最常用方法，常用于中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)[5-6]。本研究以維C銀翹片中的有效成分的含量結(jié)果為變量，運(yùn)用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)軟件，以平均Euclidean距離為度量標(biāo)準(zhǔn)，采用組間聯(lián)接的方法對(duì)10批樣品進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，結(jié)果見圖5。在組間距為25時(shí)，將10個(gè)批次樣品分為3類，編號(hào)3、4、7和8為一類，編號(hào)1、2、9和10為一類，5和6為一類。該結(jié)果與主成分分析結(jié)果一致。

4 討論

4.1 不同廠家維C銀翹片中西藥成分分析 藥典規(guī)定維C銀翹片每片含維生素C 49.5mg、對(duì)乙酰氨基酚105mg、馬來酸氯苯那敏1.05mg。每片含維生素C應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%，即44.55～54.45mg，每片含對(duì)乙酰氨基酚應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%，即94～115.5mg，每片含馬來酸氯苯那敏應(yīng)為標(biāo)示量的85.0%～115.0%，即0.8925～1.2075mg。經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)5個(gè)廠家藥品中3種成分含量均符合規(guī)定，但結(jié)果均在規(guī)定范圍的下限，分析原因可能是生產(chǎn)廠家在符合藥典規(guī)定的前提下采用接近下限投藥量來生產(chǎn)藥品從而減少生產(chǎn)成本。

4.2 不同廠家維C銀翹片中中藥成分分析 藥典規(guī)定每片含綠原酸不得少于1.5mg，含牛蒡苷不得少于2.5mg，大部分廠家的檢測(cè)結(jié)果均符合規(guī)定，但個(gè)別廠家的檢測(cè)結(jié)果中綠原酸的含量卻低于規(guī)定量。本研究認(rèn)為該種藥物需增加金銀花藥材成分的含量測(cè)定，從而更有效地控制該種藥品的生產(chǎn)工藝，保證藥物療效。

4.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 對(duì)維生素C、對(duì)乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏進(jìn)行紫外掃描，在200～400nm范圍內(nèi)掃描，維生素C、對(duì)乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的最大吸收波長(zhǎng)分別為245、249和260nm。馬來酸氯苯那敏在該制劑處方中所占含量較少，因此選擇260nm作為三種成分的共同檢測(cè)波長(zhǎng)，在此檢測(cè)波長(zhǎng)下，維生素C和對(duì)乙酰氨基酚也具有較大吸收，檢測(cè)靈敏度足以達(dá)到分析要求[7]。

5 結(jié)論

研究結(jié)果表明不同企業(yè)生產(chǎn)維C銀翹片質(zhì)量有差異，主要因?yàn)樯a(chǎn)工藝和生產(chǎn)原料的不同，為確保藥品的臨床療效和安全，不同廠家應(yīng)嚴(yán)格把關(guān)原料的質(zhì)量和穩(wěn)定、規(guī)范的生產(chǎn)工藝。本研究所建立的HPLC法測(cè)定維C銀翹片指標(biāo)成分含量，方法簡(jiǎn)單、快速，通過主成分分析和聚類分析評(píng)價(jià)不同生產(chǎn)企業(yè)樣品質(zhì)量，為維C銀翹片的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了客觀數(shù)據(jù)和參考方法。

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