曾 圣， 張效平， 王艷艷， 杜 強(qiáng)， 趙 飛

(1.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 水產(chǎn)研究所， 貴州 貴陽 550025； 2.貴州省特種水產(chǎn)工程技術(shù)中心， 貴州 貴陽 550025)

0 引言

【研究意義】鱘魚是硬骨魚綱輻鰭亞綱鱘形目魚類的總稱，鱘形目世界上現(xiàn)存2科7屬27種，我國(guó)分布有8種[1-2]。鱘魚是現(xiàn)存起源最早的脊椎動(dòng)物之一，迄今已有2億余年的歷史，素有“水中活化石”之稱。在20世紀(jì)80年代以前，鱘魚的生產(chǎn)主要來源于野外捕撈，隨著人類活動(dòng)的加劇，鱘魚棲息生境逐漸被占用和破壞，全球鱘魚產(chǎn)量快速下降。21世紀(jì)以來，隨著鱘魚人工繁育技術(shù)的不斷成熟，鱘魚人工養(yǎng)殖逐漸替代了野外捕撈，中國(guó)成為全球鱘魚人工養(yǎng)殖最多的國(guó)家。在眾多鱘魚品種中，雜交鱘因生長(zhǎng)速度快、適應(yīng)能力強(qiáng)、性成熟周期短等特點(diǎn)，逐漸成為最受養(yǎng)殖戶喜愛的鱘魚養(yǎng)殖品種之一。微生態(tài)制劑又稱益生菌、微生態(tài)調(diào)節(jié)劑、益菌劑、促生素、生菌素、生菌劑、益生劑、益生素等，是根據(jù)微生態(tài)學(xué)原理利用對(duì)宿主有益無害的益生菌或益生菌的促生長(zhǎng)物質(zhì)，經(jīng)培養(yǎng)、純化、繁殖后制成的含有大量有益活菌的制劑。因此，研究微生態(tài)制劑對(duì)雜交鱘生長(zhǎng)和免疫的影響，對(duì)生產(chǎn)中提高鱘魚養(yǎng)殖產(chǎn)量和品質(zhì)以及鱘魚養(yǎng)殖的可持續(xù)發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。【前人研究進(jìn)展】微生態(tài)制劑最初主要應(yīng)用于陸生動(dòng)物養(yǎng)殖，因其能改善腸道內(nèi)部微環(huán)境、促進(jìn)免疫功能等，而逐漸應(yīng)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖中。微生態(tài)制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中可以提高養(yǎng)殖動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)水平促進(jìn)生長(zhǎng)、提高免疫力增強(qiáng)抗病害能力、改善水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境保持水體生態(tài)平衡等[3-4]。微生態(tài)制劑種類繁多，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用的有芽孢桿菌、乳酸菌、光合細(xì)菌、EM菌和酵母菌等[5]。EM菌是由光合菌、乳酸菌，酵母菌和放線菌等5科 10屬 80余種微生物復(fù)合培養(yǎng)而成的有效微生物群，具有組成復(fù)雜、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、功能廣泛的特點(diǎn)[6],已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、環(huán)保等領(lǐng)域，對(duì)土壤惡化、連作障礙、作物的抗病抗逆能力、產(chǎn)量和品質(zhì)以及禽畜的生長(zhǎng)和抵抗疾病等有積極的促進(jìn)作用[7]?！狙芯壳腥朦c(diǎn)】貴州鱘魚養(yǎng)殖發(fā)展迅速，養(yǎng)殖產(chǎn)量已位居全國(guó)第二，現(xiàn)有養(yǎng)殖技術(shù)已相對(duì)成熟。目前未見EM菌在鱘魚養(yǎng)殖中應(yīng)用研究的報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】在流水狀態(tài)下對(duì)鱘魚投喂混有EM菌的配合飼料，研究微生態(tài)制劑對(duì)貴州山區(qū)雜交鱘生長(zhǎng)的影響，為提高鱘魚養(yǎng)殖產(chǎn)量和品質(zhì)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試雜交鱘魚400尾，體重13.30～15.28 g，由貴州惠眾漁業(yè)有限公司提供；EM菌液購自江西天意生物技術(shù)開發(fā)有限公司，測(cè)試試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)處理，處理1～3的EM菌液濃度分別為3%(T1)、6%(T2)和9%(T3)，處理4為空白對(duì)照(CK)。用蒸餾水配制的不同濃度EM菌液分別與鱘魚配合飼料按1∶5(V/M)比例充分混合攪拌，于陰涼處風(fēng)干后投喂鱘魚，每天8:00—9:00和18：00—19：00各投喂1次，投餌量為鱘魚體重的2%～3%，共投喂55 d。雜交鱘魚飼養(yǎng)在直徑2 m、水深50～60 cm的微流水圓形玻璃鋼魚池中，流量約0.000 5 m3/s。

