劉小斌，彭阿柳，何念軍，趙凱輝，劉 蕾，文一帆，金藝鵬*

(1.陜西佛坪國家級自然保護(hù)區(qū)管理局，陜西 漢中 723400；2.洋縣林業(yè)工作站，陜西 洋縣 723300；3.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀 100193)

犬瘟熱是由犬瘟熱病毒(Canine Distemper Virus,CDV)感染引起的一種急性高度接觸性傳染病，目前尚無治療特效藥物，犬感染后死亡率高達(dá)50%～80%[1]。我國已報道有大熊貓感染CDV并發(fā)病甚至死亡[2-5]。犬接種疫苗可以有效預(yù)防犬瘟熱，目前市場上成熟的犬用疫苗產(chǎn)品很多，但尚無大熊貓用疫苗產(chǎn)品。我國大熊貓保護(hù)區(qū)多地處中西部山區(qū)，由于歷史、地理因素的限制，保護(hù)區(qū)內(nèi)仍有村民居住，村民散養(yǎng)家犬較多，且?guī)缀醪贿M(jìn)行防疫。家犬食物匱乏、自由覓食，活動地區(qū)常與野生大熊貓活動地區(qū)重疊。2015年，金藝鵬等首次從患犬瘟熱的大熊貓體內(nèi)分離到CDV毒株并完成全基因組測序，與從犬及貉體上分離的毒株對比，已經(jīng)證明三者毒株具有同源性，表明犬瘟熱是犬科動物和大熊貓的共患疾病，存在由大熊貓棲息地附近犬科動物傳染給野生大熊貓的風(fēng)險，若犬瘟熱呈大流行趨勢，會對野生大熊貓種群構(gòu)成巨大威脅。目前，對于大熊貓棲息地周圍犬科動物CDV攜帶情況仍不了解，且理想情況下，如果對大熊貓保護(hù)區(qū)周圍一定范圍的犬類進(jìn)行疫苗免疫，將在相當(dāng)程度上減少大熊貓感染該病的風(fēng)險。為此通過調(diào)查佛坪大熊貓保護(hù)區(qū)轄區(qū)范圍內(nèi)家養(yǎng)犬的分布情況及兩次免疫前后犬瘟熱病毒抗體水平，以評估保護(hù)區(qū)野生大熊貓受犬瘟熱病毒感染的風(fēng)險。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

犬三聯(lián)抗體試劑盒及“衛(wèi)佳伍”犬四聯(lián)活疫苗從市場有資質(zhì)的企業(yè)采購。

1.2 主要儀器

F82手持GPS測量儀(北京某信息技術(shù)公司生產(chǎn))。

1.3 研究對象

三官廟及大古坪轄區(qū)范圍內(nèi)的家養(yǎng)犬。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 Dot-ELISA檢測CDV抗體水平 用“衛(wèi)佳伍”對秦嶺三官廟及大古坪地區(qū)的家養(yǎng)犬進(jìn)行2次免疫。第一次免疫前和第二次免疫后，從每只犬前肢頭靜脈或后肢隱靜脈采集血液樣本約6 mL，就地使用犬三聯(lián)抗體試劑盒，按照說明書操作檢測CDV抗體水平。

1.4.2 繪制犬只地理信息分布圖 記錄第二次調(diào)查涉及的所有家犬的地理信息位置，初步選取哨兵犬并標(biāo)出其活動范圍，繪制地理信息分布圖。

2 結(jié)果

2.1 Dot-ELISA檢測CDV抗體水平

2.1.1 第一次免疫接種前犬只CDV抗體水平 第一次免疫接種前，采集并檢測43只犬的43份血液樣本，從檢測結(jié)果和統(tǒng)計(jì)情況(表1)來看，第一次免疫接種前，未檢測到抗體陰性的樣本。如果認(rèn)為抗體滴度≤3為抗體水平較低，則抗體水平較低的樣本數(shù)占總數(shù)的46.5%，抗體滴度≥4的占53.5%。

表1 第一次免疫接種前43只犬的CDV抗體水平

2.1.2 第二次免疫接種后犬只CDV抗體水平 第二次免疫接種后，采集并檢測61只犬的61份血液樣本，檢測結(jié)果和統(tǒng)計(jì)結(jié)果(表2、表3)顯示，第二次免疫后，僅 6只犬的CDV抗體檢測呈陰性，占總數(shù)的9.8%。若認(rèn)為抗體滴度≥4為獲得了良好的抗體水平，可見經(jīng)過系統(tǒng)的疫苗接種程序之后，有77.0%犬已經(jīng)達(dá)到了良好的抗體滴度水平。

表3 第二次免疫接種后61只犬的CDV抗體水平

表2 第二次免疫接種后犬只的CDV抗體水平

續(xù)表2

編號特征抗體水平(滴度)編號特征抗體水平(滴度)7麻色538黑麻色48黑色539黃白49白640麻色510麻色441哨兵511麻色442白色512麻色543白色513黑麻色544白色514黑麻色545黑麻色515黃白646黃白616麻色547麻色317哨兵548哨兵418白色449白色519白色450白色520白色451哨兵犬121白色552哨兵犬022白色553哨兵犬023黑色554黃524黑655白626白色556白027灰麻色557白228灰色658白色229黑色459白色130黃460黑麻色031麻色561黃白0

