唐固平李昭會(huì)陳麗融何紅梅郭進(jìn)喜

宮頸癌是婦科臨床常見的惡性腫瘤之一， 我國(guó)宮頸癌的發(fā)病率和死亡率一直居高不下，目前，宮頸癌已成為嚴(yán)重危害女性健康的重要危險(xiǎn)因素之一。據(jù)報(bào)道，惡性腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞微環(huán)境紊亂密切相關(guān)，而細(xì)胞外基質(zhì)是細(xì)胞微環(huán)境的重要組分，有助于維持細(xì)胞的正常功能[1]。潛在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(latent transforming growth factor binding protein 2, LTBP2)是LTBP纖維蛋白家族的重要成員，也是細(xì)胞外基質(zhì)的重要組分之一[2]。最近有文獻(xiàn)報(bào)道，LTBP2在多種惡性腫瘤組織中表達(dá)異常，且與病人的不良預(yù)后有關(guān)[3]。然而，目前國(guó)內(nèi)有關(guān)LTBP2在宮頸癌中的表達(dá)及與宮頸癌關(guān)系的研究較少。因此，本研究旨在探討LTBP2在老年宮頸癌病人血清中的表達(dá)，并分析血清表達(dá)水平與老年宮頸癌病人臨床病理特征間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對(duì)象為2017年7月至2019年7月達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的78例老年宮頸癌病人。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均經(jīng)病理檢查首次確診為宮頸癌；(2)入組前未接受過(guò)化療及放療；(3)確診后均接受手術(shù)切除治療；(4)年齡≥60歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床分期為Ⅳ期，不能接受手術(shù)治療；(2)合并急性感染性疾??；(3)重要臟器功能障礙；(4)既往有腫瘤病史。78例病人中，年齡60～75歲，平均(69.72±8.55)歲，臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期26例，Ⅲ期52例，分化程度：低分化23例、中分化34例、高分化21例。另納入同期確診為慢性宮頸炎的老年病人31例為慢性宮頸炎組，平均年齡為(67.39±9.42)歲，體檢的健康人群37例為正常對(duì)照組，平均年齡為(65.71±10.07)歲，3組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 樣本采集 采集所有入組者的晨起空腹外周靜脈血4 mL，另采集老年宮頸癌病人手術(shù)后1、3、6個(gè)月時(shí)的外周靜脈血各4 mL，EDTA抗凝處理，室溫靜置30 min，3000 r/min離心20 min，抽取上層血清，于2 h內(nèi)檢測(cè)完畢，整個(gè)過(guò)程避免溶血。

1.3 檢測(cè)方法 嚴(yán)格參照人組織LTBP2酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒(上海潤(rùn)裕生物科技有限公司)說(shuō)明書進(jìn)行操作，首先設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔，空白孔不加，標(biāo)準(zhǔn)孔加按一定比例稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣本孔加待測(cè)樣本50μL，然后除空白孔外，其余每孔均加辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，附上封板膜，37 ℃溫育60 min，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每孔加洗滌液300μL，浸泡1 min，甩干，再向每孔加入底物溶液A、B各50μL，37 ℃避光溫育15 min，最后每孔加入終止液50μL，15 min內(nèi)，使用Synergy 2型多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTek公司)在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的光密度(optical density, OD)值。

2 結(jié)果

2.1 3組血清LTBP2水平比較 3組血清LTBP2水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=11.264,P<0.001)，其中宮頸癌組血清LTBP2水平顯著高于慢性宮頸炎組和正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。慢性宮頸炎組和正常對(duì)照組血清LTBP2水平相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組血清LTBP2水平比較

2.2 血清LTBP2水平與宮頸癌病人臨床病理特征的關(guān)系 不同臨床分期、分化程度的病人血清LTBP2水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人血清LTBP2水平顯著高于未轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，但不同年齡、腫瘤直徑、肌層浸潤(rùn)深度、脈管癌栓病人的血清LTBP2水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 血清LTBP2水平與病人臨床病理特征的關(guān)系

2.3 手術(shù)前后宮頸癌病人血清LTBP2水平及陽(yáng)性率比較 與術(shù)前相比，宮頸癌病人術(shù)后1、3、6個(gè)月血清LTBP2水平逐漸降低，各時(shí)間點(diǎn)血清LTBP2水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。以術(shù)前血清LTBP2水平平均值為界限，將病人血清LTBP2水平>平均值(36.72μg/L)定義為陽(yáng)性[4]，78例病人中，術(shù)前血清LTBP2陽(yáng)性率為46.15%，術(shù)后血清LTBP2陽(yáng)性率顯著下降，各時(shí)間點(diǎn)血清LTBP2陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但術(shù)后3個(gè)月與術(shù)后6個(gè)月血清LTBP2陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，術(shù)后6個(gè)月病人血清LTBP2陽(yáng)性率僅為2.56%(2/78)，這2例病人的病情較重，預(yù)后較差，見表3。

