孫海濤 王 勇 劉公言** 徐云華 趙桂省 薛海鵬 李 萌

(1.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250100；2.山東省濟(jì)南市畜牧技術(shù)推廣站，濟(jì)南 250100；3.濟(jì)南市萊蕪黑兔種業(yè)科技有限公司，濟(jì)南 250100)

生姜在我國種植面積達(dá)200萬hm2，全國每年生姜秸稈產(chǎn)量約1 000萬t。然而在山東萊蕪、安丘、昌邑等生姜主產(chǎn)區(qū)，生姜秸稈被隨意拋棄焚燒，造成資源浪費(fèi)和環(huán)境污染[1]。隨著家兔生產(chǎn)的規(guī)?；?，常規(guī)飼料資源日益缺乏，給養(yǎng)兔業(yè)的發(fā)展帶來了巨大的挑戰(zhàn)。挖掘非常規(guī)飼料、拓寬飼料種類是促進(jìn)家兔生產(chǎn)持續(xù)健康發(fā)展的關(guān)鍵。因此，因地制宜地利用生姜秸稈既能減少資源浪費(fèi)，又能緩解養(yǎng)兔業(yè)發(fā)展帶來的粗飼料資源短缺的問題?；ㄉ俏覈狈降貐^(qū)的重要經(jīng)濟(jì)作物，其收獲后的副產(chǎn)物花生秧是家兔生產(chǎn)中最為經(jīng)常使用的粗飼料原料[2-4]。目前，人們對生姜的研究主要集中在地下塊莖，且生姜粉作為綠色飼料添加劑具有改進(jìn)畜禽生長性能、提高抗氧化性能的作用[5]。然而關(guān)于地上部分生姜秸稈作為草食動(dòng)物粗飼料原料的研究尚未見報(bào)道，生姜秸稈作為家兔粗飼料原料替代花生秧在家兔生產(chǎn)上的應(yīng)用尚少有人進(jìn)行研究。萊蕪黑兔為肉用型兔，主產(chǎn)于魯中地區(qū)，具有抗逆性強(qiáng)、繁殖力高、肉質(zhì)好等突出特點(diǎn)，2021年，萊蕪黑兔被列入國家畜禽遺傳資源目錄(中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告 第381號)。目前，萊蕪黑兔是我國北方地區(qū)唯一1個(gè)家兔地方品種資源，開發(fā)利用萊蕪黑兔對推動(dòng)我國北方地區(qū)的兔肉消費(fèi)、促進(jìn)我國養(yǎng)兔業(yè)均衡持續(xù)發(fā)展具有重要意義。本課題組前期飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧適宜比例(5%和10%)的生姜秸稈替代花生秧對育肥期萊蕪黑兔生長性能無不良影響，但高水平替代組(15%組)的采食量提高，增長速度變慢，飼料轉(zhuǎn)化率降低[6]。因此，本試驗(yàn)以萊蕪黑兔為研究對象，進(jìn)一步探討飼糧中不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔胃腸道發(fā)育、小腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、盲腸發(fā)酵和盲腸內(nèi)容物微生物區(qū)系的影響，為生姜秸稈作為粗飼料原料在家兔生產(chǎn)上應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用45日齡、體重相近、健康狀況良好的萊蕪黑兔160只，按性別和體重隨機(jī)分為4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只(公母各占1/2)，分為4籠飼養(yǎng)，每籠2只(兔舍結(jié)構(gòu)為半封閉式，自然采光和自然通風(fēng))。4組試驗(yàn)兔分別飼喂以生姜秸稈替代0(A組，對照組)、5%(B組)、10%(C組)和15%(D組)花生秧的全價(jià)配合飼料。試驗(yàn)所用生姜秸稈和花生秧營養(yǎng)組成見表1。飼糧參考NRC(1977)[7]和De Blas等[8]的育肥兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制而成，其組成及營養(yǎng)水平見表2。預(yù)試期7 d，正試期47 d。試驗(yàn)期間，試驗(yàn)兔每天飼喂2次，自由采食和自由飲水。

表1 生姜秸稈和花生秧營養(yǎng)組成(風(fēng)干基礎(chǔ))

