溫 靜 余哲琪 田佳迎 陳 忠

(海南師范大學(xué)熱帶島嶼生態(tài)學(xué)教育部重點實驗室，?？?571158)

近年來，由于畜牧業(yè)生產(chǎn)的集約化發(fā)展，熱應(yīng)激對畜禽造成的影響越來越嚴重[1]。熱應(yīng)激影響著家禽生產(chǎn)力的諸多方面，如導(dǎo)致肉禽生產(chǎn)性能下降[2]、繁殖能力降低[3]，同時阻礙家禽的法氏囊等免疫器官的發(fā)育，降低抗氧化能力，提高細胞凋亡率[4]；熱應(yīng)激還會引起雛雞小腸黏膜的抗氧化功能明顯損傷[5]，并且顯著降低消化酶的活性，從而導(dǎo)致腸道吸收功能和免疫屏障嚴重受損[6]；同時，熱應(yīng)激也影響家禽腸道中蛋白質(zhì)的利用率以及營養(yǎng)轉(zhuǎn)運體的基因表達，甚至增加家禽的死亡率[7-8]。因此，高溫環(huán)境導(dǎo)致的熱應(yīng)激問題使家禽業(yè)的發(fā)展面臨著巨大的挑戰(zhàn)[9]。胰腺是家禽重要的代謝器官和消化器官，在胰液的分泌、消化酶的合成以及營養(yǎng)物質(zhì)的代謝等方面具有十分重要的作用。消化酶活性是反映機體消化生理機能的一項重要指標，消化酶活性的高低反映了動物機體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化能力，直接影響蛋白質(zhì)、脂肪等營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，最終影響動物的生產(chǎn)性能[10-11]。

γ-氨基丁酸(GABA)是一種廣泛存在于動物體內(nèi)的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，國家衛(wèi)生部2009年批準其用于食品加工?，F(xiàn)在GABA作為一種安全的食品添加劑，廣泛應(yīng)用于食品和畜牧業(yè)，能夠有效減輕熱應(yīng)激對家畜生理功能的影響，被認為是一種安全的飼料添加劑[12-13]。本課題組前期研究已經(jīng)證實，每天灌喂50 mg/kg GABA可以減緩熱應(yīng)激[(40.0±0.5) ℃]對雛雞腸道造成的損傷，有效改善熱應(yīng)激雛雞小腸黏膜的免疫功能[14]；另外，將30 mg/kg GABA添加到仔豬飼糧中能夠抑制腸上皮細胞凋亡，保持腸絨毛的完整性，降低仔豬的腹瀉率[15]。有研究指出，在熱應(yīng)激[(30±2) ℃]蛋鵪鶉的飼糧中添加25 mg/kg GABA可提高蛋鵪鶉的生產(chǎn)性能以及抗氧化能力[16]；而在飼糧中添加5 g/kg谷氨酰胺和100 mg/kg GABA可以提高肉雞在高溫(30～34 ℃)環(huán)境下的抗熱應(yīng)激能力以及血清胰高血糖素、谷氨酸、胰島素含量和肌酸激酶、堿性磷酸酶活性等血清參數(shù)[17]。目前關(guān)于熱應(yīng)激對雛雞消化系統(tǒng)影響的研究主要集中在腸道方面，而對胰腺的研究報道較少。因此，研究熱應(yīng)激對雛雞胰腺組織結(jié)構(gòu)、生理生化等方面的損傷以及緩解這些損傷的措施至關(guān)重要。因此，本研究擬探討GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織結(jié)構(gòu)、抗氧化能力、消化酶活性及細胞凋亡情況的影響，明確GABA能否恢復(fù)熱應(yīng)激對胰腺組織結(jié)構(gòu)、消化酶、抗氧化酶造成的損傷，為GABA在家禽抗熱應(yīng)激領(lǐng)域的進一步應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

