錢 宇，王桂蘭，吳小波，賈曉彧，李秋平

(1.秦皇島市第一醫(yī)院 兒科,河北 秦皇島066000；2.秦皇島市第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科,河北 秦皇島066000)

臨床上又將過敏性紫癜稱為“許蘭-亨諾綜合征”(Henoch-Schonlein purpura，HSP)”可發(fā)生于任何年齡段，但是以學(xué)齡前及學(xué)齡期兒童常見，是臨床上較為常見的一種自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的全身性血管炎，主要臨床表現(xiàn)包括：出血性皮疹、腹部疼痛、便血、關(guān)節(jié)腫痛、蛋白尿以及血尿等[1-2]。誘發(fā)HSP發(fā)病的原因較多，主要包括病原微生物感染、食物、藥物等，然而直接致病因素卻很難確定。近年來，很多文獻(xiàn)研究結(jié)果顯示[3-4]：感染是HSP發(fā)病的首要誘發(fā)因素，HSP對(duì)患者生活質(zhì)量造成極大的影響。本研究選擇2014年9月至2019年2月秦皇島市第一醫(yī)院兒科就診的200例年齡為3-14歲的患兒為研究對(duì)象，著重探討了血清白介素-29(IL-29)及鐘樣受體4(Toll receptor 4，TLR4)在小兒HSP臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2014年9月至2019年2月秦皇島市第一醫(yī)院兒科就診的200例HSP患兒作為研究對(duì)象，均符合諸福棠實(shí)用兒科學(xué)(第7版)中關(guān)于HSP的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，其中男112例，女88例；年齡3-14歲，平均(7.28±0.63)歲。另外選擇同期于秦皇島市第一醫(yī)院門診體檢中心健康體檢兒童150名作為對(duì)照組，其中男82例，女68例；年齡3-14歲，平均(7.34±0.70)歲。經(jīng)分析，對(duì)照組與觀察組兒童在基礎(chǔ)資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 入選及排除標(biāo)準(zhǔn)入選標(biāo)準(zhǔn)：①包括首發(fā)及復(fù)發(fā)HSP患兒；②智力正常，無精神類疾病患兒；③均依據(jù)倫理學(xué)原則征得患兒家屬及患兒本人同意，自愿配合本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①排除特殊遺傳代謝性疾病與血液系統(tǒng)疾病患兒；②排除自身免疫性疾病患兒；③不愿配合本研究者。

1.3 研究方法首先采集研究對(duì)象清晨空腹?fàn)顟B(tài)下肘靜脈血10.0 ml，使用EDTA抗凝劑進(jìn)行抗凝處理，于2 000 rpm轉(zhuǎn)速下離心10 min，靜置，分離血清與血漿，均于-80℃下進(jìn)行保存，待測。

1.3.1外周血TLR4表達(dá)量檢測方法 采用聚蔗糖密度梯度方法將外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)進(jìn)行提取。細(xì)胞總RNA采用Trizol法進(jìn)行提取，然后逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以此作為模板，開展PCR擴(kuò)增反應(yīng)。TLR4引物均購自于上海生工生物有限公司。引物上游：5’-TACGCTAGCGACTAGCTACT-3’，下游：5’-GCGTACGTACGCTAGCGCAT-3’。擴(kuò)增條件為：95℃下擴(kuò)增5 min，95℃下擴(kuò)增0.5 min，55℃下擴(kuò)增0.5 min，72℃下擴(kuò)增0.5 min，上述過程共計(jì)40個(gè)循環(huán)。目的基因相對(duì)含量計(jì)算：RQ=2-ΔΔCt。

1.3.2IL-29測定方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA法)進(jìn)行測定分析，試劑盒均購自于北京晶美生物醫(yī)學(xué)工程公司。

1.3.3T細(xì)胞亞群水平檢測方法 采用流式細(xì)胞儀[貝克曼庫爾特商貿(mào)(中國)有限公司生產(chǎn)，型號(hào)為：CytoFLEX LX型]對(duì)Th17/Treg細(xì)胞比值進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果

2.1 兩組TLR4表達(dá)量及IL-29水平對(duì)比觀察組患兒外周血TLR4及IL-29水平均分別顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組TLR4表達(dá)量及IL-29水平比較