表2 飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.2 測定指標(biāo)和方法

1.2.1 胃腸道發(fā)育指標(biāo)的測定

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，每個(gè)重復(fù)選取與該重復(fù)平均體重相近的1只公兔和1只母兔稱重并測量體長(即每組屠宰10只，共屠宰40只)后屠宰，結(jié)扎消化道相應(yīng)部位，剝離腸系膜，用軟尺測定小腸自然長度即為小腸長度。根據(jù)以下公式計(jì)算小腸相對長度：

小腸相對長度=小腸長度(cm)/體長(cm)。

胃、小腸和大腸(含內(nèi)容物)結(jié)扎稱量總重后，用流水將腸道內(nèi)容物沖洗掉，濾紙蘸去水分后即為胃、小腸和大腸重量(凈重)，結(jié)扎后的胃、小腸、大腸的總重量減去其相應(yīng)凈重即為內(nèi)容物的重量。根據(jù)以下公式計(jì)算其相對重量：

某消化道或內(nèi)容物相對重量(g/kg)=某消化道或內(nèi)容物重量(g)/宰前活體重(kg)。

1.2.2 小腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的測定

采集3 cm空腸樣品置于4%多聚甲醛固定液體固定，待測樣本固定狀態(tài)良好后，嚴(yán)格按照病理實(shí)驗(yàn)檢測標(biāo)準(zhǔn)程序(SOP)程序進(jìn)行修剪、脫水、包埋、切片、染色、封片。使用正置白光拍照顯微鏡(Nikon，Eclipse Ci-L)拍照，選取小腸組織的目的區(qū)域進(jìn)行40倍成像，成像時(shí)盡量讓組織充滿整個(gè)視野，保證每張照片的背景光一致。成像完成后使用Image-Pro Plus 6.0分析軟件，統(tǒng)一以μm作為標(biāo)準(zhǔn)單位，分別測量每張切片中5處完整腸絨毛高度、絨毛寬度、隱窩深度、黏膜層厚度和肌層厚度，求取平均值作為最終值，同時(shí)計(jì)算絨毛高度/隱窩深度。

1.2.3 盲腸發(fā)酵指標(biāo)的測定

采用安捷倫公司(Agilent Technologies Inc.美國)的7890-5977氣質(zhì)聯(lián)用儀對盲腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸進(jìn)行靶向代謝物檢測。色譜系統(tǒng)采用的是Agilent氣相色譜系統(tǒng)(Agilent 7890；Agilent Technologies，美國)，根據(jù)化合物的性質(zhì)，采用HP-5(30 m×0.25 mm×0.25 μm)氣相色譜柱，進(jìn)樣量為1 μL，分流比10∶1，載氣為高純氦氣，流速1.0 mL/min；柱溫箱的初始溫度為70 ℃，保持5.0 min，以6 ℃/min程序升溫至100 ℃。質(zhì)譜采用四極桿質(zhì)譜檢測系統(tǒng)(Agilent 5977；Agilent Technologies，美國)，配有電子轟擊離子源和Mass Hunter工作站。采用電子轟擊離子源，分析物在單離子檢測掃描模式下進(jìn)行檢測。優(yōu)化的質(zhì)譜分析條件為進(jìn)樣口溫度260 ℃，四級桿溫度150 ℃。

1.2.4 盲腸微生物多樣性的測定

采集盲腸內(nèi)容物樣品液氮保存，送至北京諾禾致源科技股份有限公司提取DNA，基于Illumina Nova測序平臺測序，構(gòu)建PCR-free文庫，然后進(jìn)行雙末端(paired-end)測序，檢測微生物多樣性。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有檢測指標(biāo)均為每個(gè)重復(fù)的公母試驗(yàn)兔結(jié)果求取平均值作為該重復(fù)的最終值，用SAS 9.1.3統(tǒng)計(jì)軟件中的GLM進(jìn)行數(shù)據(jù)的方差分析，用Duncan氏法進(jìn)行數(shù)據(jù)的多重比較，結(jié)果以平均值(mean)±標(biāo)準(zhǔn)誤(SE)表示，P<0.05為差異顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔胃腸道發(fā)育的影響