將240只1日齡健康雄性文昌雞雛雞隨機分為對照組(CK組)、熱應(yīng)激組(HS組)、對照+GABA組(CK+組)，熱應(yīng)激+GABA組(HS+G組)，每組60只(每組6個重復(fù)，每個重復(fù)10只)，稱重和編號，使雛雞組間體重、采食量無顯著差異(P>0.05)。所有雛雞均自由采食同一飼糧(市售肉小雞配合飼料，營養(yǎng)水平見表1)和飲用蒸餾水。各組雛雞均在常規(guī)條件下飼養(yǎng)6周，每天記錄直腸溫度、采食和飲水情況。從2周齡開始，CK組與HS組每日每只灌喂0.2 mL的生理鹽水，CK+G組和HS+G組每日每只灌喂0.2 mL的GABA水溶液(GABA灌喂量為50 mg/kg BW)。每天灌喂2 h后于12:00—14:00對HS組和HS+G組文昌雞雛雞進行熱應(yīng)激，氣候箱設(shè)定溫度在(40.0±0.5)℃、相對濕度為(70±5)%，同時將CK組和CK+G組的文昌雞雛雞放于溫度(32.46±0.16) ℃、相對濕度(70±5)%的氣候箱中，熱應(yīng)激結(jié)束后，再將全部雛雞放回雞籠常規(guī)飼養(yǎng)。

表1 飼糧營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.2 樣品采集和處理

于2～6周齡末，每組分別取6只文昌雞雛雞，剖取胰腺，去除脂肪稱其鮮重。一部分胰腺組織保存于-80 ℃，以供進一步分析；另一部分胰腺組織用Bouin固定液固定，用于制作組織切片。

1.3 胰腺組織結(jié)構(gòu)觀察

將胰腺組織切片常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色，隨機選取3張，用Olympus-BX50F顯微鏡觀察胰腺組織結(jié)構(gòu)，再以YD400C數(shù)字攝像系統(tǒng)進行拍攝，每張切片拍攝5個不同視野。

1.4 胰腺組織中抗氧化指標測定

用低溫磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗胰腺組織以除去血液，并用濾紙吸干。以質(zhì)量體積比9∶1的比例添加pH 7.4的PBS，在4 ℃下用研磨儀研磨3 min，直到細胞完全破碎，液體顏色均勻。隨后，將胰腺組織勻漿在4 ℃下3 000 r/min離心10 min，收集上清液并在-20 ℃下儲存，用以測定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.5 胰腺組織中GSH-Px、SOD mRNA相對表達量的測定

1.5.1 胰腺組織總RNA的提取及濃度檢測

用電動研磨器對胰腺組織進行研磨勻漿，按照總RNA提取試劑盒(貨號：dp431，天根生化科技有限公司)提取胰腺組織總RNA，通過超微量紫外分光光度計測量胰腺組織總RNA的濃度和純度。根據(jù)OD260 nm/OD280 nm來判斷RNA純度，二者比值在1.8～2.0為宜。

1.5.2 cDNA的合成

采用Fast Quantc DNA第1鏈合成試劑盒(貨號：kr116，天根生化科技有限公司)，于冰上進行cDNA的反轉(zhuǎn)錄。先配制gDNA去除反應(yīng)體系：取5×gDNA Buffer 2 μL、總RNA 1 μg，用RNase-Free ddH2O補足至10 μL，徹底混勻，短暫離心后置于42 ℃孵育3 min，然后置于冰上；再配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系：10×Fast RT Buffer 2 μL、RT Enzyme Mix 1 μL、FQ-RT Primer Mix 2 μL，用RNase-Free ddH2O補足至10 μL，然后與第1步的gDNA去除反應(yīng)體系(10 μL)混勻，42 ℃孵育15 min后，再于95 ℃孵育3 min，得到的cDNA于-20 ℃低溫保存用于后續(xù)試驗。

1.5.3 引物設(shè)計與實時熒光定量PCR條件

PCR引物運用Primer軟件設(shè)計，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，引物序列及參數(shù)見表1。將GSH-Px、SOD引物濃度稀釋至10 μmol/L。以內(nèi)參基因β-肌動蛋白(β-actin)為內(nèi)標，對GSH-Px、SODmRNA進行相對定量分析。

