王玉璽，胡 欣

（貴州工程應(yīng)用技術(shù)學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，貴州畢節(jié) 551700）

蒽酮-硫酸法測定地筍多糖含量的研究

王玉璽，胡 欣

（貴州工程應(yīng)用技術(shù)學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，貴州畢節(jié) 551700）

采用蒽酮-硫酸法測定地筍多糖含量并對其測定條件進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：使用蒽酮-硫酸試劑在430～800 nm掃描地筍多糖的最大吸收波長為625nm，蒽酮試劑的最佳濃度為4g/L，最佳加熱時(shí)間為8min，最佳顯色時(shí)間4min，精密度實(shí)驗(yàn)RSD值為2.31%。平均回收率為92.99%，RSD 為3.60%。

地筍多糖；蒽酮-硫酸法；測定

1 研究材料及方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

地筍（產(chǎn)地貴州威寧）、蒽酮、濃硫酸、葡萄糖、三氯甲烷、正丁醇；蒽酮-濃硫酸（2g/L）：稱取0.2g蒽酮，溶于100mL濃硫酸中（現(xiàn)配現(xiàn)用）；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)樣液（100mg/L）：稱取1g葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品于燒杯內(nèi)，攪拌溶解，完全溶解后，移入100mL容量瓶內(nèi)，定容；葡萄糖工作樣液（100μg/L）：精確吸取1mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)樣液于100mL容量瓶內(nèi)，用超純水定容至刻度線。

1.1.2 儀器

分光度計(jì)、恒溫水浴鍋、控溫，微波消解/萃取儀、紫外分光光度計(jì)、真空抽濾器、磁力攪拌器、移液管、可調(diào)試移液器（10mL 5mL）、量筒、燒杯、250mL容量瓶、100mL容量瓶、離心管。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 地筍多糖樣液的制備

稱取已經(jīng)研磨好的、干燥的地筍粉末0.5g，置于消解儀中，加入20mL超純水，放入已經(jīng)調(diào)好的微波消解儀中（80℃，8min）提取，待時(shí)間到達(dá)后，趁熱移入真空抽濾瓶中進(jìn)行抽濾。將濾液移入100mL燒杯中，加入15mLSevage試劑（注意盡量每次沖洗的量最好保持一致），放在磁力攪拌機(jī)上攪拌15min。15min后將溶液移入分液漏斗中進(jìn)行分液，取上清液移入250mL容量瓶中，用超純水定容至刻度線（樣液1）。再從樣液1中取5mL樣液定容至100mL（樣液2），待測。

1.2.2 確定蒽酮-濃硫酸的最大吸收波長

分別吸取1mL葡萄糖工作樣液和地筍多糖樣液2于25mL離心管中，在冰水浴中加入4mL 2g/L蒽酮-濃硫酸溶液，放入80℃的恒溫水浴鍋中恒溫10min后，取出含有待測樣液的離心管，將其放入冰水中，待冷卻至室溫后，將樣液倒入比色皿中，在紫外分光光度計(jì)中進(jìn)行掃描（根據(jù)文獻(xiàn)設(shè)置紫外分光光度計(jì)的掃描范圍為430～800nm），以確定其最大吸收波長。

1.2.3 確定蒽酮-濃硫酸的最佳用量

分別稱取0.01g、0.02g、0.025g、0.03g、0.04g、0.05g、0.06g蒽酮溶于10mL濃硫酸溶液中，準(zhǔn)確吸取7份1mL地筍多糖樣液于編好號的25mL離心管內(nèi)，再分別加入不同濃度的4mL蒽酮-濃硫酸溶液，放入80℃的恒溫水浴鍋中恒溫10min后，取出含有待測樣液的離心管，將其放入冰水中，待冷卻至室溫后，將樣液倒入比色皿中，再在可見分光光度計(jì)中測定其吸光度。

1.2.4 確定蒽酮-濃硫酸的最佳加熱時(shí)間

配制由1.2.3方法得出的蒽酮-濃硫酸最佳的用量，準(zhǔn)確吸取6份1mL地筍多糖樣液于編好號的25mL離心管內(nèi)，再加入4mL配制好的蒽酮-濃硫酸，放入80℃的恒溫水浴鍋中，分別水浴恒溫2min、4min、6min、8min、10min、15min、20min，取出離心管并放入冰水中，待冷卻至室溫后，再在可見分光光度計(jì)中測定其吸光度。

1.2.5 確定蒽酮-濃硫酸的最佳顯色時(shí)間

準(zhǔn)確吸取1mL地筍多糖樣液于25mL離心管中，再加入4mL蒽酮-濃硫酸，放入80℃的恒溫水浴鍋中水浴恒溫一定時(shí)間，取出離心管后，立即將管中的待測樣液倒入比色皿內(nèi)，隔2min就測一次，直到數(shù)據(jù)穩(wěn)定為止。