2.2 犬只地理分布

從佛坪保護(hù)區(qū)區(qū)內(nèi)及周邊社區(qū)犬只分布圖(圖1)可以看出，對佛坪保護(hù)區(qū)大熊貓構(gòu)成犬瘟熱病毒傳播潛在風(fēng)險的犬只主要集中在4個區(qū)域，即這4個區(qū)域是監(jiān)控和防疫的重點(diǎn)。

圖1 61只家犬地理信息分布圖及哨兵犬活動范圍

3 結(jié)論與討論

3.1 風(fēng)險分析

第一次調(diào)查采集到的43份樣本均沒有檢測到抗體陰性的樣本，可能是該地一直以來都存在自然感染CDV后未表現(xiàn)明顯癥狀或是感染后癥狀輕微未被犬主注意到的患犬，CDV的長期存在是大熊貓感染該病的風(fēng)險之一。統(tǒng)計(jì)結(jié)果中46.5%的家養(yǎng)犬抗體水平較低，不能很好抵抗CDV感染，極大增加了感染后向外排毒的風(fēng)險。從結(jié)果可見，保護(hù)區(qū)周圍家養(yǎng)犬對CDV的抗病能力亟需增強(qiáng)，否則對于大熊貓健康是巨大的潛在風(fēng)險。

第二次統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，抗體檢測為陰性的犬僅占9.8%，數(shù)量仍較少，家養(yǎng)犬?dāng)y帶的CDV仍對熊貓是一個巨大的風(fēng)險。有77.0%達(dá)到了良好的抗體滴度水平，較之第一次調(diào)查的53.5%有較大提高，能很大程度降低傳染病向保護(hù)區(qū)其他地區(qū)的蔓延風(fēng)險，由此可見免疫接種行之有效。從地理信息分布圖上看，犬與大熊貓活動范圍有交集，哨兵動物基本可以覆蓋村落周圍與保護(hù)區(qū)交界。

3.2 基于風(fēng)險分析的疾病防控建議

根據(jù)調(diào)查統(tǒng)計(jì)結(jié)果，該病毒在佛坪保護(hù)區(qū)大熊貓活動范圍周圍的家養(yǎng)犬身上檢出率較高，未免疫時抗體檢測陰性率為零，可見其對保護(hù)區(qū)內(nèi)大熊貓構(gòu)成巨大健康風(fēng)險，需要引起重視。根據(jù)檢測調(diào)查結(jié)果分析，可從以下三個方面對保護(hù)區(qū)進(jìn)行監(jiān)測與防控，以規(guī)避犬瘟熱對大熊貓?jiān)斐傻膫Γ?/p>

(1)哨兵犬及犬只規(guī)范化管理

從監(jiān)測研究中可以發(fā)現(xiàn)，在群體免疫水平相對較高、能夠抵擋傳染病大范圍爆發(fā)及設(shè)置分布適當(dāng)哨兵犬的情況下，哨兵犬的抗體水平維持一個低水平狀態(tài)。一旦開始有蔓延的趨勢，被感染的低抗體滴度哨兵犬大概率會優(yōu)先表現(xiàn)癥狀，并且抗體水平變化可以反映無癥狀感染的情況。該體系建立后，只需對哨兵犬進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測與群體補(bǔ)免即可。另外，哨兵犬管理方面應(yīng)杜絕隨意添加與放置，以免引入傳染病影響群體免疫。其余家犬，應(yīng)限制其活動范圍，規(guī)范管理，嚴(yán)格控制生育，避免群體無限增長。

(2)建立免疫隔離帶

此方法主要與周邊村落可能接觸野生動物的家養(yǎng)犬疫苗接種相關(guān)。對家犬群進(jìn)行系統(tǒng)化的疫苗接種，根據(jù)抗體水平定期進(jìn)行補(bǔ)免，保持群體抗體水平維持在高水平。高水平抗體能有效抑制傳染病感染后的病毒復(fù)制過程。同時，依據(jù)保護(hù)區(qū)地形和地理圖黃線劃分隔離界限。冬天大熊貓等野生動物多在低海拔地區(qū)活動，隔離界限的劃分要參考野生動物活動行為模式，以和低海拔河道附近有一定距離為限制。需要注意嚴(yán)格管理家犬活動范圍，避免越過保護(hù)界。

(3)強(qiáng)化與其他大熊貓保護(hù)區(qū)的信息交流

與同省或所有大熊貓保護(hù)區(qū)所在地區(qū)的動物醫(yī)院聯(lián)動，及時收集就醫(yī)的犬瘟熱病患信息，更好地預(yù)報預(yù)警保護(hù)區(qū)疫病的發(fā)生、流行和爆發(fā)。保護(hù)區(qū)犬瘟疫情往往滯后于城市寵物犬。結(jié)合寵物臨床相關(guān)疾病蔓延情況可以及時制定防控策略，若發(fā)現(xiàn)寵物集中出現(xiàn)犬瘟熱蔓延，保護(hù)區(qū)應(yīng)及時采取相應(yīng)措施進(jìn)行早期預(yù)防。