1.3 測(cè)量指標(biāo)

試驗(yàn)開始和結(jié)束后分別測(cè)量鱘魚的體重、體長(zhǎng)及全長(zhǎng)。投喂試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)數(shù)活魚數(shù)量。從各組中隨機(jī)撈取10尾試驗(yàn)魚(共40尾)，斷尾采血，于室溫靜置1 h，然后在4℃冰箱中保持4 h，4℃下4 000 r/min離心10 min，收集上層血清用于免疫機(jī)能測(cè)定。取出40尾魚的肝臟及腸道組織，用生理鹽水沖洗干凈并用濾紙吸干，稱重，各組織用預(yù)冷的生理鹽水制備成1∶9的勻漿液，用于消化酶活性測(cè)定，勻漿過程在冰浴中進(jìn)行。

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo) 生長(zhǎng)指標(biāo)由相對(duì)增重率、特定生長(zhǎng)率、平均日增重和存活率4個(gè)指標(biāo)組成。

相對(duì)增重率=(終末體重-初始體重)/初始體重×100%

特定生長(zhǎng)率=(ln終末體重-ln初始體重)/試驗(yàn)時(shí)間×100%

平均日增重=(終末體重-初始體重)/試驗(yàn)時(shí)間

存活率=終末尾數(shù)/初始尾數(shù)×100%

1.3.2 消化酶活性 胃蛋白酶：1 mg組織蛋白在37℃下1 min分解蛋白生成1 μg氨基酸相當(dāng)于1個(gè)酶活力單位(U)。胰蛋白酶：在pH 8.0、37℃條件下，1 mg蛋白中含有的胰蛋白酶1 min使吸光度變化0.003為1個(gè)酶活力單位(U)。淀粉酶：組織中1 mg蛋白在37℃與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個(gè)淀粉酶活力單位(U)。脂肪酶：在37℃條件下，1 g組織蛋白在反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為1個(gè)酶活力單位(U)。

1.3.3 免疫機(jī)能 血清中超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)和過氧化物酶(POD)采用南京建成生物有限公司的試劑盒測(cè)定。溶菌酶(LSZ)∶530 nm波長(zhǎng)下1 min可以使吸光率下降0.001的溶菌酶的量為1個(gè)酶活性單位(U)。超氧化物歧化酶(SOD)：1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為1個(gè)SOD活力單位(U)。過氧化物酶(POD)：在37℃條件下，1 mL血清(漿)1 min催化1 μg底物的酶量定義為1個(gè)酶活性單位(U)。

2 結(jié)果與分析

2.1 微生態(tài)制劑不同濃度下雜交鱘的生長(zhǎng)情況

從表1看出，投喂微生態(tài)制劑55 d后，雜交鱘平均體重、相對(duì)增重率、特定生長(zhǎng)率、平均日增重、平均體長(zhǎng)、平均全長(zhǎng)、存活率等生長(zhǎng)指標(biāo)對(duì)照均低于T1、T2和T3；T2除存活率外，各項(xiàng)指標(biāo)均高于T1和T3；存活率各處理間相差不大。

表1 投喂微生態(tài)制劑雜交鱘的生長(zhǎng)指標(biāo)

2.2 微生態(tài)制劑不同濃度下雜交鱘的消化酶活性

從表2看出，投喂微生態(tài)制劑55 d后，胰蛋白酶活性T2最高，其次是T3，對(duì)照最低；胃蛋白酶活性T2最高，其次是T3，對(duì)照最低；淀粉酶活性T3最高，T2其次，對(duì)照最低；脂肪酶活性T1最高，T2次之，對(duì)照最低。

表2 投喂微生態(tài)制劑雜交鱘的消化酶活性

2.3 微生態(tài)制劑不同濃度下雜交鱘的免疫酶活性

從表3看出，投喂微生態(tài)制劑后T1～T3雜交鱘免疫相關(guān)酶活性均高于對(duì)照。超氧化物歧化酶活性T2最高，T2次之，對(duì)照最低；溶菌酶活性T2最高，T1次之，對(duì)照最低；過氧化物酶活性T3最高，T2次之，對(duì)照最低。