表2 引物信息

1.6 胰腺組織中消化酶活性的測定

胰腺組織上清液的提取方法同1.4。采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的淀粉酶試劑盒(貨號：C016-2-1)、脂肪酶試劑盒(貨號：A054-1-1)和胰蛋白酶試劑盒(貨號：A080-2-1)測定相應(yīng)的酶活性，并嚴格按照說明書進行操作。

1.7 胰腺組織中淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶mRNA相對表達量的測定

胰腺組織總RNA的提取、濃度檢測及cDNA的合成同1.5。PCR引物運用Primer軟件設(shè)計，引物序列及參數(shù)見表1。將淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶引物濃度分別稀釋至10 μmol/L，以內(nèi)參基因β-actin為內(nèi)標，對淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶mRNA進行相對定量分析。

1.8 胰腺細胞凋亡及分布密度

采用熒光法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(貨號：G002-2-2，南京建成生物工程研究所)對常規(guī)石蠟切片進行處理，每個樣本選取3張切片，每張切片取5個視野，經(jīng)YD400C數(shù)字攝像系統(tǒng)對組織切片進行拍照處理，運用Image-Plus Pro軟件測量凋亡細胞數(shù)量及視野面積，通過(凋亡細胞數(shù)量/視野面積)得出凋亡細胞分布密度。

1.9 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準誤(mean±SE)表示，應(yīng)用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，并采用Duncan氏法進行多重比較，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 胰腺組織結(jié)構(gòu)觀察

觀察雛雞胰腺組織結(jié)構(gòu)(圖1)發(fā)現(xiàn)，與CK組比較，HS組雛雞胰腺組織腺泡破壞，紋理紊亂，有的細胞核固縮，溶解消失，呈現(xiàn)一定的空泡化；而CK+G組雛雞胰腺組織腺泡結(jié)構(gòu)完整，輪廓清晰，無明顯異常；HS+G組雛雞胰腺組織腺泡結(jié)構(gòu)完整，輪廓較清晰，部分紋理紊亂，胰腺組織結(jié)構(gòu)較正常。

A：CK組；B：CK+G組；C：HS組；D：HS+G組。比例尺為50 μm。5W:5周齡。箭頭所指為發(fā)生病理變化。

2.2 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織抗氧化能力的影響

如表3所示，在2～6周齡時，4組雛雞胰腺組織SOD活性均隨著周齡的增長呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，HS組雛雞的SOD活性一直為4組中最低水平。在5、6周齡時，CK+G組和HS+G組的SOD活性高于CK組和HS組(P>0.05)，而在2、4周齡時，CK組的SOD活性顯著高于HS組(P<0.05)。在2～6周齡時，HS組雛雞胰腺組織GSH-Px活性隨著周齡的增長一直為下降趨勢，CK組和CK+G組則總體呈現(xiàn)上升趨勢，在6周齡時達到峰值且CK組GSH-Px活性顯著高于HS組(P<0.05)。HS+G組雛雞胰腺組織GSH-Px活性隨著周齡的增長呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，而且在5周齡時顯著高于HS組(P<0.05)。通過對4組雛雞胰腺組織MDA含量進行比較發(fā)現(xiàn)，在6周齡時CK+G組和HS+G組MDA含量顯著低于HS組(P<0.05)。組別對雛雞胰腺組織SOD和GSH-Px活性有顯著影響(P<0.05)，且周齡與組別間的交互作用對雛雞胰腺組織MDA含量有顯著影響(P<0.05)。

表3 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織抗氧化能力的影響

2.3 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織中SOD、GSH-Px mRNA相對表達量的影響

