熊 英，雷 健，邢 茂

磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑是醫(yī)院的自制制劑，用于治療鼻黏膜糜爛性潰瘍，鼻中隔手術(shù)后促進(jìn)肉芽生長(zhǎng)，加速傷口愈合，并有潤(rùn)滑鼻黏膜的作用，可迅速緩解鼻炎術(shù)后患者鼻出血、鼻部干燥不適、嗅覺障礙、鼻癢、異物感等臨床癥狀，為醫(yī)院臨床不可或缺的非標(biāo)準(zhǔn)自制制劑[1]。其主藥磺胺嘧啶抗菌譜廣，對(duì)大多數(shù)革蘭陽(yáng)性菌和陰性菌均有抑制作用[2-3]，輔料魚肝油又具有補(bǔ)充病變部位營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用，促進(jìn)肉芽生長(zhǎng)，具有標(biāo)本兼治的功效[4]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用化學(xué)滴定法測(cè)定磺胺嘧啶的含量，已不能滿足新版藥典對(duì)藥品的質(zhì)量要求。為了更好地控制藥品質(zhì)量，保證臨床用藥安全，通過查閱文獻(xiàn)資料[5-7]，采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定醫(yī)院自制制劑磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑中磺胺嘧啶含量，提高醫(yī)院自制制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料與方法

1.1 儀器 數(shù)字酸度儀（廠家：賽多利斯，型號(hào)：PB-10），高效液相色譜儀(廠家：安捷倫科技，型號(hào)：Agilent 1260)，反滲透制水機(jī)（廠家：重慶恒諾；型號(hào)：HN-2R0-2000）,電子天平（廠家：重慶福運(yùn)來科技；型號(hào)：JA5003B）。

1.2 試藥 磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑由陸軍軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院制劑室提供（批號(hào)：150212、150413、150511），對(duì)照品磺胺嘧啶購(gòu)于中檢院（C10H10N4O2S；批號(hào)：100026-201404；含量以99.9%計(jì)）；原料藥磺胺嘧啶生產(chǎn)廠家為西南合成制藥（批號(hào)：201206131；含量以99.8%計(jì)）；色譜級(jí)乙腈、醋酸銨以及三乙胺生產(chǎn)廠家分別為Honeywell、Aladdin、天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；純化水；分析純乙酸乙酯和鹽酸購(gòu)于重慶川東化工集團(tuán)有限公司。

1.3 溶液的制備

1.3.1 對(duì)照品溶液 取SD對(duì)照品適量，置50 ml容量瓶中，加2 ml稀HCl，加流動(dòng)相制成貯備液Ⅰ。精密量取貯備液Ⅰ2 ml，加流動(dòng)相使成0.1 mg/ml溶液。

1.3.2 供試品溶液 量取20 ml稀HCl置分液漏斗，精密量取磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑2 ml加入上述分液漏斗中，用稀HCl分次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入分液漏斗中，量取10 ml乙酸乙酯，加入上述分液漏斗，充分振搖，分取稀HCl液。乙酸乙酯層再用20 ml稀HCl萃取，萃取兩次。合并稀HCl萃取液，置200 ml量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度。精密量取1 ml上述溶液，置10 ml量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度。

1.3.3 陰性對(duì)照溶液 照處方制備缺SD的磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑陰性樣品，再按1.3.2項(xiàng)下處理方法制備，即得。

1.4 色譜條件 色譜柱：島津Inertsil ODS-3-C18（250 mm×4.6 mm）；工作站：ChemStation for LC＆LC/MS systems Rev.C.01.05；流動(dòng)相：0.3%醋酸銨溶液-乙腈(80∶20)；柱溫：25℃；進(jìn)樣體積：10μl；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm。

1.5 專屬性實(shí)驗(yàn) 取1.3.1、1.3.2及1.3.3項(xiàng)下3種溶液，按照1.4項(xiàng)下HPLC條件進(jìn)行測(cè)定，記錄液相圖譜。

1.6 線性相關(guān)性考察 精密量取10 ml貯備液I，置25 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，即為貯備液Ⅱ。分別取1.5 ml、3 ml、5 ml、8 ml貯備液Ⅱ，用流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度為0.029832、0.059664、0.09944、0.159104 mg/ml的溶液。分別取上述溶液及貯備液Ⅱ，按照1.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。

1.7 儀器精密度實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按照1.4項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。

1.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取批號(hào)為150212的磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑2 ml，平行制備6份供試品溶液，按1.4項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定150212批次磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑樣品含量。

1.9 中間精密度實(shí)驗(yàn) 取批號(hào)為150212的磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑2 ml，平行制備6份供試品溶液，按1.4項(xiàng)下色譜條件，由不同于重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的人員按照1.4項(xiàng)下方法測(cè)定6份平行供試品溶液的含量。

