武笑天 溫 曌 李銳瑞 白 彥 王 瑞 楊 玉

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，太谷 030801)

葉酸又名蝶酰谷氨酸，是畜禽生長發(fā)育過程中一種重要的水溶性B族維生素。作為一碳單位的受體和供體，葉酸參與動物機(jī)體DNA、RNA及各種蛋白質(zhì)的合成[1]，能夠影響細(xì)胞因子的形成，進(jìn)而提高動物機(jī)體的免疫力。維生素B12可以以輔酶的形式提高葉酸的利用率，促進(jìn)碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝[2]。腸道作為營養(yǎng)物質(zhì)吸收的主要場所，其健康發(fā)育對家禽生長至關(guān)重要。而家禽腸道健康與腸道黏膜屏障功能密切相關(guān)。尹秀玲等[3]研究表明，飼糧添加0.4、0.5、0.6和1.0 mg/kg葉酸時，雛雞的體重隨之增加，而葉酸缺乏可引起雛雞免疫力下降，死亡率提高。丑武江等[4]研究表明，飼糧添加3 mg/kg葉酸可顯著提高肉仔雞的平均日增重和平均日采食量，提高血清中蛋白質(zhì)的含量，降低料重比。飼糧添加10 mg/kg維生素B12顯著提高了5～15周齡五龍鵝空腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度(V/C)值，顯著降低了空腸隱窩深度[5]。3周齡肉仔雞飼糧中分別添加0.75 mg/kg葉酸和300 mg/kg甜菜堿以及2.25 mg/kg葉酸和300 mg/kg甜菜堿，肉仔雞飼料轉(zhuǎn)化率和平均日增重均隨著葉酸添加水平的提高而提高[6]。京紅蛋雞營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)中葉酸和維生素B12的推薦量分別為1.5 mg/kg和25～30 μg/kg。有關(guān)葉酸和維生素B12缺乏的研究較多，而補充多少葉酸和維生素B12可獲得較好的腸道免疫性能，仍處于空白。因此，本試驗在飼糧中添加不同水平的葉酸和維生素B12，研究其對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、小腸屏障功能及相關(guān)基因表達(dá)的影響，為調(diào)控產(chǎn)蛋雞免疫性能提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計和飼糧

試驗選擇972只28周齡健康狀況良好、處于產(chǎn)蛋高峰期的京紅蛋雞，隨機(jī)分成9組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)18只雞。采用2因素3水平試驗設(shè)計，在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0、2和5 mg/kg葉酸和0、25和75 μg/kg維生素B12，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1，試驗設(shè)計見表2。維生素B12由河北某生物工程股份有限公司提供，其有效成分含量≥1%；葉酸由河北某生物科技有限公司提供，其有效成分為95.5%～102.0%。試驗預(yù)試期2周，飼喂基礎(chǔ)飼糧，期間各組蛋雞產(chǎn)蛋率無顯著差異(P>0.05)后開始試驗，正試期8周。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

表2 試驗設(shè)計

1.2 飼養(yǎng)管理

采用3層階梯式籠養(yǎng)，每籠3只雞，連續(xù)的6籠為1個重復(fù)，各重復(fù)均勻分布于雞舍同行中間2層。全程粉料飼養(yǎng)，每天光照時間為16 h，雞舍溫度控制在25 ℃左右，自由飲水，每天喂食2次(09:00和15:00)，自然通風(fēng)和縱向負(fù)壓通風(fēng)相結(jié)合，每天16:30揀蛋并記錄稱重。其他均按養(yǎng)殖場常規(guī)方法進(jìn)行。

1.3 樣品采集處理和指標(biāo)測定

1.3.1 生產(chǎn)性能

試驗期間以各重復(fù)為單位記錄每日采食量、產(chǎn)蛋總數(shù)、總蛋重、軟破蛋數(shù)和死淘數(shù)，每周計算各組的料蛋比和產(chǎn)蛋率。