由表3可以看出，飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔胃相對重量、胃內(nèi)容物相對重量和大腸內(nèi)容物相對重量有顯著影響(P<0.05)，其中C組和D組胃相對重量顯著高于B組和A組(P<0.05)；D組胃內(nèi)容物相對重量顯著高于其他各組(P<0.05)；B組、C組、D組大腸內(nèi)容物相對重量顯著高于A組(P<0.05)。飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔小腸相對重量、小腸相對長度、小腸內(nèi)容物相對重量和大腸相對重量無顯著影響(P>0.05)。

表3 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔胃腸道發(fā)育的影響

2.2 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔小腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表4可以看出，飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔小腸肌層厚度有顯著影響(P<0.05)，其中D組顯著高于A組、B組、C組(P<0.05)。飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔小腸絨毛高度、絨毛寬度、隱窩深度和黏膜層厚度以及絨毛高度/隱窩深度等均無顯著影響(P>0.05)。

表4 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔小腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

2.3 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔盲腸發(fā)酵的影響

由表5可以看出，飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔盲腸內(nèi)容物中乙酸、丙酸和丁酸含量以及乙酸/(丙酸+丁酸)有顯著影響(P<0.05)，其中D組乙酸含量以及乙酸/(丙酸+丁酸)顯著高于A組、B組、C組(P<0.05)，丙酸和丁酸含量顯著低于A組和B組(P<0.05)。飼糧不同生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔盲腸內(nèi)容物pH、異丁酸、戊酸、異戊酸、己酸和總揮發(fā)性脂肪酸含量無顯著影響(P>0.05)。

表5 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔盲腸發(fā)酵的影響

2.4 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔盲腸微生物多樣性的影響

2.4.1 物種注釋分析

通過對Reads拼接，平均每樣品測得106 055條tags，經(jīng)過質(zhì)控平均得到100 906條有效數(shù)據(jù)，質(zhì)控有效數(shù)據(jù)量達(dá)65 066，質(zhì)控有效率達(dá)61.39%。以97%的一致性將序列聚類成為操作分類單元(OTUs)，共得到1 586個(gè)OTUs，然后對OTUs序列與Silva132數(shù)據(jù)庫進(jìn)行物種注釋，并對不同分類層級統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)能夠注釋到數(shù)據(jù)庫的OTUs數(shù)目為1 578個(gè)(99.50%)，注釋到界水平的比例為99.50%，門水平的比例為96.22%，綱水平的比例為92.31%，目水平的比例為82.53%，科水平的比例為73.08%，屬水平的比例為27.18%，種水平的比例為8.20%。注釋結(jié)果中，共有431個(gè)OTUs注釋到屬水平(27.18%)；各組OTUs數(shù)量見圖1。

A、B、C、D分別代表飼糧生姜秸稈替代花生秧比例為0、5%、10%和15%組。下圖同。

2.4.2 優(yōu)勢菌屬分析

在門水平上，萊蕪黑兔盲腸內(nèi)容物微生物占主導(dǎo)地位的主要包括厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、軟壁菌門(Tenericutes)；在綱水平上，占主導(dǎo)地位的為梭菌綱(Clostridia)、擬桿菌綱(Bacteroidia)、柔膜菌綱(Mollicutes)；在目水平上，優(yōu)勢物種為梭菌目(Clostridiales)、擬桿菌目(Bacteroidales)、芽孢桿菌目(Bacillales)；在科水平上，優(yōu)勢物種為瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)、毛螺旋菌科(Lachnospiraceae)、鼠桿菌科(Muribaculaceae)；在屬水平上，優(yōu)勢物種為未鑒定瘤胃球菌科(unidentified_Ruminococcaceae)、乳頭桿屬(Papillibacter)、別樣桿菌屬(Alistipes)；優(yōu)勢種為梭狀芽孢桿菌([Clostridium]_papyrosolvens)、瘤胃球菌(Ruminococcus_bromii)、瘤胃細(xì)菌_NK4A214(rumen_bacterium_NK4A214)。

