聶廷芬, 鄭寶勇, 張彥秀

天津醫(yī)科大學寶坻臨床學院(天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院)皮膚科(天津 301800)

尖銳濕疣主要臨床表現(xiàn)為肛周、生殖器官表皮組織出現(xiàn)增生性損害，主要傳播途徑包括性傳播以及母嬰傳播[1-2]。隨著我國社會、經(jīng)濟、文化思想的不斷發(fā)展，人們生活觀念逐漸開放，特別是青年群體，性觀念較為開放，致使我國尖銳濕疣癥狀發(fā)病率呈現(xiàn)逐年遞增趨勢[3-4]。有學者在研究中表示，尖銳濕疣癥狀的發(fā)生、發(fā)展威脅患者身心健康[5]。目前關(guān)于茶多酚聯(lián)合CO2激光治療尖銳濕疣的研究較少，本研究旨在探究兩者聯(lián)合對白細胞介素-1受體相關(guān)激酶-1(IRAK1)、白細胞介素-1受體相關(guān)激酶-4(IRAK4)和腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)表達的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年2月至2019年2月我院收治的尖銳濕疣患者108例，隨機數(shù)字表法分為CO2激光組、聯(lián)合組各54例。CO2激光組男30例，女24例，年齡23～42歲，平均(32.5±6.3)歲，病程2～5個月，平均(3.6±1.2)個月；聯(lián)合組男28例，女26例，年齡24～42歲，平均(32.9±6.5)歲，病程2～5個月，平均(3.5±1.3)個月。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

排除標準：(1)接受過相關(guān)治療者；(2)茶多酚過敏者；(3)患有其他生殖系統(tǒng)疾病者；(4)心、肝、腎功能障礙者；(5)精神、語言障礙者。

所有患者家屬對本研究均知情、同意。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 CO2激光組：于病灶組織位置涂抹4%醋酸溶液，10 min后進行消毒、麻醉處理，使用CO2激光治療儀反復燒灼患者尖銳濕疣組織，燒灼范圍包含全部疣體組織及疣體四周2 mm，每兩次CO2激光治療需間隔10 d。聯(lián)合組：在CO2激光組的治療基礎(chǔ)上使用茶多酚片進行聯(lián)合治療：2片/次，3次/d，于三餐后使用溫水進行吞服。CO2激光方法與CO2激光組保持一致。

1.2.2 創(chuàng)面恢復狀況 統(tǒng)計、對比CO2激光組、聯(lián)合組患者創(chuàng)面結(jié)痂、愈合情況。

1.2.3 指標檢測 采集所有患者治療前及治療結(jié)束3 d后空腹靜脈血5 mL，離心處理后-80℃環(huán)境中保存。酶聯(lián)免疫吸附實驗法檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、促血管生成素2(Ang-2)及白細胞介素-8(IL-8)、白細胞介素-17(IL-17)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平：設(shè)置10個標準孔，設(shè)置1個空半空及若干待測樣品,在10 μL待測樣品中加入40 μL樣本稀釋液，封板膜封板，置于37℃水浴箱溫育30 min，清洗反應(yīng)板5次，每次間隔30 s，拍干，在除空白孔以外的各孔中加入酶標液50 μL，封膜溫育30 min，清洗反應(yīng)板5次，每次間隔30 s，拍干，在各孔中加入顯色A液、B液各50 μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光環(huán)境下顯色15 min，在反應(yīng)孔內(nèi)加入終止液50 μL/孔以終止反應(yīng)，450 nm波長測量每孔吸光度，檢測VEGF、Ang-2、IL-8、IL-17、hs-CRP水平。T淋巴細胞亞群水平檢測：對待測標本做抗凝處理，分為兩管，分別加入20 μL CD8+、CD4+、CD3+單克隆抗體，在室溫環(huán)境下孵育30 min后在各管中加入融血劑，待其完全溶血后進行離心處理，10 000×g離心5 min，棄上清液，使用洗滌液對其進行洗滌后在各管中加入150 μL固定劑，使用0.5 mL PBS混合均勻制備為懸液，使用流式細胞儀檢測CD8+、CD4+、CD3+水平。使用Western blot法對IRAK1、IRAK4、TRAF6相對表達量進行檢測：提取50 μg蛋白，煮沸5min使蛋白變性后用SDS-PAGE凝膠電泳，然后依據(jù)蛋白分子大小把凝膠切開并轉(zhuǎn)移至PVDF膜上,用Western封閉液把待測蛋白和內(nèi)參蛋白封閉90 min在室內(nèi),按1∶1 000加到待測蛋白抗體，內(nèi)參抗體以1∶2 000加入抗體,孵育過夜，使用Western洗滌液洗滌5次，每10 min 1次。按1∶5 000加入稀釋山羊抗兔IgG,孵育60 min室溫水平搖床,洗滌5次Western洗滌液,每10 min 1次。經(jīng)過ECL顯色和曝光后，進行BIO-RAD成像，使用Image J圖像分析系統(tǒng)檢測條帶的灰度值,以內(nèi)參條帶灰度值與蛋白比值為結(jié)果統(tǒng)計分析。

1.2.4 治療效果評價 按照顯效、有效、無效的標準對兩組患者臨床治療效果進行評價。顯效：尖銳濕疣組織病灶徹底消退，病灶組織部位表皮恢復正常，未復發(fā)；有效：尖銳濕疣組織病灶明顯消退，病灶組織部位表皮有效改善；無效：尖銳濕疣組織病灶未消退，或治療后病情復發(fā)?？傆行?(顯效數(shù)+有效數(shù))/總例數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 創(chuàng)面恢復狀況 相比CO2激光組，聯(lián)合組創(chuàng)面結(jié)痂、愈合時間較短，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 創(chuàng)面恢復狀況

