潘素敏 申樹瑞 張海華 劉 欣 孔令鈺 魏 雪

(河北科技師范學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河北省特色動(dòng)物種質(zhì)資源挖掘與創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，秦皇島 066000)

乳化劑的使用可以使脂肪的利用得到提高，膽汁酸是一種新型的綠色乳化劑，對(duì)于脂類的吸收具有很好的促進(jìn)作用。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加膽汁酸可以提高機(jī)體對(duì)脂類物質(zhì)的乳化和吸收，膽汁酸還可消炎殺菌，保護(hù)肝臟和膽，減少其病變[1-2]。王進(jìn)等[1]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼糧中添加膽汁酸對(duì)生豬的生長(zhǎng)性能有顯著提高作用，從而提高經(jīng)濟(jì)收益。程偉偉等[2]研究在飼糧中添加500 g/t膽汁酸對(duì)肉雞的影響，發(fā)現(xiàn)飼養(yǎng)前期添加膽汁酸組肉雞的平均體重和平均體增重顯著提高，料重比下降。楊玉芝等[3]研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于生長(zhǎng)前期的肉雞，在飼糧中添加適量膽汁酸可以使肉雞的平均日增重顯著提高。曾本和等[4]研究發(fā)現(xiàn)，高脂飼料中添加膽汁酸可以使齊口裂腹魚的肝胰臟脂肪代謝酶活性顯著提高，促進(jìn)脂質(zhì)代謝。貉是珍貴的毛皮動(dòng)物，近年來，我國(guó)貉的養(yǎng)殖數(shù)量不斷上升，目前膽汁酸在其他動(dòng)物上的研究較多，但在毛皮動(dòng)物方面的研究未見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)以育成期貉作為研究對(duì)象，探究飼糧膽汁酸水平對(duì)于育成期貉的生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率、氮沉積和血清生化指標(biāo)的影響，從而選擇出適宜的膽汁酸添加水平，為膽汁酸在貉養(yǎng)殖過程中的合理利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)采用單因素隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取健康、體重相近的50日齡公貉64只，隨機(jī)分成4組，每組16個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只貉。試驗(yàn)地點(diǎn)為河北華夏新農(nóng)科技股份公司昌黎莫各莊養(yǎng)殖場(chǎng)。4組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加0(Ⅰ組)、100(Ⅱ組)、300(Ⅲ組)、500 mg/kg膽汁酸(Ⅳ組)的飼糧。預(yù)試期10 d，正試期90 d。

1.2 試驗(yàn)飼糧

基礎(chǔ)飼糧參考NRC(1982)和相關(guān)文獻(xiàn)[5-6]及生產(chǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)值進(jìn)行配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

在試驗(yàn)開始前要對(duì)貉的食盆和籠舍進(jìn)行徹底的清洗和消毒，采用單籠飼養(yǎng)，每日早、晚各飼喂1次(07:30與15:30)。自由飲水，每日記錄進(jìn)食量，早上喂料后觀察貉的健康情況。

1.4 消化代謝試驗(yàn)

于2019年7月26日至2019年7月28日進(jìn)行消化代謝試驗(yàn)，共計(jì)3 d，每組分別挑選8只體重相近、健康狀況良好的貉，使用全收糞法進(jìn)行試驗(yàn)。在每個(gè)收集桶內(nèi)加入20 mL的10%的硫酸進(jìn)行固氮，每天記錄貉的給食量和剩料量，計(jì)算采食量。3 d之后將全部的糞樣和尿樣分別收集。將收集的尿樣混勻并過濾，放置在-20 ℃保存?zhèn)溆茫S樣稱重后按鮮重的5%噴灑10%的硫酸，65 ℃烘干至恒重，粉碎過40目篩，制成風(fēng)干樣本，保存待測(cè)。

1.5 血清制備

育成期試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)選取8只健康貉，在空腹時(shí)后肢靜脈采血，血液收集用5 mL的促凝管，經(jīng)4 000 r/min離心10 min，分離血清放置于-80 ℃保存，備用。

1.6 測(cè)定指標(biāo)及方法

試驗(yàn)開始時(shí)對(duì)貉稱重作為初始體重，在之后每隔20 d早上空腹對(duì)貉進(jìn)行1次稱重，并記錄貉日采食量，計(jì)算平均日增重、平均日采食量及料重比。