2.4.3 α多樣性分析

稀釋曲線是生態(tài)學(xué)領(lǐng)域的一種常用方法，通過從每個(gè)樣本中隨機(jī)抽取一定數(shù)量的序列(即在不超過現(xiàn)有樣本測序量的某個(gè)深度下進(jìn)行重抽樣)，可以預(yù)測樣本在一系列給定的測序深度下，可能包含的物種總數(shù)及其中每個(gè)物種的相對豐度。隨著測試深度不斷增加，OTUs稀釋曲線逐漸上升，最后趨于平緩(圖2-A)，說明本研究測序深度較為合理。等級聚類曲線可直觀地反映樣品中物種的豐富度和均勻度(圖2-B)。以O(shè)TUs排序編號為橫坐標(biāo)，OTUs相對豐度為縱坐標(biāo)的等級聚類曲線，在水平方向上，曲線在橫軸上跨度即曲線寬度可以反映物種豐富度；在垂直方向上，曲線的平滑程度反映了樣本中物種的均勻程度。

圖2 OTUs稀釋曲線(A)和等級聚類曲線(B)

蜜蜂群圖展示所有樣本不同組別間的物種總數(shù)的散點(diǎn)分布，即豐富度。通過Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，測得的物種數(shù)在各組間差異不顯著(P>0.05；圖3-A)。圖3-B為Shannon指數(shù)的比較圖，Shannon指數(shù)在A組和D組間具有顯著差異(P<0.05)，說明A組和D組間物種整體群落結(jié)構(gòu)存在一定差異；Shannon指數(shù)在C組和D組、B組和D組、A組和B組間差異不顯著(P>0.05)，說明C組和D組、B組和D組、A組和B組間物種整體群落結(jié)構(gòu)相似。

*表示組間差異顯著(P<0.05)。

2.4.4 β多樣性分析

基于OTUs水平的主成分分析(PCA)結(jié)果見圖4。應(yīng)用PCA，能夠提取出最大程度反映樣本間差異的2個(gè)坐標(biāo)軸，從而將多維數(shù)據(jù)的差異反映在二維坐標(biāo)圖上，進(jìn)而揭示復(fù)雜數(shù)據(jù)背景下的簡單規(guī)律。本研究結(jié)果表明，不同組間在PCA圖中的距離比較接近，說明各組盲腸內(nèi)容物群落組成相似。

圖4 基于OTUs水平的主成分分析

基于OTUs水平的Weighted Unifrac距離和Unweighted Unifrac距離進(jìn)行主坐標(biāo)分析(PCoA)，結(jié)果見圖5，并選取貢獻(xiàn)率最大的主坐標(biāo)組合進(jìn)行作圖展示，群落結(jié)構(gòu)相似度高的樣本傾向于聚集在一起，群落差異很大的樣本則會遠(yuǎn)遠(yuǎn)分開。圖中各組間樣本距離接近，也表明各組盲腸內(nèi)容物群落組成相似。

圖5 基于Weighted Unifrac距離PCoA分析(A)和基于Unweighted Unifrac距離PCoA分析(B)

2.4.5 組間群落組成差異分析

利用Meta Stat方法對組間的物種豐度數(shù)據(jù)進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)，篩選具有顯著性差異的物種，并繪制差異物種在組間的豐度分布箱圖，各組間在門水平和屬水平上豐度分布箱圖分別見圖6-A和圖6-B。