2.2 VEGF、Ang-2水平變化 治療前兩組VEGF、Ang-2水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，相比CO2激光組，聯(lián)合組VEGF、Ang-2水平較低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 VEGF、Ang-2水平比較

2.3 炎癥反應(yīng)比較 治療前兩組炎癥因子比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，相比CO2激光組，聯(lián)合組IL-8、IL-17、hs-CRP水平較低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 血清IL-8、IL-17、hs-CRP水平比較

2.4 免疫功能對比 治療前兩組免疫功能比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，相比CO2激光組，聯(lián)合組CD8+水平較低，CD4+、CD3+水平較高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 T淋巴細胞亞群水平比較

2.5 IRAK1、IRAK4、TRAF6相對表達量比較 治療前兩組IRAK1、IRAK4、TRAF6表達比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后兩組IRAK1、IRAK4、TRAF6表達均下降，且聯(lián)合組IRAK1、IRAK4、TRAF6表達均低于CO2激光組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 IRAK1、IRAK4、TRAF6相對表達量比較

2.6 治療有效率對比 聯(lián)合組患者治療有效率顯著高于CO2激光組，差異有統(tǒng)計學意義(2=4.285，P=0.038)。見表6。

表6 治療有效率對比 例(%)

3 討論

臨床常使用藥物治療、激光治療、光動力療法、電灼治療等手段對尖銳濕疣患者進行治療[6-7]。CO2激光通過氣體激光氣化尖銳濕疣組織[8-9]。顧麗群等[10]在研究中使用CO2激光對尖銳濕疣患者進行治療，取得了較為理想的臨床治療效果。茶多酚是茶葉中主要活性成分，具有抗衰老、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫、降血脂等藥理作用。劉廣悅等[11]在研究中表示，茶多酚具有調(diào)節(jié)免疫、提升機體抵抗力的作用，使用茶多酚聯(lián)合光動力療法對尖銳濕疣患者進行治療，效果顯著。本研究中使用茶多酚聯(lián)合CO2激光對尖銳濕疣患者進行治療，患者病灶創(chuàng)面結(jié)痂、愈合時間相對較短，說明該治療方案能夠促進患者創(chuàng)面愈合。

尖銳濕疣發(fā)生與病灶組織新生血管的發(fā)展密切相關(guān)[12]。VEGF、Ang-2均與機體組織新生血管的生成密切相關(guān)。有研究顯示，VEGF、Ang-2在尖銳濕疣組織中均呈現(xiàn)異常表達，從而參與尖銳濕疣癥狀的發(fā)生、發(fā)展[13-14]。本研究結(jié)果顯示，使用茶多酚聯(lián)合CO2激光對尖銳濕疣患者進行治療，患者VEGF、Ang-2水平出現(xiàn)明顯下降，說明兩者聯(lián)合能夠抑制VEGF、Ang-2水平，從而達到治療效果，出現(xiàn)這一研究結(jié)果的原因可能是茶多酚具有誘導組織細胞凋亡、抑制新生血管生成的作用。

有研究顯示，尖銳濕疣的發(fā)生伴隨著炎癥反應(yīng)[15]。檢測IL-8、IL-17、hs-CRP水平能夠較為準確地對尖銳濕疣患者炎癥反應(yīng)進行評價。沈躍莉等[16]在研究中表示，尖銳濕疣患者IL-8水平較高，對尖銳濕疣患者進行有效的治療，能夠下調(diào)IL-8水平，減輕患者炎癥反應(yīng)?？桌椎萚17]在研究中表示，IL-17在尖銳濕疣組織中水平較高，檢測IL-17水平對評價尖銳濕疣癥狀嚴重程度以及臨床治療效果具有重要意義。吳英桂等[18]在研究中表示，有效的臨床治療能夠下調(diào)血清hs-CRP水平，減輕患者炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，使用茶多酚聯(lián)合CO2激光治療尖銳濕疣，能調(diào)控IL-8、IL-17、hs-CRP水平，抑制機體炎癥反應(yīng)，治療效果顯著。

尖銳濕疣癥狀的發(fā)生、發(fā)展通常伴隨著機體免疫功能異常。李亞偉[19]在研究中表示，T淋巴細胞亞群在尖銳濕疣中水平呈現(xiàn)明顯異常。本研究顯示，使用茶多酚聯(lián)合CO2激光治療尖銳濕疣，能夠通過調(diào)控T淋巴細胞亞群水平提升患者免疫功能。

IRAK1、IRAK4、TRAF6作為MyD88信號通路下游因子，三者水平變化與機體免疫功能變化以及炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。史毓杰等[20]在研究中顯示，IRAK1、IRAK4、TRAF6在尖銳濕疣組織中表達異常。本研究顯示，使用茶多酚聯(lián)合CO2激光對尖銳濕疣患者進行治療，患者IRAK1、IRAK4、TRAF6表達出現(xiàn)明顯下調(diào)，說明兩者聯(lián)合能夠調(diào)控IRAK1、IRAK4、TRAF6的表達，起到調(diào)節(jié)免疫、抑制炎癥反應(yīng)的作用，從而發(fā)揮治療效果。

綜上所述，使用茶多酚聯(lián)合CO2激光對尖銳濕疣患者進行治療，能夠有效促進患者病情恢復，控制患者病灶組織發(fā)展，抑制炎癥反應(yīng)，調(diào)控T淋巴細胞亞群水平及IRAK1、IRAK4、TRAF6表達，治療效果顯著，具有一定的臨床應(yīng)用價值。