1.3.2 蛋品質(zhì)

試驗期間，每周每個重復(fù)選取3枚接近平均蛋重的雞蛋(n=18)，測定蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋黃顏色、哈氏單位、蛋白高度、平均蛋重、蛋黃重及蛋殼重。所用儀器為全自動蛋品分析儀(EA-01,以色列)、ORKA蛋殼強(qiáng)度儀(EFO-501,以色列)、蛋殼厚度儀(MODEL-1061,日本)和數(shù)顯千分尺(MODEL-P-1)。

1.3.3 小腸組織形態(tài)

試驗結(jié)束時，每重復(fù)選取1只雞，每組6只雞，禁食12 h，采用無菌操作分別取十二指腸、空腸和回腸的同一部位放于75%的中性甲醛中，在4 ℃環(huán)境中保存。按照常規(guī)方法制作石蠟切片，利用Image-Pro Plus軟件測量小腸各部位絨毛高度和隱窩深度，并計算V/C值。每個樣本觀察2個非連續(xù)切片，每張切片選取3個視野，每個視野分別測定10組數(shù)據(jù)，其平均值作為1個測定數(shù)據(jù)。

1.3.4 小腸總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄

雞頸靜脈放血致死，采用無菌操作迅速取出十二指腸、空腸和回腸同一部位放入液氮中，置于-80 ℃待測。采用Trizol法分別提取十二指腸、空腸和回腸組織總RNA。用核酸蛋白儀測定RNA完整性、濃度和純度。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明合成cDNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.5 引物設(shè)計

根據(jù)NCBI測序數(shù)據(jù)庫中閉鎖蛋白(occludin)、閉合蛋白-1(claudin-1)、閉合小環(huán)蛋白-1(ZO-1)、黏蛋白2(MUC2)、Toll樣受體4(TLR4)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)和白細(xì)胞介素-13(IL-13)基因的mRNA序列，以β-肌動蛋白(β-actin)基因作為內(nèi)參基因，用Primer-BLAST設(shè)計上述引物(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，引物序列見表3。

表3 引物序列

1.3.6 實時熒光定量PCR

以合成的cDNA為模板，按照SYBR Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒說明，在實時熒光定量PCR儀上進(jìn)行，反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃變性5 s，60 ℃退火30 s，共40個循環(huán)。采用相對定量分析法，以β-actin作為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法計算目的基因mRNA相對表達(dá)量。

1.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010初步整理后，應(yīng)用SAS 9.2軟件中的一般線性模型(GLM)程序按試驗設(shè)計對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，以重復(fù)為試驗單元，模型的主要效應(yīng)包括葉酸、維生素B12處理以及二者之間的互作效應(yīng)。F檢驗顯著差異者，以最小顯著差異(LSD)法比較平均值間的差異顯著性。結(jié)果以平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表4可知，飼糧添加不同水平的葉酸和維生素B12及其互作效應(yīng)對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞的平均日采食量、平均蛋重、料蛋比和產(chǎn)蛋率均無顯著影響(P>0.05)。

表4 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表5可知，飼糧添加葉酸對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、哈氏單位和蛋殼比率有顯著影響(P<0.05)，飼糧添加維生素B12對蛋殼厚度和哈氏單位有顯著影響(P<0.05)。葉酸和維生素B12的互作效應(yīng)除對哈氏單位有顯著影響(P<0.05)外，對其余指標(biāo)均無顯著影響(P>0.05)。各葉酸或維生素B12添加組(Ⅱ～Ⅸ組)哈氏單位均顯著高于未添加組(Ⅰ組)(P<0.05)，且以Ⅴ組(添加2 mg/kg葉酸+25 μg/kg維生素B12)最高。

