孫鑫澤 侯佳琪 張德花 羅兵 王明微

（1.吉林省食品藥品安全檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心 吉林長(zhǎng)春 130000；2.吉林省安信食品技術(shù)服務(wù)有限責(zé)任公司）

1 前言

金黃色葡萄球菌廣泛存在于自然界中， 是污染食品的主要菌種，嚴(yán)重影響食品安全。當(dāng)人們攝入被金黃色葡萄球菌污染的食物后，可引發(fā)食源性疾病，對(duì)公共健康發(fā)展造成不利影響[1]。 當(dāng)前，金黃色葡萄球菌所引起的食物中毒已經(jīng)成為食品安全領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。研究表明，當(dāng)食品中金黃色葡萄球菌達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，可導(dǎo)致食用者出現(xiàn)惡心嘔吐、腹痛腹瀉、發(fā)熱等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致食用者中毒身亡。 因此，采取有效方法， 加強(qiáng)食品中金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)，確保食品安全，是當(dāng)前有關(guān)部門和相關(guān)機(jī)構(gòu)的重點(diǎn)工作[2]。 本次研究對(duì)紙片法和B-P 平板法檢驗(yàn)食品中金黃色葡萄球菌的效果進(jìn)行了研究分析。

2 研究資料與方法

2.1 一般資料

隨機(jī)選擇本地農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，購(gòu)買乳制品、熟肉制品和方便食品各50 g，均為固體或半固體樣品，購(gòu)回食品樣本后，將其平均分為2 份，每份25 g，并立即將其放置于無(wú)菌容器中保存。

2.2 研究方法

2.2.1 紙片法

（1）菌落培養(yǎng)：無(wú)菌環(huán)境下取出事先準(zhǔn)備好的乳制品、熟肉制品和方便食品各25 g，分別置于盛有225 mL 生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋， 使用拍擊式均質(zhì)器拍打無(wú)菌均質(zhì)袋120 s，獲取固樣質(zhì)量比為1∶10的樣液。 使用微量移液器吸取 1∶10 樣液 1 mL，沿管壁緩慢注入盛有9 mL 生理鹽水的無(wú)菌試管，振搖試管混合均勻，制成 1∶100 的樣液。 吸取 1 mL 1∶10樣液， 滴在PetrifilmTM金黃色葡萄球菌測(cè)試片的中央，然后將上層膜緩慢蓋下，避免產(chǎn)生氣泡。 然后將壓板放置在上層膜中央處，輕輕地壓下，保證樣液均勻覆蓋于圓形培養(yǎng)面上，取下壓板，靜置1 min，隨后將測(cè)試片透明面朝上放置于培養(yǎng)箱中36℃培養(yǎng)24 h。 采取同樣方法進(jìn)行1∶100 樣液的紙片法檢驗(yàn)，另外每個(gè)食品樣本的每個(gè)稀釋度均打樣2 個(gè)紙片，做平行試驗(yàn)。

（2）菌落鑒別：觀察測(cè)試片上的菌落顏色，記錄紫紅色菌落的數(shù)量。

（3）菌落確認(rèn)：揭起測(cè)試片上層膜，在測(cè)試片培養(yǎng)范圍放置確認(rèn)反應(yīng)片后再將上層膜蓋上，用手指輕輕的將其壓緊逼出氣泡， 隨后置于培養(yǎng)箱中36℃培養(yǎng) 1～3 h[3]。

（4）結(jié)果觀察：觀察測(cè)試片上菌落的顏色變化，如果確認(rèn)反應(yīng)片上原來(lái)呈紫紅色的菌落出現(xiàn)淡粉紅色暈圈，則可確認(rèn)其為金黃色葡萄球菌。

2.2.2 B-P 平板法

（1）菌落培養(yǎng)：采取與紙片法相同方式分別制備乳制品、熟肉制品和方便食品固樣質(zhì)量比為1∶10和1∶100 的樣液。 在每個(gè)食品樣本不同稀釋度樣液中吸取 1 mL，以 0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL 接種量分別加入3 塊B-P 平板，然后用無(wú)菌涂布棒涂布整個(gè)平板。涂布后靜置平板10 min。如果樣液不易被吸收，可將平板置于培養(yǎng)箱中36℃培養(yǎng)1 h， 待樣液被平板均勻吸收后，翻轉(zhuǎn)倒置后放置于培養(yǎng)箱中36℃培養(yǎng) 24～48 h。