1.2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取6份1mL地筍多糖溶液于編好號的25mL離心管內(nèi)，再加入4mL蒽酮-濃硫酸溶液，放入80℃的恒溫水浴鍋中恒溫一定后，取出含有待測樣液的離心管，將其放入冰水中，再在可見分光光度計(jì)中測定其吸光度，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)偏差，以確定本實(shí)驗(yàn)方法的精密度。

1.2.7 樣品的測定

用1.2.1的方法且用測出的最佳條件分別提取試樣1和試樣2中的多糖溶液，提取后的樣液分別為樣液1和樣液2，用地筍多糖樣液為原液，用蒽酮-濃硫酸法測定它們的吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 蒽酮-濃硫酸最大吸收波長的確定

通過研究可知，地筍多糖溶液的最大吸收波長在614～625nm，且此時(shí)的吸光度達(dá)到最大值；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大吸光度值的掃描波長在595～624nm，由于掃描時(shí)掃描過快，導(dǎo)致波長在630nm時(shí)的數(shù)值下降太快，依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)和各方面的綜合考慮，選用625nm作為本實(shí)驗(yàn)的測定波長比較合適。

2.2 確定蒽酮-濃硫酸的最佳用量

不同蒽酮-硫酸溶液的濃度對其吸光度的影響很大，當(dāng)蒽酮-硫酸溶液的濃度在4g/L時(shí)，其吸光度值最大，這是因?yàn)闈饬蛩崤c多糖水解反應(yīng)時(shí)需要一定的濃度：濃度大，強(qiáng)酸會(huì)破壞多糖的分子結(jié)構(gòu)，吸光度減小：濃度小，反應(yīng)不完全，吸光度偏小。因此蒽酮-濃硫酸的最佳使用濃度為4g/L。

2.3 確定蒽酮-濃硫酸的最佳加熱時(shí)間

當(dāng)?shù)毓S多糖樣液加熱8min后吸光度達(dá)到最大值，到10min 后吸光度值明顯下降且緩慢上升至平緩；這是由于濃硫酸與多糖水解反應(yīng)時(shí)需要一定的時(shí)間，加熱時(shí)間過短，反應(yīng)不完全，顯色強(qiáng)度不強(qiáng)，吸光度則偏小。

2.4 確定蒽酮-濃硫酸的最佳顯色時(shí)間

地筍多糖樣液反應(yīng)放置4min后，其吸光度基本穩(wěn)定，在4-20min內(nèi)其吸光度總是在0.415、0.416、0.417這三個(gè)數(shù)值上有所波動(dòng)，但是吸光度在20min以后就一直保持在0.415這個(gè)數(shù)值上。這可能是因?yàn)榭梢姺止夤舛扔?jì)本身就存在誤差，且誤差在0.002以內(nèi)，故選用4min為蒽酮-濃硫酸的最佳顯色時(shí)間，且實(shí)驗(yàn)中反應(yīng)后冷卻放置4min以后就可以進(jìn)行測定。

3 結(jié)束語

采用蒽酮-硫酸法測定地筍多糖時(shí)，在比較好的測定條件下測定地筍多糖，即：加入4g/L 蒽酮-硫酸溶液，置于80℃的恒溫水浴鍋中恒溫8min，放入冰水中冷卻4min，于波長625nm 范圍內(nèi)測定吸光值，可提高樣品中地筍多糖測定的準(zhǔn)確度。蒽酮-硫酸法測定地筍多糖具有穩(wěn)定、精準(zhǔn)、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，是一種快速、簡便測定地筍多糖的方法。

Anthrone-Sulfuric Acid Method To Study Bamboo Polysaccharide Content

Wang Yu-xi，Hu Xin

Anthrone-Sulfuric Acid Method To Shoot Polysaccharide Content And Study Its Measurement Conditions.The Results Show That：The Use Of Anthrone-Sulfuric Acid Reagent In The 430-800 Nm Scan To Shoot Polysaccharide Maximum Absorption Wavelength Of 625nm，The Optimum Concentration Anthrone Reagent Is 4g/L，The Optimum Heating Time Of 8min，The Best Coloration Time 4min，Precision Experiments RSD Is 2.31%.The Average Recovery Rate Was 92.99%，RSD 3.60%.

ground shoots polysaccharide；anthrone-sulfuric acid method；Determination

R284

B

1003–6490（2016）04–0154–02

2016–04–06

王玉璽（1993—），男，貴州貴陽人，本科，主要研究方向?yàn)閼?yīng)用化學(xué)。