表5 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞蛋品質(zhì)的影響

2.3 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞小腸組織形態(tài)的影響

由表6可知，飼糧添加葉酸對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞空腸和回腸絨毛高度和V/C值均有顯著影響(P<0.05)，飼糧添加維生素B12對十二指腸和回腸絨毛高度和V/C值有顯著影響(P<0.05)，葉酸和維生素B12的互作效應(yīng)對十二指腸和空腸絨毛高度和V/C值有顯著影響(P<0.05)。Ⅱ組、Ⅳ組、Ⅴ組和Ⅷ組十二指腸絨毛高度顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅴ組十二指腸V/C值顯著高于Ⅰ組和Ⅶ組(P<0.05)；Ⅴ組空腸絨毛高度和V/C值顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05)。結(jié)果表明，Ⅴ組蛋雞小腸組織形態(tài)得到改善，小腸吸收能力得以增強(qiáng)。

表6 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞小腸組織形態(tài)的影響

2.4 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞小腸屏障功能相關(guān)基因表達(dá)的影響

由表7可知，飼糧添加葉酸、維生素B12及其互作效應(yīng)能顯著提高產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞十二指腸occludin、claudin-1、ZO-1和MUC2 mRNA相對表達(dá)量(P<0.05)。Ⅴ組十二指腸occludin、ZO-1 mRNA相對表達(dá)量均顯著高于Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅶ組和Ⅸ組(P<0.05)，Ⅵ組十二指腸claudin-1 mRNA相對表達(dá)量顯著高于除Ⅴ組外的其他組(P<0.05)，Ⅴ組十二指腸MUC2 mRNA相對表達(dá)量顯著高于除Ⅵ組外的其他組(P<0.05)，Ⅷ組十二指腸MUC2 mRNA相對表達(dá)量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。

表7 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞小腸屏障功能相關(guān)基因表達(dá)的影響

飼糧添加葉酸對空腸occludin、claudin-1和MUC2 mRNA相對表達(dá)量有顯著影響(P<0.05)，對ZO-1 mRNA相對表達(dá)量無顯著影響(P>0.05)；飼糧添加維生素B12僅對空腸MUC2 mRNA相對表達(dá)量有顯著影響(P<0.05)；葉酸和維生素B12的互作效應(yīng)對空腸occludin、ZO-1和MUC2 mRNA相對表達(dá)量有顯著影響(P<0.05)。Ⅴ組空腸occludin mRNA相對表達(dá)量顯著高于Ⅰ組和Ⅸ組(P<0.05)，Ⅲ組空腸ZO-1 mRNA相對表達(dá)量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅴ組空腸MUC2 mRNA相對表達(dá)量顯著高于其他組(P<0.05)。

飼糧添加葉酸僅對回腸occludin mRNA相對表達(dá)量有顯著影響(P<0.05)；飼糧添加維生素B12對回腸occludin和MUC2 mRNA相對表達(dá)量有顯著影響(P<0.05)；葉酸和維生素B12的互作效應(yīng)對回腸occludin和MUC2 mRNA相對表達(dá)量有顯著影響(P<0.05)。Ⅴ組和Ⅵ組回腸occludin mRNA相對表達(dá)量顯著高于其他各組(P<0.05)，Ⅵ組回腸MUC2 mRNA相對表達(dá)量顯著高于Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅳ組和Ⅸ組(P<0.05)。

2.5 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞小腸炎癥相關(guān)基因表達(dá)的影響

由表8可知，除飼糧添加維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞十二指腸IL-13 mRNA相對表達(dá)量無顯著影響(P>0.05)外，飼糧添加葉酸和維生素B12對十二指腸炎癥相關(guān)基因表達(dá)均有顯著影響(P<0.05)；葉酸和維生素B12的互作效應(yīng)對十二指腸TLR4、NF-κB、IL-1β和IL-10 mRNA相對表達(dá)量有顯著影響(P<0.05)。除Ⅱ組十二指腸NF-κBmRNA相對表達(dá)量與Ⅰ組無顯著差異(P>0.05)外，Ⅱ～Ⅸ組十二指腸TLR4、NF-κB、TNF-α和IL-1βmRNA相對表達(dá)量均顯著低于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅱ組、Ⅴ組和Ⅵ組十二指腸IL-10 mRNA相對表達(dá)量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。