表3 投喂微生態(tài)制劑雜交鱘的免疫相關(guān)酶活性

3 討論

微生態(tài)制劑中含有多種有益微生物，不僅可以改善水質(zhì)，還可以提供蛋白質(zhì)、維生素、類胡蘿卜素等，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)。袁成玉等[8]對(duì)幼刺參研究表明，飼料中添加芽孢桿菌、光合細(xì)菌等可以加快幼參生長(zhǎng)，并能減少死亡，提高幼參的成活率。丁麗等[9]研究發(fā)現(xiàn)，酵母菌、乳酸菌和芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用，其中酵母菌是影響異育銀鯽生長(zhǎng)的主要因素。飼料中添加芽孢桿菌對(duì)西伯利亞鱘幼魚有一定的促生長(zhǎng)作用，并可提高餌料系數(shù)以及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率[10]。羅輝等[11-12]發(fā)現(xiàn)，飼料中添加微生態(tài)制劑有提高鯉魚生產(chǎn)性能的趨勢(shì)，其中以芽孢桿菌對(duì)鯉魚的質(zhì)量增加和餌料利用率的促進(jìn)作用最強(qiáng)。EM菌在促進(jìn)大口鲇和鯽魚生長(zhǎng)和改善增重效果方面能起到積極作用[13]。本研究表明，在流水狀態(tài)下，投喂含有微生態(tài)制劑的飼料55 d后，雜交鱘相對(duì)增重率、特定生長(zhǎng)率、平均日增重、成活率等生長(zhǎng)指標(biāo)均高于不含微生態(tài)制劑的飼料。相較于鯉魚、大口鲇和異育銀鯽等，本研究微生態(tài)制劑對(duì)雜交鱘生長(zhǎng)指標(biāo)的提升相對(duì)較小，原因可能是在流水狀態(tài)下養(yǎng)殖水體水交換率較高，部分微生態(tài)制劑隨水流排出，留在養(yǎng)殖水體的微生態(tài)制劑相對(duì)較少造成。因此，在流水養(yǎng)殖條件下，如何提高魚類對(duì)微生態(tài)制劑的攝入效率是今后的研究方向之一。

王荻等[14]選用以枯草芽孢桿菌為主要成分的微生態(tài)制劑進(jìn)行池塘養(yǎng)殖投喂、潑灑和混合使用試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，投喂微生態(tài)制劑可以促進(jìn)草魚消化酶活性，對(duì)草魚快速健康生長(zhǎng)有較好作用。袁成玉等[8]發(fā)現(xiàn)，在投喂微生態(tài)制劑后，試驗(yàn)組刺參腸道中淀粉酶、蛋白酶活性提升較明顯，纖維素酶活性提升較小。高欣等[10]發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌能夠顯著提高西伯利亞鱘幼魚蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、粗灰分以及能量等的消化率。劉龍鎮(zhèn)等[15]研究結(jié)果表明，飼料中合理添加復(fù)合菌制劑、復(fù)合菌酶制劑及復(fù)合菌培養(yǎng)物能提高對(duì)蝦血清的非特異性免疫酶活性，增強(qiáng)對(duì)蝦對(duì)副溶血弧菌的抗病力。本研究結(jié)果與多數(shù)水產(chǎn)動(dòng)物的研究結(jié)果相似，雜交鱘魚胰蛋白酶、胃蛋白酶、淀粉酶以及脂肪酶活性在投喂含有EM菌飼料后均有顯著提升，表明微生態(tài)制劑對(duì)雜交鱘營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收起積極作用，這也直接反映在各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)中。

溶菌酶是一種能水解細(xì)菌中黏多糖的堿性酶，在魚類中主要存在于黏液、淋巴組織、血清、頭腎等，是魚類非特異性免疫中一種重要的酶[16]。超氧化物歧化酶是廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中的金屬酶，對(duì)于增強(qiáng)吞噬細(xì)胞防御能力和整個(gè)機(jī)體的免疫功能具有重要作用。劉曉勇等[17]研究表明，飼料中添加枯草芽孢桿菌能顯著提高雜交鱘幼魚的SOD活性。過氧化物酶廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。本研究結(jié)果表明，雜交鱘魚投喂含有EM菌飼料后，免疫相關(guān)的LSZ、SOD、POD活性均顯著提高，表明EM菌能有效提高雜交鱘的免疫機(jī)能。

4 結(jié)論

投喂含有微生態(tài)制劑的飼料后，雜交鱘生長(zhǎng)指標(biāo)、消化酶活性、免疫機(jī)能均顯著提高，以在鱘魚配合飼料中添加6%EM菌液的處理效果最為明顯?？梢?，投喂含有微生態(tài)制劑的飼料是提升鱘魚養(yǎng)殖效率的一種有效方式。