如表4所示，在2～4周齡時，4組雛雞胰腺組織中SOD mRNA相對表達量無顯著差異(P>0.05)，且均隨著周齡的增長總體呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。HS組胰腺組織中SODmRNA相對表達量在5周齡時出現(xiàn)峰值，顯著高于CK組和HS+G組(P<0.05)。CK+G組胰腺組織中SODmRNA相對表達量在6周齡時達到峰值，顯著高于HS組(P<0.05)。在2～6周齡時，隨著周齡的增長，CK組和HS+G組胰腺組織中GSH-PxmRNA相對表達量呈現(xiàn)上升趨勢，而CK+G組則呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，且在5周齡時達到峰值，顯著高于HS組(P<0.05)。在2周齡時，HS組胰腺組織中GSH-PxmRNA相對表達量顯著高于CK組(P<0.05)，但是在6周齡時，CK組胰腺組織中GSH-PxmRNA相對表達量顯著高于HS組(P<0.05)。組別僅對雛雞胰腺組織中SODmRNA相對表達量有顯著影響(P<0.05)，而周齡對雛雞胰腺組織中SODmRNA相對表達量有極顯著影響(P<0.01)，對GSH-PxmRNA相對表達量有顯著影響(P<0.05)。

表4 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織中SOD、GSH-Px mRNA相對表達量的影響

2.4 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織中消化酶活性的影響

如表5所示，在2～6周齡時，各組雛雞胰腺組織中淀粉酶活性隨著周齡的增長都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，CK組、CK+G組和HS+G組均在5周齡時出現(xiàn)峰值，而HS組在3周齡時出現(xiàn)峰值，且在5周齡時CK組和CK+G組與HS組具有顯著差異(P<0.05)。在6周齡時，CK+G組胰腺組織中淀粉酶活性顯著高于HS組(P<0.05)。在2～6周齡時，隨著周齡的增長，CK組和HS組胰腺組織中脂肪酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，而CK+G組和HS+G組則呈現(xiàn)上升趨勢。在3周齡時，HS+G組胰腺組織中脂肪酶活性顯著高于CK組(P<0.05)。在5周齡時，CK+G組胰腺組織中脂肪酶活性顯著高于HS組和HS+G組(P<0.05)，在6周齡時，胰腺組織中脂肪酶活性在CK組、HS組和CK+G組間均具有顯著差異(P<0.05)，CK+G組顯著高于CK組和HS組(P<0.05)。在2、3周齡時，4組雛雞胰腺組織中胰蛋白酶活性均較低，但隨著周齡的增長呈現(xiàn)上升趨勢。在4周齡時，CK+G組和HS+G組胰腺組織中胰蛋白酶活性急劇增加，且CK+G組顯著高于HS組(P<0.05)。周齡、組別對雛雞胰腺組織中淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性均有極顯著影響(P<0.01)，而兩者間的交互作用僅對淀粉酶活性有顯著影響(P<0.05)。

表5 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織消化酶活性的影響

2.5 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織中淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶mRNA相對表達量的影響

如表6所示，在2～6周齡時，CK+G組胰腺組織中淀粉酶mRNA相對表達量均高于其他3組，但是在2、3周齡時各組之間沒有顯著差異(P>0.05)，在4周齡時CK+G組顯著高于其他3組(P<0.05)，在5、6周齡時CK+G組有下降趨勢，但仍顯著高于其他3組(P<0.05)。在2～6周齡時，CK組和HS+G組胰腺組織中脂肪酶mRNA相對表達量隨著周齡的增長均呈現(xiàn)上升趨勢，且HS組雛雞胰腺組織中的脂肪酶mRNA相對表達量普遍低于其他3組，僅在3周齡時接近CK組。在2周齡時，CK+G組胰腺組織中脂肪酶mRNA相對表達量顯著高于CK組和HS組(P<0.05)，在5、6周齡時，相對于CK組，CK+G組胰腺組織中脂肪酶mRNA相對表達量達到較高水平，且均顯著高于HS組(P<0.05)，但在3周齡時，HS+G組胰腺組織中脂肪酶mRNA相對表達量顯著高于CK組(P<0.05)。在2～6周齡時，CK組、CK+G組和HS+G組雛雞胰腺組織中胰蛋白酶mRNA相對表達量隨著周齡的增長均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，而HS組則呈現(xiàn)上升趨勢。在2、4、5周齡時，CK+G組胰腺組織中胰蛋白酶mRNA相對表達量具有較高水平，均顯著高于HS組(P<0.05)，而且在4周齡時，CK+G組胰腺組織中胰蛋白酶mRNA相對表達量顯著高于HS組和HS+G組(P<0.05)。在3周齡時，HS+G組胰腺組織中胰蛋白酶mRNA相對表達量顯著高于HS組(P<0.05)。組別對雛雞胰腺組織中淀粉酶、胰蛋白酶和胰蛋白酶mRNA相對表達量均有極顯著影響(P<0.01)，周齡對淀粉酶和胰蛋白酶mRNA相對表達量有極顯著影響(P<0.01)，對脂肪酶mRNA相對表達量有顯著影響(P<0.05)，而兩者間的交互作用僅對淀粉酶mRNA相對表達量有顯著影響(P<0.05)。