表8 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞小腸炎癥相關(guān)基因表達(dá)的影響

除飼糧添加維生素B12對空腸IL-1βmRNA相對表達(dá)量無顯著影響(P>0.05)外，飼糧添加葉酸和維生素B12對空腸炎癥相關(guān)基因表達(dá)均有顯著影響(P<0.05)；葉酸和維生素B12的互作效應(yīng)對空腸TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β和IL-10 mRNA相對表達(dá)量均有顯著影響(P<0.05)。Ⅴ組空腸TLR4 mRNA相對表達(dá)量顯著低于Ⅸ組(P<0.05)，Ⅱ～Ⅸ組空腸NF-κBmRNA相對表達(dá)量顯著低于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅰ組和Ⅲ組空腸TNF-αmRNA相對表達(dá)量顯著高于Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組和Ⅶ組(P<0.05)，除Ⅲ組外，其他各添加組空腸IL-1βmRNA相對表達(dá)量均顯著低于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅴ組空腸IL-10 mRNA相對表達(dá)量顯著高于其他各組(P<0.05)。

飼糧添加葉酸除對回腸IL-1β和IL-10 mRNA相對表達(dá)量無顯著影響(P>0.05)外，對其他指標(biāo)均有顯著影響(P<0.05)；飼糧添加維生素B12對回腸TLR4、TNF-α、IL-10和IL-13 mRNA相對表達(dá)量均有顯著影響(P<0.05)；葉酸和維生素B12的互作效應(yīng)對回腸TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-13 mRNA相對表達(dá)量均無顯著影響(P<0.05)。

3 討 論

3.1 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞生產(chǎn)性能的影響

葉酸是水溶性B族維生素，維生素B12作為一碳代謝的輔酶，兩者都可以做為氨基酸互變中一碳集團(tuán)的載體參與蛋白質(zhì)的生物合成，對生命早期的生長發(fā)育非常重要[7]。雛雞缺乏葉酸會出現(xiàn)生長不良，羽毛生長凌亂、色澤不佳，貧血及骨粗短癥以及免疫功能低下等癥狀；缺乏維生素B12則可能表現(xiàn)為厭食、生長不良和貧血等。李軼偉等[8]研究表明，肉雞基礎(chǔ)飼糧中添加葉酸可顯著提高其平均日增重，且以3 mg/kg葉酸添加組效果最好。薛安永等[9]研究表明，飼糧添加1.64 mg/kg葉酸能顯著提高8周齡肉雞平均日采食量和平均日增重。Jing等[10]研究表明，在小麥-豆粕型飼糧中添加4 mg/kg葉酸飼喂24周齡蛋雞8周顯著提高了其蛋重和日產(chǎn)蛋重。Bagheri等[11]研究表明，飼糧添加葉酸能夠顯著提高52～58周齡蛋雞的產(chǎn)蛋率和平均蛋重。但也有研究表明，飼糧添加葉酸對蛋雞的生產(chǎn)性能無顯著影響[12-17]，這與本試驗研究結(jié)果一致。

