郭 靜 尤劍彬 曹鵬駒 陳發(fā)林▲

1.福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院，福建福州 350001；2.福建省龍巖市第三醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建龍巖 364000；3.福建省立醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福州 350001

從世界衛(wèi)生組織對(duì)全球肺癌的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)來看，2018年全年新發(fā)肺癌病例約占癌癥的11.6%，因肺癌死亡人數(shù)約占因癌癥死亡人數(shù)的18.4%，肺癌已經(jīng)成為當(dāng)今世界上發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤[1]。大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬于中晚期，故尋找有效的早期診斷和指導(dǎo)預(yù)后的指標(biāo)對(duì)于肺癌的治療尤為重要。

G 蛋白偶聯(lián)受體（G protein-coupled receptor，GPCR）包含7 個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最大的細(xì)胞膜受體，通過與各種不同的配體結(jié)合來傳遞來自細(xì)胞外環(huán)境的反應(yīng)，是藥物研發(fā)的一個(gè)重要領(lǐng)域[2]。研究表明，GPCR 在癌癥的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中同樣起關(guān)鍵作用[3-4]。G 蛋白偶聯(lián)受體37（G protein-coupled receptor 37，GPR37）也稱為帕金森相關(guān)內(nèi)皮素受體樣受體（parkin-associated endothelin receptor-like receptor，Peal-R），于1997年首次從人腦中克隆出來，定位于染色體7q31-33[5]。是一種罕見的GPCR，主要表達(dá)在小腦、胼胝體、殼核、尾狀核、黑質(zhì)和海馬體等神經(jīng)系統(tǒng)區(qū)域[6]。

本研究通過分析癌癥基因組圖譜公共數(shù)據(jù)集（the cancer genome stlas，TCGA），探討GPR37 在肺腺癌中的表達(dá)及其臨床病理特征的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 TCGA 數(shù)據(jù)下載

在TCGA（https：//cancergenome.nih.gov/）搜索并下載數(shù)據(jù)庫中肺腺癌相關(guān)RNAseq 數(shù)據(jù)，在排除缺失生存資料和臨床參數(shù)的病例后，共納入510 例肺腺癌組織（腫瘤組）及對(duì)應(yīng)的肺腺癌患者臨床數(shù)據(jù)，其中癌和配對(duì)的癌旁組織56 例。

1.2 對(duì)GPR37 表達(dá)與臨床預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行分析

利用已有數(shù)據(jù)，分析在總體510 例肺腺癌和56例癌旁組織中GPR37 的表達(dá)差異，進(jìn)一步利用癌和癌旁配對(duì)數(shù)據(jù)對(duì)GPR37 的臨床表達(dá)進(jìn)行分析，采用COX邏輯回歸分析評(píng)估肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因數(shù)，采用Log Rank 檢驗(yàn)對(duì)不同GPR37 表達(dá)水平肺腺癌患者進(jìn)行分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用Graph-Pad Prism v6 進(jìn)行圖片繪制。兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，方差不齊采用非參數(shù)檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用方差分析，單因素及多因素分析采用COX邏輯回歸分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者GPR37 表達(dá)水平的比較

510 例肺腺癌樣本中，腫瘤組中GPR37 的表達(dá)水平高于癌旁對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖1A，見封三）。56 例癌旁正常組織和腫瘤組織配對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示在腫瘤組中GPR37 的表達(dá)量多于癌旁對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖1B，見封三）。圖1均摘自TCGA 數(shù)據(jù)庫。

2.2 GPR37 表達(dá)水平與肺腺癌患者預(yù)后關(guān)系的分析

采用TCGA 對(duì)GPR37 表達(dá)與肺腺癌患者預(yù)后關(guān)系進(jìn)行生存預(yù)后分析，結(jié)果顯示，GPR37 表達(dá)水平與肺腺癌患者預(yù)后有顯著相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖2，見封三）。

2.2.1 GPR37 的表達(dá)水平的單因素分析 單因素COX邏輯回歸分析顯示，GPR37 的表達(dá)水平與性別、年齡以及M 分期無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與Stage 分期中T 分期、N 分期有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 單因素COX 邏輯回歸分析