2.2 兩組患兒外周血Th17、Treg及Th17/Treg對(duì)比觀察組Th17及Th17/Treg水平均分別顯著高于對(duì)照組(P均<0.05)，觀察組Treg水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

表2 兩組患兒外周血Th17、Treg及Th17/Treg比較

2.3 TLR4、IL-29與Th17/Treg相關(guān)性分析經(jīng)Pearson分析，TLR4、IL-29與Th17/Treg均存在相關(guān)性(P均<0.05)，見表3。

表3 TLR4、IL-29與Th17/Treg相關(guān)性分析結(jié)果

3 討論

HSP是臨床上較為常見的一種多發(fā)于兒童人群的免疫性血管炎性疾病，其發(fā)病機(jī)理尚未完全明確[6-7]?；純褐饕R床表現(xiàn)包括：腹部疼痛、皮疹以及關(guān)節(jié)炎性癥狀等。HSP發(fā)病主要與機(jī)體免疫功能紊亂以及T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答失衡存在一定的相關(guān)性，而且患兒各類細(xì)胞因子的分泌異常也會(huì)引起HSP發(fā)病[8]。臨床研究證實(shí)：Th17是近年來發(fā)現(xiàn)的不同于Th1、Th2的T淋巴細(xì)胞亞群，在自身免疫性疾病中發(fā)揮作用[9]，Treg屬于一類對(duì)T淋巴細(xì)胞功能產(chǎn)生抑制作用的細(xì)胞群體，能夠有效維持以及調(diào)節(jié)細(xì)胞正常免疫功能。Th17/Treg比值能夠?qū)C(jī)體正常免疫功能、炎性反應(yīng)以及自身免疫性疾病等均具有維持效果。

HSP發(fā)病與IL-21及IL-10存在顯著的相關(guān)性[10]。劉紅軍[11]研究結(jié)果顯示：HSP發(fā)病與IL-23及IL-15存在顯著相關(guān)性。但是，關(guān)于HSP發(fā)病與IL-29之間的相關(guān)關(guān)系的研究卻非常少見。該細(xì)胞因子屬于一種功能多樣化的炎性細(xì)胞因子，常常會(huì)引起機(jī)體發(fā)生炎性反應(yīng)[12]。IL-29在多種自身免疫性疾病(系統(tǒng)性硬化病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病)扮演重要的角色[13]。程廣坤等[14]研究結(jié)果表明，HSP急性期患兒外周血IL-29 mRNA水平顯著高于對(duì)照組，此結(jié)果提示IL-29與HSP發(fā)病之間存在非常緊密的關(guān)聯(lián)性，而且也表明HSP患者IL-29在轉(zhuǎn)錄水平已出現(xiàn)變化。IL-29在HSP發(fā)病過程中具有十分重要的作用，其機(jī)理可能為：外周血IL-29水平上升，對(duì)NF-κB信號(hào)通路具有激活作用，從而促使Th17過度活化與外周血中的其他細(xì)胞因子水平顯著升高[15]。TLR4參與了機(jī)體多種自身免疫性疾病發(fā)病過程。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道稱：TLR4活化可能與通過MyD88所依賴的途徑而參與了HSP的發(fā)病過程[16]。陸燁等[17]研究結(jié)果顯示：HSP患兒外周血TLR4表達(dá)水平要顯著高于健康兒童(P<0.05)。本研究結(jié)果顯示：觀察組患兒外周血TLR4與IL-29水平顯著高于對(duì)照組，且經(jīng)相關(guān)性分析，此兩種指標(biāo)與Th17/Treg呈正相關(guān)性。此結(jié)果與文獻(xiàn)[18-20]結(jié)果相一致。另外，朱海濤等[21]選擇與TLR4性質(zhì)接近地TLR2作為研究對(duì)象，同樣得出如上述相接近的結(jié)果。

綜上所述，血清IL-29及TLR4在小兒HSP臨床診斷中具有較高的應(yīng)用價(jià)值，可能與機(jī)體免疫應(yīng)答之間存在一定的關(guān)聯(lián)性。