3.2 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞蛋品質(zhì)的影響

評價蛋品質(zhì)的常規(guī)指標(biāo)包括蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋黃顏色、哈氏單位和蛋白高度等。葉酸以四氫葉酸形式參與蛋氨酸、組氨酸及絲氨酸等氨基酸代謝，維生素B12可使葉酸轉(zhuǎn)變?yōu)樗臍淙~酸，從而提高葉酸的利用率[18]。而蛋氨酸又是家禽玉米-豆粕型飼糧中的第一限制性氨基酸，其代謝直接影響蛋雞的生產(chǎn)性能及蛋殼質(zhì)量。El-Husseiny等[19]研究表明，葉酸、維生素B12和蛋氨酸的互作效應(yīng)可顯著增加28～43周齡白羽蛋雞蛋殼比重，但對蛋殼厚度無顯著影響。葉酸和維生素B12的添加可改善33周齡蛋雞的蛋殼強(qiáng)度，其中0.5 mg/kg葉酸+0.01 mg/kg維生素B12組蛋殼強(qiáng)度最大為4.2 kg/cm2，比對照組提高了17.32%[20]。本試驗中，飼糧添加葉酸顯著提高了蛋雞的蛋形指數(shù)和蛋殼厚度；葉酸和維生素B12互作效應(yīng)顯著提高了雞蛋哈氏單位，且當(dāng)添加2 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12時，哈氏單位最高。而哈氏單位越高，表明雞蛋蛋白品質(zhì)越好，這也說明飼糧添加葉酸和維生素B12后，雞蛋哈氏單位得到了改善。

3.3 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞小腸組織形態(tài)的影響

家禽葉酸的主要吸收位點是十二指腸和空腸。腸道作為營養(yǎng)物質(zhì)吸收的主要場所，其健康發(fā)育對家禽生長至關(guān)重要。腸道絨毛高度、隱窩深度及V/C值能反映腸道健康情況。腸黏膜組織結(jié)構(gòu)的完整性是衡量腸免疫功能的重要指標(biāo)[21]。絨毛的發(fā)育程度不僅反映腸黏膜結(jié)構(gòu)的完整性，而且決定了機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力。絨毛越長，腸道與營養(yǎng)物質(zhì)的接觸面積越大，營養(yǎng)物質(zhì)的吸收就越好[22]；隱窩深度異常加深與增生，可能意味著腸黏膜發(fā)生病變[23]，因此V/C值能夠反映腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能的整體狀況[24]。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼糧添加2 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12時，產(chǎn)蛋雞十二指腸和空腸絨毛高度和V/C值均顯著高于未添加組，且料蛋比降低、產(chǎn)蛋率提高，說明添加適量的葉酸和維生素B12可改善腸道黏膜組織形態(tài)，促進(jìn)腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

3.4 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞小腸屏障功能相關(guān)基因表達(dá)的影響

腸道黏膜屏障功能和結(jié)構(gòu)的完整性對維持家禽腸道健康和生產(chǎn)具有重要的意義。完整的腸道黏膜屏障包括機(jī)械屏障、化學(xué)屏障、免疫屏障和微生物屏障[25]。機(jī)械屏障是由腸黏膜上皮細(xì)胞、細(xì)胞間緊密連接等結(jié)構(gòu)組成，是腸道屏障中尤為重要的一部分。緊密連接是由若干種特定功能蛋白所組成，其中occludin、claudin-1和ZO-1是3種關(guān)鍵的蛋白組分[26]。研究發(fā)現(xiàn)，occludin、claudin-1和ZO-1減少會增加腸道通透性，因此在腸道緊密連接屏障中發(fā)揮著重要作用[27]。化學(xué)屏障主要是指覆蓋在腸上皮細(xì)胞的黏液層。黏液層是機(jī)體抵御腸道病原微生物入侵的第1道防線，MUC2是由杯狀細(xì)胞分泌，是形成小腸黏液層的主要黏蛋白，因此MUC2表達(dá)量是作為評價腸道健康狀態(tài)的重要指標(biāo)之一[28]。MUC2構(gòu)成的凝膠黏液層結(jié)構(gòu)牢固并保持高度穩(wěn)定性，能夠有效地保護(hù)腸上皮細(xì)胞和發(fā)揮屏障保護(hù)作用[29]。葉酸與維生素B12聯(lián)合應(yīng)用的研究常見于醫(yī)學(xué)報道，而在家禽營養(yǎng)學(xué)上的研究基本處于空白。本試驗結(jié)果表明，飼糧添加2 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12使得產(chǎn)蛋雞十二指腸和空腸occludin和MUC2 mRNA相對表達(dá)量顯著提高，這說明飼糧添加2 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12可降低家禽腸道通透性，抵制病原微生物入侵，阻止細(xì)菌在腸黏膜表面黏附，進(jìn)而提高十二指腸和空腸對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收率，這與本試驗發(fā)現(xiàn)飼糧添加2 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12顯著提高十二指腸和空腸絨毛高度和V/C值的結(jié)果相一致。因此我們推測葉酸和維生素B12可能通過影響V/C值、腸道緊密連接蛋白以及MUC2表達(dá)的方式來維持和改善腸道物理和化學(xué)屏障功能，促進(jìn)腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