依據(jù)國(guó)標(biāo)對(duì)樣品進(jìn)行分析測(cè)定，依據(jù)GB/T 6435—2014對(duì)干物質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定，依據(jù)GB/T 6438—2007對(duì)粗灰分含量進(jìn)行測(cè)定，依據(jù)GB/T 6433—2006對(duì)粗脂肪含量進(jìn)行測(cè)定，依據(jù)GB/T 6432—2018對(duì)粗蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定。相關(guān)指標(biāo)的計(jì)算公式如下：

干物質(zhì)采食量(g/d)=給料量×給料干物質(zhì)含量-剩料量×剩料干物質(zhì)含量；干物質(zhì)排出量(g/d)=鮮糞重×糞干物質(zhì)含量；干物質(zhì)消化率(%)=[(干物質(zhì)進(jìn)食量-干物質(zhì)排出量)/干物質(zhì)進(jìn)食量]×100；粗蛋白質(zhì)消化率(%)=[(粗蛋白質(zhì)進(jìn)食量-糞中粗蛋白質(zhì)排出量)/粗蛋白質(zhì)進(jìn)食量]×100；粗脂肪消化率(%)=[(粗脂肪進(jìn)食量-糞中粗脂肪排出量)/粗脂肪進(jìn)食量]×100；食入氮(g/d)=干物質(zhì)采食量×飼糧粗蛋白質(zhì)含量/6.25；糞氮(g/d)=糞干物質(zhì)量×糞粗蛋白質(zhì)含量/6.25；尿氮(g/d)=尿體積×尿粗蛋白質(zhì)含量/6.25；氮沉積(g/d)=食入氮-糞氮-尿氮；凈蛋白質(zhì)利用率(%)=(氮沉積/食入氮)×100；蛋白質(zhì)生物學(xué)價(jià)值(%)=[氮沉積/(食入氮-糞氮)]×100。

血清生化指標(biāo)包括谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性及葡萄糖(GLU)、總蛋白(TP)、甘油三酯(TG)、白蛋白(ALB)、低密度脂蛋白(LDL)、膽固醇(CHOL)、尿素(UREA)、高密度脂蛋白(HDL)含量，采用中生北控試劑盒，參照說明書通過VITAL-E全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定[7]。

1.7 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2010進(jìn)行計(jì)算處理，用軟件SPSS 22對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，使用LSD進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果差異顯著用P<0.05來表示，差異極顯著用P<0.01來表示，試驗(yàn)的結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉生長(zhǎng)性能的影響

如表2所示，Ⅱ組末重顯著高于Ⅰ組(P<0.05);Ⅰ組平均日采食量顯著高于其他3組(P<0.05)；各組間平均日增重沒有顯著差異(P>0.05)；Ⅱ組料重比顯著低于Ⅰ組(P<0.05)。

表2 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉生長(zhǎng)性能的影響

2.2 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

如表3所示，Ⅱ組干物質(zhì)表觀消化率顯著高于Ⅳ組(P<0.05)，與Ⅰ組和Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)；Ⅰ組粗蛋白質(zhì)表觀消化率顯著高于Ⅳ組(P<0.05)，Ⅱ組粗蛋白質(zhì)表觀消化率極顯著高于Ⅳ組(P<0.01)；Ⅰ組粗脂肪表觀消化率顯著低于Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.05)，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組之間差異不顯著(P>0.05)。

表3 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

2.3 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉氮代謝的影響

如表4所示，Ⅱ組和Ⅰ組的糞氮排出量顯著低于Ⅳ組(P<0.05)；Ⅱ組的氮沉積顯著高于Ⅳ組(P<0.05)。

表4 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉氮代謝的影響

2.4 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉血清生化指標(biāo)的影響

如表5所示，Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組的血清TP含量極顯著高于Ⅰ組(P<0.01)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組之間無顯著差異(P>0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組的血清ALB含量極顯著高于Ⅰ組(P<0.01)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組之間無顯著差異(P>0.05)。各組間的血清AST活性沒有顯著差異(P>0.05)；Ⅳ組的血清ALT活性極顯著高于Ⅰ組(P<0.01)，Ⅳ組顯著高于Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05)；Ⅳ組的血清GLU含量與Ⅰ組存在極顯著差異(P<0.01)。Ⅲ、Ⅳ組的血清CHOL含量極顯著高于Ⅰ組(P<0.01)，Ⅱ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅳ組顯著高于Ⅱ組(P<0.05)；Ⅳ組的血清TG含量極顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.01)。