1.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定SD原料藥約8 g、10 g和12 g(分別約為處方量的80倍、100倍和120倍)，分別置于3個(gè)燒杯中，加入適量魚肝油，攪拌分散均勻，另取硬酯山梨坦0.5 g加水10 ml，加熱融化，再加入上述液體中，攪拌乳化后，加魚肝油至全量100 ml（約為處方的100倍），攪勻，即得。分別取上述燒杯中不同濃度磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑樣品適量，各3份，置125 ml分液漏斗中，按照1.3.2項(xiàng)下方法平行制備9份。按照樣品測(cè)定方法操作，記錄色譜圖，計(jì)算SD回收率。

1.11 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一批磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑，按照1.3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。分別于0、2、4、6、8 h按1.4項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，考察制劑中SD峰面積變化。

1.12 耐用性實(shí)驗(yàn) 按照1.3.1和1.3.2項(xiàng)下方法，制備對(duì)照品溶液及樣品溶液，將色譜條件參數(shù)作適當(dāng)變化后，在不同的色譜條件下測(cè)定樣品含量，考察方法的耐用性。

1.13 含量測(cè)定 取磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑3批（批號(hào)：150212、150413、150511），按1.3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按1.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算該自制制劑中SD含量。

2 結(jié)果

2.1 專屬性實(shí)驗(yàn) 結(jié)果顯示在S D出峰處無其他輔料峰干擾，說明空白輔料對(duì)SD的含量測(cè)定無干擾作用，該方法專屬性良好（圖1）。

圖1 高效液相色譜

2.2 線性相關(guān)性考察 以峰面積值A(chǔ)為縱坐標(biāo)（y），以SD對(duì)照品濃度C為橫坐標(biāo)（x），進(jìn)行回歸分析，計(jì)算得線性方程：y=44030x-75.37，相關(guān)系數(shù)為1。結(jié)果表明，SD在29.83～198.9μg/ml范圍內(nèi)，濃度C與其峰面積A呈較好的線性關(guān)系。

2.3 儀器精密度實(shí)驗(yàn) 結(jié)果顯示，SD峰面積RSD為0.07%（n=6），表明上述色譜法精密度較高，滿足磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑含量測(cè)定要求。

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 結(jié)果顯示，磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑樣品平均含量為97.54%，RSD為0.49%（n=6），表明本方法重復(fù)性較好。

2.5 中間精密度實(shí)驗(yàn) 將1.7項(xiàng)下與1.9項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)共12個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果合并計(jì)算，平均含量為98.53%，RSD為1.12%（n=12），見表1。結(jié)果表明，本法中間精密度良好。

2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 結(jié)果顯示，低、中、高3個(gè)級(jí)別質(zhì)量濃度SD平均回收率為101.90%，RSD為0.98%（n=9），見表2。

表1 中間精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.7 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 對(duì)照品和供試品溶液SD峰面積RSD分別為0.39%和0.11%。結(jié)果表明對(duì)照品溶液、供試品溶液在配制完成后8 h內(nèi)均穩(wěn)定。

2.8 耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，色譜條件作適當(dāng)變化后，對(duì)測(cè)定該自制制劑中SD含量結(jié)果未產(chǎn)生顯著性影響，表明本法耐用性良好，見表3。

表3 耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(%)

3 討論

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：對(duì)SD乙腈溶液進(jìn)行紫外掃描，紫外圖譜顯示SD最大吸收波長(zhǎng)為268 nm。根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版二部,磺胺嘧混懸液含量測(cè)定項(xiàng)下SD的檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm[8]。進(jìn)一步探索磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑高效液相色譜圖中的出峰情況，發(fā)現(xiàn)在260 nm波長(zhǎng)下SD峰型尖銳，缺SD陰性對(duì)照樣品的高效液相色譜圖表明SD出峰處其他原輔料無干擾，分離度能達(dá)到要求。故選定260 nm為本研究的檢測(cè)波長(zhǎng)。

提取方法的選擇：根據(jù)SD的理化性質(zhì)[9]，SD弱堿性，不溶于水，選擇稀HCl作為SD提取溶劑。同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)油相黏度較大，且體積占比小，無法與水相有效分離，故選用乙酸乙酯作為油相分散劑。用稀HCl對(duì)油相進(jìn)行反復(fù)提取，結(jié)果表明該方法能夠?qū)⒅苿┲械腟D提取完全，回收率良好。

本實(shí)驗(yàn)建立HPLC測(cè)定磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑中磺胺嘧啶含量的方法，提高了該制劑含量測(cè)定的專屬性。通過對(duì)高效液相色譜法的精密度、重復(fù)性、耐用性、回收率等重要參數(shù)進(jìn)行考察，結(jié)果表明，HPLC測(cè)定本品時(shí)精密度、重復(fù)性、耐用性、回收率均良好，且該法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，為醫(yī)院制劑磺胺嘧啶魚肝油滴鼻劑中磺胺嘧啶的含量測(cè)定方法提供了科學(xué)依據(jù)。