3.5 葉酸和維生素B12對產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞小腸炎癥相關(guān)基因表達(dá)的影響

腸道免疫屏障主要由腸道淋巴組織及免疫細(xì)胞構(gòu)成，通過分泌免疫球蛋白、細(xì)胞因子和干擾素等維持腸道穩(wěn)態(tài)。硏究發(fā)現(xiàn)，TLR4與腸上皮細(xì)胞屏障完整性相關(guān)。TLR4在腸黏膜炎性疾病中調(diào)控炎性發(fā)展，并且TLR4的表達(dá)水平會上升[30]。TLR4基因表達(dá)可影響下游信號通路促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的產(chǎn)生。腸道TNF-α、IL-1β能夠引起炎性介質(zhì)釋放，參與腸道炎性疾病的發(fā)展過程?？寡仔约?xì)胞因子IL-10和IL-13能夠在體內(nèi)抑制活化的T細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子，抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生。葉酸和維生素B12缺乏將導(dǎo)致白細(xì)胞數(shù)量減少，淋巴細(xì)胞功能損害，進(jìn)而影響體液免疫，造成中性粒細(xì)胞殺菌能力下降[31]。高慶[32]研究表明，飼糧添加適宜劑量的葉酸可明顯改善機(jī)體免疫機(jī)能，提高仔豬抗病毒的能力。Abd Allah等[33]研究表明，飼糧添加葉酸可以降低小鼠肝臟炎癥因子NF-κB和IL-1β的表達(dá)。本試驗結(jié)果表明，飼糧添加2 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12顯著降低十二指腸和空腸TLR4、TNF-α和IL-1βmRNA相對表達(dá)量，顯著降低下游轉(zhuǎn)錄因子NF-κBmRNA相對表達(dá)量，從而減少了腸道炎性疾病的發(fā)生，說明飼糧添加2 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12對該段腸道健康有正向調(diào)節(jié)作用。但在回腸中，葉酸和維生素B12互作效應(yīng)對TNF-α和IL-1βmRNA相對表達(dá)量未產(chǎn)生顯著影響，說明葉酸和維生素B12互作效應(yīng)在不同腸道間存在一定的差異性。這可能與葉酸在十二指腸和空腸中吸收有關(guān)。本試驗同時發(fā)現(xiàn)，飼糧添加2 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12能夠提高十二指腸和空腸IL-10 mRNA相對表達(dá)量，說明葉酸和維生素B12互作可以通過增強(qiáng)體液免疫，維護(hù)腸道健康。

4 結(jié) 論

飼糧添加適宜水平的葉酸和維生素B12可提高產(chǎn)蛋高峰期京紅蛋雞雞蛋的哈氏單位，改善十二指腸和空腸的組織形態(tài)，上調(diào)十二指腸和空腸occludin、ZO-1、MUC2和IL-10 mRNA的表達(dá)，下調(diào)十二指腸和空腸NF-κB、TLR4及其下游信號通路TNF-α和IL-1βmRNA的表達(dá)，進(jìn)而增強(qiáng)腸道免疫功能。本試驗中，以飼糧(含1.35 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12)添加2 mg/kg葉酸和25 μg/kg維生素B12效果較好。