表5 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉血清生化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉生長(zhǎng)性能的影響

飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉生長(zhǎng)性能有影響，膽汁酸添加水平為100 mg/kg時(shí)，貉末重最大。楊家昶[8]在肉雞飼糧中添加400 g/t膽汁酸時(shí)，對(duì)21日齡前的肉仔雞體重有促進(jìn)作用。這和程偉偉等[2]在肉雞飼糧中添加膽汁酸顯著提高了公雞和母雞飼養(yǎng)前期的平均體重和平均體增重的研究結(jié)果一致。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加500 mg/kg的膽汁酸時(shí)日增重并不高，高水平的膽汁酸會(huì)產(chǎn)生負(fù)反饋抑制法尼醇X受體激活的膽汁酸合成途徑[9]。有研究發(fā)現(xiàn)，肝臟中的法尼醇X受體可以被膽汁酸激活來降低機(jī)體對(duì)GLU的進(jìn)食量，主要的表現(xiàn)形式有2種，一種是促進(jìn)肝糖原的合成，另一種是降低糖異生[9]。高水平的膽汁酸可能抑制貉的進(jìn)食量，導(dǎo)致Ⅳ組平均日增重不高。左旭冬[10]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加膽汁酸水平為500 mg/kg時(shí)，對(duì)于子代母雞的平均日增重有抑制作用，膽汁酸的添加水平較低時(shí)有促進(jìn)作用。料重比是評(píng)價(jià)飼料報(bào)酬的一個(gè)重要指標(biāo)，料重比對(duì)企業(yè)的成本控制和盈利能力有決定性影響[11]。添加膽汁酸使料重比降低，貉生長(zhǎng)前期在飼糧中膽汁酸水平為100 mg/kg時(shí)經(jīng)濟(jì)效益較好。趙盼月[12]研究發(fā)現(xiàn)，在歐洲鰻鱺飼料中添加膽汁酸可以促進(jìn)其生長(zhǎng)，降低飼料系數(shù)。孫建珍[13]研究發(fā)現(xiàn)，在大菱鲆幼魚中添加膽汁酸對(duì)飼料的利用情況有提高作用。通過貉體重指標(biāo)可以得出，育成期貉飼糧中添加適宜水平的膽汁酸能夠提高其生長(zhǎng)性能。

3.2 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率體現(xiàn)了動(dòng)物對(duì)飼料的利用效率，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收是動(dòng)物調(diào)節(jié)生理功能的基礎(chǔ)，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率對(duì)提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能有重要的意義。本試驗(yàn)中育成期貉飼糧中添加100 mg/kg膽汁酸時(shí)，干物質(zhì)表觀消化率和粗蛋白質(zhì)表觀消化率均最高，但與Ⅰ組無顯著差異。吳明海[14]飼喂奶?；A(chǔ)飼糧和在基礎(chǔ)飼糧中添加0.2%膽汁酸鹽預(yù)混料，發(fā)現(xiàn)2組之間干物質(zhì)消化率和粗蛋白質(zhì)消化率沒有顯著差異。本試驗(yàn)結(jié)果與前人在其他動(dòng)物上的研究結(jié)果一致。膽汁酸鹽具有乳化脂肪的作用，從而促進(jìn)了機(jī)體對(duì)脂肪的合成代謝[15]。唐精等[16]研究發(fā)現(xiàn)，膽汁酸可以調(diào)控脂蛋白酯酶和胰脂肪酶的活性，從而促進(jìn)脂肪消化吸收。本試驗(yàn)研究得到了相同的結(jié)果，隨著飼糧膽汁酸水平的增加，粗脂肪表觀消化率有提高的趨勢(shì)，飼糧中添加膽汁酸能夠提高貉對(duì)飼料中脂肪利用率。

3.3 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉氮代謝的影響

氮代謝反映了貉對(duì)蛋白質(zhì)的利用率情況，機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的吸收程度也影響著動(dòng)物機(jī)體的健康狀況。食入氮的多少取決于動(dòng)物的采食量。在腸肝循環(huán)中，膽汁酸與受體結(jié)合可調(diào)節(jié)膽汁酸代謝和糖脂代謝和一些能量代謝、炎癥過程等[17]，膽汁酸對(duì)于蛋白質(zhì)的影響研究較少，本試驗(yàn)中，膽汁酸添加水平為100 mg/kg的組氮沉積顯著高于膽汁酸添加水平為500 mg/kg的組，可能是由于膽汁酸添加水平過高對(duì)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生了損失。膽汁酸添加水平為100 mg/kg的組蛋白質(zhì)生物學(xué)效價(jià)和凈蛋白質(zhì)利用率與其他組相比有增加的趨勢(shì)，但是差異沒有達(dá)到顯著的水平。