表6 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織中淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶mRNA相對表達量的影響

2.6 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織細胞凋亡的影響

凋亡細胞在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)綠色熒光，圖2顯示，5周齡CK組雛雞胰腺組織中凋亡細胞數(shù)量明顯少于HS組和HS+G組，與HS組比較，HS+G組雛雞胰腺組織凋亡細胞數(shù)量低于HS組，而CK+G組雛雞胰腺組織凋亡細胞數(shù)量低于CK組。

A：CK組；B：CK+G組；C：HS組；D：HS+G組。比例尺為50 μm。5W:5周齡。

如表7可知，在2～6周齡時，CK+G組和HS+G組的凋亡細胞分布密度隨著周齡的增長均呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢，在3周齡時達到峰值，而HS組則呈現(xiàn)上升趨勢。在5、6周齡時，HS組凋亡細胞分布密度顯著高于其他3組(P<0.05)；在4、6周齡時，HS+G組凋亡細胞分布密度下降，且與CK組差異不顯著(P>0.05)。組別對雛雞胰腺組織中凋亡細胞分布密度有極顯著影響(P<0.01)，且組別與周齡間的交互作用對其有顯著影響(P<0.05)。

表7 GABA對熱應(yīng)激雛雞胰腺組織凋亡細胞分布密度的影響

3 討 論

有研究表明，與正常對照組小鼠相比，熱應(yīng)激小鼠的胰腺重量和系數(shù)略有降低，表明熱應(yīng)激可能損傷了小鼠的胰腺組織結(jié)構(gòu)與功能[18]。在生長初期，雛雞需要較高的溫度來維持其生長發(fā)育[19]，因此，早期熱應(yīng)激對雛雞胰腺組織的影響并不大。然而在熱應(yīng)激后期，雛雞胰腺組織出現(xiàn)結(jié)構(gòu)紊亂，組織損傷嚴重。GABA處理則使熱應(yīng)激雛雞胰腺組織結(jié)構(gòu)的完整性接近CK組，表明GABA能夠減輕熱應(yīng)激對雛雞胰腺組織結(jié)構(gòu)的損傷，維持胰腺組織結(jié)構(gòu)發(fā)育接近正常水平。