Firmicutes: 厚壁菌門；Tenericutes: 軟壁菌門；Synergistetes: 互養(yǎng)菌門；Euryarchaeota: 廣古菌門；Bacteroidetes: 擬桿菌門；Chloroflexi: 綠彎菌門； Protecbacteria: 變形菌門；unidentified_Bacteria: 未經(jīng)鑒定的細(xì)菌門； Verrucomicrobia: 疣微菌門；Melainabacteria: 黑水仙菌門;Oxalobacter: 草酸桿菌屬；unidentified_Christensenellaceae: 未經(jīng)鑒定的克里斯滕森菌屬；Rikenella: 理研菌屬；Tyzzerella: 毛螺菌屬；Oscillibacter: 口腔桿菌屬；Mailhella: 梅伊拉菌屬；Rurniricicoccus:乳虹膜球菌瘤胃菌屬； Butyricicoccus: 丁酸球菌屬；Intestinimonas: 腸桿菌屬；Methanobrevibacter:甲烷桿菌屬；unidentified_Enterobacteriaceae:未經(jīng)鑒定的腸桿菌科；Bacillus芽孢桿菌屬；Roseburia: 羅氏菌屬；Soehngenia: 毛螺菌屬；Exiguobacterium: 微小桿菌屬；Phascolarctobacterium: 考拉桿菌屬；Candidatus_Saccharimonas: 酵母梭菌屬；Alistipes: 另枝菌屬；Marvinbryantia: 馬文布氏菌屬；Aminivibrio: 氨基酸降解菌屬；unidentified_Ruminococcaceae:未經(jīng)鑒定的瘤胃球菌科；Anaeroplasma: 厭氧原體屬；Subdoligranulum: 罕見小球菌屬；Papillibacter:乳頭桿菌屬；Bacteroides: 擬桿菌屬；Thauera: 索氏菌屬；Syntrophobacter: 互營桿菌屬；unidentified_Clostridiales: 未經(jīng)鑒定的梭菌目；Butyricimonas: 丁酸弧菌屬；unidentified_Lachnospiraceae: 未經(jīng)鑒定的毛螺菌科；Desulfovibrio: 脫硫弧菌屬；Campylobacter: 彎曲菌屬；Odoribacter: 臭桿菌屬；Akkermarisia: 嗜黏蛋白菌屬；Parabacteroides: 副擬桿菌屬。

2.4.6 組間物種功能性預(yù)測分析

利用Tax4 Fun軟件，基于16S Silva數(shù)據(jù)庫對萊蕪黑兔盲腸內(nèi)容物微生物等進(jìn)行功能預(yù)測，注釋結(jié)果表明排名靠前的功能信息有新陳代謝、遺傳信息處理和環(huán)境信息處理等(圖7)。

Metabolism:新陳代謝；Genetic_Information_Processing: 遺傳信息處理；Enviromental_Information_Processing: 環(huán)境信息處理；Cellular_ Processing: 細(xì)胞處理；Unclassified: 未經(jīng)鑒定分類；Human_Diseases:人類疾病；Organismal_Systems:生物系統(tǒng)；Others:其他。

3 討 論

3.1 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔胃腸道發(fā)育的影響

家兔是一種小型草食性動(dòng)物，作為非反芻單胃草食動(dòng)物，盲腸和結(jié)腸在消化系統(tǒng)中占有重要地位，具有消化多種粗飼料的能力。粗飼料是家兔飼糧的主要成分，粗飼料類型及粗纖維水平不僅對家兔具有營養(yǎng)價(jià)值，而且對消化道的形態(tài)和功能的發(fā)育成熟，調(diào)控其腸道健康具有重要作用[9-10]。Tao等[11]研究發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧中中性洗滌纖維水平升高，家兔的胃、盲腸和結(jié)腸凈重以及結(jié)腸的長度都相應(yīng)增加。胃和盲腸內(nèi)容物重量反映了采食和軟糞產(chǎn)生的晝夜節(jié)律。Chao等[12]研究報(bào)道，家兔的盲腸內(nèi)容物的相對重量都隨著飼糧酸性洗滌纖維水平升高而增加。García等[13]的研究發(fā)現(xiàn)，不同粗飼料類型能夠影響家兔采食量和食糜在盲腸的停留時(shí)間，且隨著飼糧中性洗滌纖維水平的增加提高了盲腸內(nèi)容物與體重的比值。本研究發(fā)現(xiàn)，胃、胃內(nèi)容物相對重量和大腸內(nèi)容物相對重量均隨著飼糧生姜秸稈替代花生秧比例的提高而增大，這可能與生姜秸稈中中性洗滌纖維及酸性洗滌纖維水平高于花生秧密切相關(guān)，飼糧纖維水平升高導(dǎo)致家兔采食量增加[6]。

3.2 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔小腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