3.4 飼糧膽汁酸水平對(duì)育成期貉血清生化指標(biāo)的影響

血液中的TP、ALB含量高存在多種可能，可能是由于飼糧本身的蛋白質(zhì)含量高或者是動(dòng)物機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用率提高，也有可能是動(dòng)物機(jī)體健康狀態(tài)不佳。綜合本試驗(yàn)結(jié)果分析，在低水平膽汁酸時(shí)蛋白質(zhì)的利用率提高，高水平膽汁酸對(duì)動(dòng)物機(jī)體造成損害，導(dǎo)致血清TP、ALB含量過高。Borg等[18]和Malmlof[19]研究發(fā)現(xiàn)，血清中較低的UREA含量表明氨基酸平衡良好，機(jī)體的蛋白質(zhì)合成率較高。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加100 mg/kg膽汁酸時(shí)，蛋白質(zhì)合成較高。血漿酶活性可以反映肝臟的代謝狀況[20]，AST和ALT主要分布在肝細(xì)胞內(nèi)其活性反映蛋白質(zhì)的代謝和氨基酸的利用水平。如果肝細(xì)胞膜的通透性增加或者肝細(xì)胞壞死會(huì)導(dǎo)致AST和ALT活性升高[21]。本試驗(yàn)中，膽汁酸添加水平為500 mg/kg時(shí)，血清AST和ALT活性均比較高，可能是高水平的膽汁酸對(duì)肝細(xì)胞造成損傷。張玲等[22]研究發(fā)現(xiàn)，膽汁酸的添加使鯽魚血清的ALT和AST活性降低，這與本試驗(yàn)的結(jié)果存在差異，可能是由于本試驗(yàn)中由于膽汁酸的長(zhǎng)期飼喂使肝細(xì)胞受到了損傷，造成血清中ALT和AST的活性顯著升高。有研究發(fā)現(xiàn)，膽汁酸可通過調(diào)節(jié)抑制胰高血糖素的生成，進(jìn)而降低GLU含量，但Zhang等[9]在研究中發(fā)現(xiàn)，使用GW4064長(zhǎng)期處理小鼠會(huì)產(chǎn)生相反的效果，天然的膽汁酸對(duì)于GLU的長(zhǎng)期調(diào)節(jié)效果更佳。Woollett等[23]研究發(fā)現(xiàn)，人在服用膽汁酸補(bǔ)充劑后可以顯著提高血清CHOL的吸收，與GLU代謝相似，膽汁酸的短期飼喂可以降低TG和CHOL含量，對(duì)維持正常的脂質(zhì)代謝有積極作用，但是長(zhǎng)期使用膽汁酸對(duì)于機(jī)體的脂代謝調(diào)節(jié)不利。周書耘等[24]研究中發(fā)現(xiàn)，飼喂軍曹魚膽汁酸會(huì)提高其血清中TG和CHOL含量，而張國(guó)安等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加300 mg/kg的膽汁酸可以降低大菱鲆幼魚血清中TG的含量，這與本試驗(yàn)的結(jié)果存在差異。這可能是由于動(dòng)物種類不同和生長(zhǎng)階段的不同造成的差異。LDL與HDL是運(yùn)載膽固醇的脂蛋白，動(dòng)物機(jī)體不能長(zhǎng)時(shí)間處于過高或過低的CHOL、TG含量，對(duì)于血脂代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)有非常不好的影響，嚴(yán)重時(shí)將會(huì)使動(dòng)物患病。本試驗(yàn)中高水平的膽汁酸添加對(duì)貉的影響不利，這與在小鼠[9]上的研究一致。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，綜合生長(zhǎng)性能指標(biāo)和粗脂肪表觀消化率得出，當(dāng)育成期貉飼糧中添加100 mg/kg膽汁酸時(shí)，能夠提高育成期貉體重和脂肪消化率，生長(zhǎng)性能較好。