本試驗還發(fā)現(xiàn)，4組雛雞胰腺組織中SOD活性僅在2、6周齡時具有顯著差異，在6周齡時HS組、HS+G組和CK+G組均高于CK組，這可能是由于HS組和HS+G組的雛雞胰腺受到長期熱攻擊，使得胰腺組織細胞內(nèi)活性氧(ROS)過量產(chǎn)生，而為了維持胰腺組織內(nèi)的氧化-抗氧化平衡，機體通過代償機制上調(diào)SOD活性維持氧化-抗氧化平衡，而CK+G組可能是由于GABA的長期添加，GABA促使SOD基因表達上調(diào)，從而增加雛雞胰腺組織的抗氧化能力。雛雞胰腺組織中SODmRNA相對表達量在5、6周齡時具有顯著差異，在5周齡時，HS組胰腺組織中SODmRNA相對表達量顯著高于CK組，HS+G組胰腺組織中SODmRNA相對表達量高于CK組，也是機體通過代償機制增強胰腺組織的抗氧化能力。在6周齡時，由于GABA的長期添加，CK+G組胰腺組織中SODmRNA相對表達量較HS組顯著上調(diào)，增強了胰腺組織的抗氧化能力。Zhang等[20]的試驗結(jié)果顯示，飼糧中添加50 mg/kg GABA能提高羅馬母雞血清胰島素水平，免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)和補體3(C3)含量，使抗氧化能力和免疫功能得到增強，從而提高母雞的生產(chǎn)性能。在2～6周齡期間，僅在5周齡時HS+G組雛雞胰腺組織中GSH-Px活性高于其他3組。胰腺組織中的抗氧化系統(tǒng)處于動態(tài)平衡狀態(tài)，抗氧化系統(tǒng)中SOD和GSH-Px的活性不能同時升高，一種機制的激活和另一種機制的相應(yīng)抑制可能就是體內(nèi)的自我保護機制。然而，這種可能的機制仍需進一步研究和證實。而在5周齡時CK+G組胰腺組織中GSH-PxmRNA相對表達量顯著高于HS組，可能是由于GABA代謝產(chǎn)生了大量谷氨酸[21]。谷氨酸是合成GSH-Px的關(guān)鍵元素，能夠維持體內(nèi)GSH-Px活性的保持在一定水平。另外，在5周齡時，HS組和HS+G組胰腺組織中MDA含量高于CK組，這表明由于胰腺組織受到累積熱應(yīng)激的攻擊，使得胰腺細胞產(chǎn)生過多的MDA，而此時GABA發(fā)揮清除胰腺組織中MDA的能力不足。在6周齡時，CK+G組和HS+G組胰腺組織中MDA含量低于HS組和CK組，證明GABA在6周齡起到了清除胰腺組織中MDA的作用，這可能是由于投喂的GABA是間接作用于胰腺組織，使其SODmRNA相對表達量在6周齡處于較高水平，因此，GABA能夠顯著提高機體的抗氧化能力。

Wang等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加50 mg/kg GABA可以明顯提高奶牛的采食量，并可提高奶牛的泌乳量，且具有劑量效應(yīng)。有研究報道，35～36 ℃高溫條件下在飼糧中添加50～100 mg/kg GABA有助于雞對高溫環(huán)境的適應(yīng)，提高產(chǎn)蛋性能[23-24]。蔣磊等[25]的研究表明，32 ℃高溫處理顯著降低了肉雞十二指腸中胰蛋白酶、脂肪酶及淀粉酶活性。阮暉等[26]報道，在34.7 ℃熱應(yīng)激條件下，肉雞小腸內(nèi)總蛋白水解酶、脂肪酶和淀粉酶活性均顯著下降，且肉雞日增重與這幾種酶的活性呈極顯著正相關(guān)，并通過配對試驗證明上述酶活性的降低并非由采食量下降所致，而是高溫環(huán)境直接作用的結(jié)果。在目前的研究中，36 ℃高溫處理后肉雞空腸脂肪酶和胰蛋白酶活性顯著降低[27]。本研究則發(fā)現(xiàn)，在3～6周齡，HS組雛雞胰腺組織中3種消化酶活性都低于其他3組，這一結(jié)果可能是因為熱應(yīng)激導(dǎo)致交感神經(jīng)興奮，引起血管收縮，減少胰腺的血流量，使胰液的分泌減少，從而各個消化酶的分泌量減少；而在6周齡時，CK+G組和HS+G組雛雞胰腺組織中淀粉酶和胰蛋白酶活性高于CK組，說明GABA的添加可以增強胰腺組織中消化酶的活性。另外，在3周齡時，HS組雛雞胰腺組織中淀粉酶和蛋白酶mRNA相對表達量高于CK組，這是由于雛雞處于快速生長期，組織通過代償功能來緩解熱應(yīng)激造成的損傷，從而刺激胰腺組織中淀粉酶和蛋白酶mRNA表達量增加，而且在長時間的熱應(yīng)激條件下雛雞會通過增強新陳代謝來調(diào)節(jié)體溫[28]。在2、4、5、6周齡時，CK+G組雛雞胰腺組織中淀粉酶和脂肪酶活性都高于其他3組，HS+G組雛雞胰腺組織中淀粉酶和脂肪酶活性都高于HS組和CK組，表明熱應(yīng)激會降低雛雞胰腺組織中主要消化酶基因的表達，與消化酶活性測定結(jié)果基本一致。而在2～5周齡時，HS組雛雞腺胰組織中蛋白酶mRNA相對表達量顯著低于HS+G組，說明GABA的添加促進了熱應(yīng)激雛雞胰腺組織中胰蛋白酶基因的表達。由于消化酶合成與分泌的機理目前還沒有十分清楚，關(guān)于熱應(yīng)激對動物胰腺組織中主要消化酶基因表達的影響又少見報道，所以熱應(yīng)激使消化酶基因的表達量下降的機理還有待進一步的研究。