（2）典型菌落計(jì)數(shù)：觀察B-P 平板上菌落形狀和顏色：圓形，直徑2～3 mm，周圍存在乳白色透明圈，顏色為灰褐色或黑色的菌落為金黃色葡萄球菌。

（3）菌落確認(rèn)：取上述菌落行革蘭氏染色，隨后轉(zhuǎn)接至腦心浸出液肉湯，并置于培養(yǎng)箱中36℃培養(yǎng)18～24 h。 向 0.5 mL 凍干血漿中滴加 0.2～0.3 mL，搖勻后置于36℃恒溫培養(yǎng)箱， 每隔30 min 觀察1 次，連續(xù)觀察6 h。 如呈現(xiàn)凝固，且凝固體積達(dá)到原體積的一半，則判定為血漿凝固酶試驗(yàn)為陽(yáng)性。 另外采用金黃色葡萄球菌陽(yáng)性菌株進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)[4]。

2.3 觀察指標(biāo)

觀察2 種檢驗(yàn)方法在不同食品中的金黃色葡萄球菌檢出率，并記錄2 種檢測(cè)方法的檢測(cè)時(shí)間。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

通過(guò) EPIDATA 3.0 軟件錄入數(shù)據(jù)， 選用GraphPadPrism8.0 軟件比對(duì)數(shù)據(jù)， 平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示計(jì)量資料（t 檢驗(yàn)）；百分?jǐn)?shù)表示計(jì)數(shù)資料（χ2檢驗(yàn)）。將 P ＜ 0.05 視為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。另采用SPSS 21.0 軟件對(duì)2 種檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)結(jié)果行t 檢驗(yàn)和F 檢驗(yàn)，調(diào)查其相關(guān)性和顯著性。

3 結(jié)果

3.1 2 種檢驗(yàn)方法在不同食品中金黃色葡萄球菌檢出率，詳見(jiàn)表1。

表1 2 種檢驗(yàn)方法在不同食品中金黃色葡萄球菌檢出率[n（%），n=80]

3.2 2 種檢驗(yàn)方法檢測(cè)時(shí)間，詳見(jiàn)表2。

3.3 2 種檢驗(yàn)方法相關(guān)性和顯著性，詳見(jiàn)表3。

表2 2 種檢驗(yàn)方法檢測(cè)時(shí)間（X±S，n=80）

表3 2 種檢驗(yàn)方法相關(guān)性和顯著性

4 討論

金黃色葡萄球菌是一種極為常見(jiàn)的食源性致病微生物，其不僅寄生于空氣、污水等環(huán)境當(dāng)中，同時(shí)也可以寄生于人和動(dòng)物的皮膚、咽喉、胃腸等部位。 金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的耐鹽型，在高鹽環(huán)境下也可正常生存。 此外，其還具有頑強(qiáng)的生命力，需要在80℃以上的高溫環(huán)境下處理30 min 以上才能將其徹底殺死。 由此可見(jiàn)，如果人們購(gòu)買了被金黃色葡萄球菌污染的食品，并且處理方式未達(dá)到滅菌標(biāo)準(zhǔn)，人們?cè)跀z入該食品后會(huì)受到金黃色葡萄球菌侵害，引發(fā)一系列癥狀[5]。 因此，食品衛(wèi)生管理部門需要采取有效方法加強(qiáng)食品安全管理，對(duì)所有容易被金黃色葡萄球菌污染的食物品種進(jìn)行有效檢驗(yàn)，盡早發(fā)現(xiàn)受污染食品，從而避免對(duì)食用者造成身體損傷[6]。

目前可對(duì)食品中金黃色葡萄球菌進(jìn)行檢驗(yàn)的方法較多，其中紙片法和B-P 平板法較為常見(jiàn)。 紙片法是一種以紙片、膜、膠片等作為培養(yǎng)基載體，將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在上面，通過(guò)測(cè)試片上微生物生長(zhǎng)情況和菌落形狀顏色來(lái)判斷食品中微生物的檢驗(yàn)方法。 與其他檢驗(yàn)方法相比，紙片法操作簡(jiǎn)單，可以直接免去微生物分離的操作步驟，同時(shí)在菌落鑒別時(shí)也無(wú)須耗費(fèi)過(guò)多時(shí)間[7]。B-P 平板法是一種較為傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法， 通過(guò)這種方法檢驗(yàn)食品中金黃色葡萄球菌往往需要經(jīng)歷長(zhǎng)時(shí)間的菌落分離和純化分離，如果不進(jìn)行分離純化處理，則很容易出現(xiàn)誤差，從而影響檢驗(yàn)結(jié)果[8]。 本次研究2 種檢驗(yàn)方法在不同食品中金黃色葡萄球菌的檢出率無(wú)明顯差異，2 種檢驗(yàn)方法存在顯著線性關(guān)系，但在檢驗(yàn)時(shí)間方面，紙片法明顯優(yōu)于B-P 平板法。

綜上所述，紙片法和B-P 平板法針對(duì)食品中金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)均可達(dá)到較高檢出率，但相比BP 平板法，紙片法觀察菌落更加直觀，并有效節(jié)省檢驗(yàn)時(shí)間，更具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。