小腸是家兔消化道營養(yǎng)吸收的主要部位，飼糧纖維水平及類型能夠影響小腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。Yu等[14]報(bào)道，喂飼55～145 g/kg粗纖維的生長兔中，空腸絨毛高度發(fā)生輕微變化。Chiou等[15]研究表明，不同纖維類型能夠影響家兔空腸和結(jié)腸絨毛高度和肌層厚度，并影響十二指腸和回腸的隱窩深度。然而，Xiccato等[16]并沒有檢測到飼糧纖維/淀粉比率對家兔小腸絨毛高度和隱窩深度產(chǎn)生顯著影響。本研究表明，飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔小腸絨毛高度、絨毛寬度和黏膜層厚度等影響均無顯著差異，但15%替代組的小腸肌層厚度明顯提高，這可能是由該組飼糧中纖維水平高于其他各組所致。

3.3 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔盲腸發(fā)酵的影響

家兔盲腸內(nèi)存在有大量的微生物，盲腸微生物能夠發(fā)酵纖維素產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸為家兔提供能量。盲腸揮發(fā)性脂肪酸含量隨著飼糧中糖醛酸和中性洗滌纖維含量的增加而升高，隨著木質(zhì)素含量的增加而下降[12]。Chiou等[15]利用分離出的飼糧纖維組分(纖維素、果膠和木質(zhì)素)和苜蓿干草飼喂家兔，試驗(yàn)結(jié)果也表明，木質(zhì)素會抑制盲腸揮發(fā)性脂肪酸的產(chǎn)生。乙酸是家兔盲腸揮發(fā)性脂肪酸的重要組成部分，其次是丁酸，最少的是丙酸，其組成與飼糧纖維含量和類型密切相關(guān)[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧不同生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔盲腸內(nèi)容物pH及總揮發(fā)性脂肪酸含量無顯著影響，但揮發(fā)性脂肪酸組成(乙酸、丙酸和丁酸含量)發(fā)生變化，這是由生姜秸稈和花生秧2種不同粗飼料原料的纖維組分不同所致。

3.4 飼糧不同比例生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔盲腸內(nèi)容物微生物區(qū)系的影響

盲腸微生物群落是在長期進(jìn)化過程中形成的，與宿主保持相對平衡的穩(wěn)定狀態(tài)，在營養(yǎng)物質(zhì)新陳代謝和腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要作用，是一個(gè)復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)[17]。腸道微生物菌群和宿主的生態(tài)平衡可維持動(dòng)物機(jī)體腸道健康和生產(chǎn)性能提高。高通量測序技術(shù)是研究動(dòng)物腸道微生物多樣性的主要手段。本試驗(yàn)通過稀釋曲線、豐度等級曲線分析，得到測序深度充分、測序量合理、足以覆蓋群落物種組成，能夠真實(shí)反映群落各物種間的相對比例關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)，家兔盲腸內(nèi)容物在門水平上相對豐度最大是厚壁菌門，其次是擬桿菌門，厚壁菌門與碳水化合物和蛋白質(zhì)的吸收有關(guān)，擬桿菌門主要是促進(jìn)碳水化合物發(fā)酵、吸收和降解多糖，這兩大菌門的穩(wěn)定對促進(jìn)肉兔腸道健康十分重要，這與許多研究所得家兔盲腸微生物的結(jié)果[18-21]相一致。Abecia等[22]報(bào)道，飼糧是影響籠養(yǎng)家兔盲腸微生物組成比例的主要因素，本研究也發(fā)現(xiàn)飼糧適宜比例生姜秸稈替代花生秧后萊蕪黑兔盲腸內(nèi)容物微生物區(qū)系無明顯變化，過量替代后微生物區(qū)系會發(fā)生變化。

4 結(jié) 論

飼糧適宜比例(5%～10%)的生姜秸稈替代花生秧對萊蕪黑兔的胃腸道發(fā)育、小腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、盲腸發(fā)酵和盲腸內(nèi)容物微生物區(qū)系無明顯不良影響，生姜秸稈可用作家兔粗飼料原料在生產(chǎn)上使用。