細胞凋亡作為生物體內(nèi)的一個重要生命現(xiàn)象，對機體的正常發(fā)育具有重要作用，一旦細胞凋亡發(fā)生異常，機體發(fā)生疾病的概率就會增加[29]。在2～6周齡時，CK組雛雞胰腺組織中細胞凋亡情況變化不大，隨周齡的增長呈現(xiàn)出先上升后下降的過程，在4周齡時凋亡細胞分布密度達到最大，而在5周齡時細胞凋亡數(shù)量又下降到最低水平。這可能是因為4周齡為雛雞發(fā)育最旺盛的時期，自然凋亡細胞數(shù)量增多所致，而在5周齡時凋亡細胞數(shù)量下降則可能與該時期雛雞胰腺發(fā)育緩慢相關(guān)。在2周齡時，HS組雛雞胰腺組織中細胞凋亡處于較低水平，而在3～6周齡期間，胰腺組織中細胞凋亡水平急劇上升，這可能是由于熱應(yīng)激對雛雞胰腺組織造成的損傷還不足以使得胰腺組織中細胞的正常凋亡過于紊亂，而從3周齡開始，由于雛雞快速生長，以及胰腺組織所受的熱應(yīng)激的損傷累積，使得雛雞胰腺組織中細胞凋亡水平急劇上升。有研究發(fā)現(xiàn)慢性熱應(yīng)激導(dǎo)致肉雞小腸中消化酶活性失調(diào)，細胞增殖被抑制，細胞凋亡增加[28]。HS+G組雛雞胰腺組織中細胞凋亡水平在3周齡時較高，但在3周齡后HS+G組雛雞胰腺組織中細胞凋亡水平逐漸下降，并于6周齡時接近CK組水平，這可能是由于GABA緩解了雛雞的熱應(yīng)激，從而使得HS+G組胰腺組織中細胞凋亡水平在3周齡后逐漸下降。CK+G組雛雞胰腺組織中凋亡細胞數(shù)量一直處于較低水平，僅在3周齡時高于CK組，可能是由于雛雞的快速生長使得胰腺組織中的自然凋亡細胞的數(shù)量增加，而4～6周齡時CK+G組雛雞胰腺組織中細胞凋亡水平處于下調(diào)狀態(tài)，且低于其他3組，可能是由于GABA的長期添加對雛雞胰腺的發(fā)育起到促進作用，緩解了雛雞胰腺組織中細胞的凋亡。

4 結(jié) 論

綜上所述，熱應(yīng)激能夠改變雛雞胰腺組織的結(jié)構(gòu)，降低抗氧化酶和消化酶活性，增加細胞凋亡，嚴重阻礙了雛雞胰腺的發(fā)育進程；GABA的添加可以使熱應(yīng)激雛雞胰腺組織損傷程度減輕，使雛雞胰腺組織結(jié)構(gòu)保持完整性，還能提高雛雞胰腺組織中抗氧化酶和消化酶的活性及其mRNA相對表達量，降低MDA含量。所以，GABA可以作為添加劑來減輕熱應(yīng)激對雛雞胰腺組織結(jié)構(gòu)、抗氧化能力和消化功能發(fā)育的負面影響。