表3 手術(shù)前后宮頸癌病人血清LTBP2水平及陽(yáng)性率比較(n=78)

3 討論

宮頸癌是繼乳腺癌之后，威脅女性健康的“二號(hào)殺手”。盡管近年來(lái)通過(guò)早期篩查手段可以早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌或癌前病變，甚至宮頸癌高危人群，但由于宮頸癌病人早期也容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致病人的遠(yuǎn)期預(yù)后仍不理想[5]。因此，深入探究宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中相關(guān)的分子機(jī)制，對(duì)于提高宮頸癌的精準(zhǔn)靶向治療具有積極意義，有助于提高病人的遠(yuǎn)期預(yù)后。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤微環(huán)境關(guān)系密切。腫瘤細(xì)胞可通過(guò)釋放細(xì)胞因子調(diào)控腫瘤微環(huán)境，而腫瘤微環(huán)境也影響著腫瘤細(xì)胞的各種生物學(xué)特性[6-7]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)維持細(xì)胞功能具有重要作用的細(xì)胞外基質(zhì)可能與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[8]。LTBP2是一種參與細(xì)胞外基質(zhì)組成的胞外分泌蛋白，其在細(xì)胞黏附、彈性纖維聚集等生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用[9]。既往有文獻(xiàn)報(bào)道，LTBP2與肝癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等多種實(shí)體惡性腫瘤關(guān)系密切[10]。LTBP2在肝癌病人血清中呈高表達(dá)，在胃癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，且可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲[11]。然而，目前國(guó)內(nèi)有關(guān)LTBP2在宮頸癌中的表達(dá)及意義的研究較少。由于老年宮頸癌病人機(jī)體免疫力普遍降低、多合并基礎(chǔ)疾病、更易發(fā)生轉(zhuǎn)移，而LTBP2又與惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，因此，本研究將老年宮頸癌病人作為研究對(duì)象，分析了LTBP2在老年宮頸癌病人血清中的表達(dá)及意義。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組血清LTBP2水平顯著高于慢性宮頸炎組和正常對(duì)照組，但慢性宮頸炎組和正常對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明宮頸癌病人血清中LTBP2表達(dá)增加，其表達(dá)增加可能與宮頸癌的發(fā)病有關(guān)。

本研究進(jìn)一步分析了血清LTBP2水平與宮頸癌病人臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，不同臨床分期、分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人血清LTBP2水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明LTBP2表達(dá)與病人的臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系。據(jù)以往的文獻(xiàn)報(bào)道，血清LTBP2的表達(dá)與肝癌病人的腫瘤直徑有關(guān)[12]，但本研究未發(fā)現(xiàn)血清LTBP2表達(dá)與腫瘤直徑存在明顯關(guān)系，這可能與腫瘤類型不同有關(guān)。

手術(shù)后，由于腫瘤切除后腫瘤細(xì)胞大量減少，導(dǎo)致LTBP2分泌到外周循環(huán)中的量減少，從而導(dǎo)致血清LTBP2水平顯著下降。本研究結(jié)果顯示，術(shù)后1、3、6個(gè)月血清LTBP2水平逐漸降低，術(shù)后6個(gè)月僅2例仍呈陽(yáng)性表達(dá)，這2例病人的病情嚴(yán)重，預(yù)后較差。研究顯示，LTBP2可促進(jìn)肝癌、乳腺癌、黑色素瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[13]，與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，因此本研究結(jié)果提示血清LTBP2水平可作為宮頸癌病人病情觀察的輔助檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)于評(píng)估臨床治療效果有一定的參考價(jià)值。

綜上所述，老年宮頸癌病人血清中LTBP2表達(dá)增加，并與臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系，監(jiān)測(cè)血清LTBP2水平對(duì)于老年宮頸癌病人手術(shù)前后的病情評(píng)估具有一定的臨床價(jià)值。但仍需在今后進(jìn)行更多的實(shí)驗(yàn)加以探究LTBP2在宮頸癌中的具體作用機(jī)制，以期為靶向?qū)m頸癌微環(huán)境的治療奠定一定的基礎(chǔ)。