2.2.2 GPR37 的表達(dá)水平的多因素分析 多因素COX風(fēng)險(xiǎn)比例模型結(jié)果顯示，高GPR37 表達(dá)水平、Stage分期是肺癌患者預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）（表2）。

表2 多因素COX 邏輯回歸分析

3 討論

肺癌按照癌細(xì)胞組織來源可分為大細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）、腺癌（lung adenocarcinoma，LUAD）、鱗癌（lung squamous cell carcinoma，LSCC）等類型，肺腺癌目前已成為最常見的肺癌病理類型[7-8]。并且肺癌已經(jīng)成為當(dāng)今世界上發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤。大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬于中晚期，五年預(yù)后率相對(duì)較低，對(duì)社會(huì)和家庭造成了極大的損失。所以尋找有效的早期診斷和指導(dǎo)預(yù)后的指標(biāo)對(duì)于肺癌的治療尤為重要。腫瘤微環(huán)境時(shí)刻影響著腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展，而GPCR 是細(xì)胞與外部的信息交換不可或缺的組成部分。研究證實(shí)GPR37 是Parkin的底物，在常染色體隱性青少年帕金森病中異常積累，導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和多巴胺能神經(jīng)元死亡。GPR37還參與構(gòu)成路易小體的核心結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為更廣泛地參與帕金森病病理。此外，GPR37 還參與調(diào)節(jié)多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體和多巴胺D2 受體的功能，刺激多巴胺神經(jīng)傳遞[9]。研究表明GPR37 可在發(fā)育過程中對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞分化和髓鞘形成發(fā)揮作用，推測(cè)GPR37 是治療多發(fā)性硬化等脫髓鞘疾病的潛在藥物靶標(biāo)[10]。Fève 等[11]發(fā)現(xiàn)GPR37 在腦膠質(zhì)瘤患者膠質(zhì)瘤組織分離出的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中高表達(dá)，從而推測(cè)GPR37 可能與膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。以上結(jié)果表明GPR37 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮著重要作用，但研究表明GPR37 還參與了其他腫瘤的發(fā)生發(fā)展，Wang 等[12]發(fā)現(xiàn)GPR37 可參與促進(jìn)胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，而下調(diào)GPR37 表達(dá)會(huì)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖并提高細(xì)胞周期中S 期的比例[13]。同時(shí)資料顯示GPR37 的其他同源物質(zhì)也與腫瘤密切相關(guān)，Yan 等[14]證實(shí)GPR87 可促進(jìn)肝癌細(xì)胞中CD133+干細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。GPR56 作為一種黏附受體，在急性淋巴白血病、膠質(zhì)瘤、黑素瘤、等多種腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)[15-17]。本研究結(jié)果顯示，GPR37 在肺腺癌中的表達(dá)高于癌旁正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。單因素COX邏輯回歸分析顯示，GPR37的表達(dá)水平與性別、年齡以及M分期無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與T 分期及N 分期有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。生存預(yù)后分析結(jié)果顯示，GPR37 表達(dá)水平與肺腺癌患者預(yù)后有顯著相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表達(dá)越高，預(yù)后越差。多因素COX風(fēng)險(xiǎn)比例模型結(jié)果顯示，高GPR37 表達(dá)水平、Stage 分期是肺腺癌患者預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

綜上所述，本研究通過TCGA 數(shù)據(jù)庫可知GPR37在肺腺癌中高表達(dá)，且與臨床特征密切相關(guān)，推測(cè)GPR37 可能通過多種途徑參與到肺腺癌的發(fā)生發(fā)展過程，從而影響肺腺癌患者的預(yù)后。因此，GPR37 可作為肺腺癌潛在治療靶點(diǎn)或診斷標(biāo)志物。

圖1 兩組患者的GPR37 表達(dá)水平（下轉(zhuǎn)第113頁）

圖2 GPR37 表達(dá)水平與肺腺癌患者預(yù)后的關(guān)系（下轉(zhuǎn)第113頁）