李媛

（廣西壯族自治區(qū)北海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 536000）

小反芻獸疫屬于牛羊常見(jiàn)疾病，是由小反芻獸疫病毒侵入反芻動(dòng)物體內(nèi)后，引發(fā)腹瀉、肺炎、口炎、發(fā)熱等臨床癥狀的一種傳染性極強(qiáng)烈性疾病[1]，常呈現(xiàn)出地區(qū)性流行態(tài)勢(shì)。該病好發(fā)動(dòng)物為山羊、綿陽(yáng)，此外牛、駱駝及豬也可發(fā)病[2]。該病發(fā)病率、致死率較高，近年來(lái)，小反芻獸疫在我國(guó)諸多地區(qū)均有發(fā)生，導(dǎo)致發(fā)生感染的地區(qū)遭遇不同程度的經(jīng)濟(jì)損失，目前已成為全球共同關(guān)注的常見(jiàn)傳染病[3]。在出入境管理和日常動(dòng)物疫病防疫中，對(duì)小反芻獸疫加強(qiáng)檢測(cè)都是重中之重。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是檢測(cè)這一動(dòng)物疫病的常用且有效的方法[4]，目前我國(guó)在該疫病檢驗(yàn)中，所用的多為法國(guó)進(jìn)口檢測(cè)試劑盒，其價(jià)格較高，單次購(gòu)買(mǎi)包裝量大，這與我中心檢測(cè)工作的實(shí)際需求并不相符。近年來(lái)，青島立見(jiàn)診斷技術(shù)發(fā)展中心自主研發(fā)了小反芻獸疫病毒C-ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒，為探討其應(yīng)用價(jià)值，本研究選取北海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心采集的586 份血清標(biāo)本，與法國(guó)所制試劑盒同時(shí)檢測(cè)，以探討自制試劑盒的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 檢驗(yàn)樣品

選取廣西市級(jí)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心2018 年1 月至2019年10 月采集的田間牛羊血清樣本586 份，這些樣本均知悉來(lái)源，其中牛血清271 份，羊血清315 份，采集地區(qū)：上林縣、隆安縣、賓陽(yáng)縣、鹿寨縣、馬山縣、融安縣、柳城縣、靈川縣、陽(yáng)朔縣、全州縣。

1.2 檢測(cè)試劑盒

本研究所用小反芻獸疫病毒C-ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒為2種，其一為青島立見(jiàn)診斷技術(shù)發(fā)展中心自主研發(fā)，簡(jiǎn)稱(chēng)：YN PPRV C-ELISA 試劑盒，其二為國(guó)際通用的PPRV C-ELISA 試劑盒（產(chǎn)自法國(guó)ID-VET 實(shí)驗(yàn)室），簡(jiǎn)稱(chēng)ID VET 試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 血清樣本檢測(cè)

根據(jù)兩種試劑盒的說(shuō)明書(shū)，對(duì)選取的血清樣本展開(kāi)檢測(cè)工作，注意嚴(yán)格根據(jù)說(shuō)明書(shū)操作。所有血清樣本均用這兩種方法同時(shí)檢測(cè)，檢測(cè)中設(shè)立陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，并根據(jù)說(shuō)明書(shū)中標(biāo)準(zhǔn)，將586 份血清樣本的檢測(cè)結(jié)果，劃分為++（強(qiáng)陽(yáng)性）、+（弱陽(yáng)性）、-（陰性）。

1.3.2 重復(fù)試驗(yàn)

在兩種試劑盒檢測(cè)后，從中隨機(jī)抽取20 份標(biāo)本，于相同條件下再次展開(kāi)檢測(cè)，作為重復(fù)試驗(yàn)，并將本次檢測(cè)結(jié)果和初次檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 血清樣本檢測(cè)結(jié)果分析

由表1 可知，YN PPRV C-ELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒對(duì)586 份血清樣本的檢測(cè)結(jié)果差異不顯著（＞0.05）。

2.2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果分析

由表2、3 可知，在586 份樣本中分別隨機(jī)抽取20 份樣本，經(jīng)檢測(cè)YN PPRV C-ELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果和初次檢測(cè)結(jié)果一致。

3 討論

小反芻獸疫屬于高度接觸性傳染病，是我國(guó)出入境動(dòng)物必檢的動(dòng)物疫病檢測(cè)項(xiàng)目。統(tǒng)計(jì)顯示，初次爆發(fā)流行小反芻獸疫的動(dòng)物群中死亡率可達(dá)50%～80%[5]，可見(jiàn)小反芻獸疫的破壞性。我國(guó)首次出現(xiàn)小反芻獸疫是在2007 年，首發(fā)于西藏地區(qū)，而2008 年和2010 年，西藏局部地區(qū)均有小反芻獸疫流行，在2013 年新疆部分地區(qū)出現(xiàn)小反芻獸疫，此后，其在全國(guó)快速擴(kuò)散，至2014 年全國(guó)多數(shù)省份均出現(xiàn)小反芻獸疫。近些年來(lái)，我國(guó)一直表現(xiàn)出小反芻獸疫點(diǎn)發(fā)或散發(fā)的特點(diǎn)[6]。

現(xiàn)階段，控制、凈化小反芻獸疫是我國(guó)動(dòng)物防疫工作的一個(gè)重點(diǎn)。國(guó)內(nèi)現(xiàn)階段對(duì)小反芻獸疫病毒檢驗(yàn)的方法相對(duì)單一，診斷試劑類(lèi)型較少，可選用的診斷試劑盒較少[7,8]，而國(guó)外雖然有許多已成熟檢測(cè)試劑盒，但其價(jià)格較高，購(gòu)買(mǎi)用時(shí)較長(zhǎng)，有時(shí)難以滿(mǎn)足動(dòng)物防疫工作需求。因此，近年來(lái)，許多地區(qū)都在嘗試自主研發(fā)小反芻獸疫病毒C-ELISA 檢測(cè)試劑盒。

表1 血清樣本檢測(cè)結(jié)果分析[單位：n（%）]

表2 YN PPRV C-ELISA 試劑盒重復(fù)檢測(cè)結(jié)果[單位：n（%）]

表3 ID VET 試劑盒重復(fù)檢測(cè)結(jié)果[單位：n（%）]

北海市在動(dòng)物疫病防控工作中對(duì)小反芻獸疫病毒C-ELISA檢測(cè)試劑盒的需求較大，近年來(lái)應(yīng)用較多的試劑盒為YN PPRV C-ELISA、ID VET 兩種試劑盒。試劑盒的檢測(cè)原理為試劑盒制作過(guò)程中，親和層析純化原核表達(dá)N 蛋白是包被抗原，是將活性單抗1A7 阻斷，實(shí)施HRP 標(biāo)記，為酶標(biāo)二抗，對(duì)各反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，形成該病毒抗體阻斷的ELISA 檢測(cè)法[9]。為驗(yàn)證這兩種試劑盒的準(zhǔn)確性及實(shí)用價(jià)值，本研究將YN PPRV CELISA 試劑盒與ID VET 試劑盒的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，YN PPRV C-ELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒對(duì)586 份血清樣本的檢測(cè)結(jié)果差異不顯著（＞0.05）。從這一結(jié)果可以看出，在對(duì)小反芻獸疫病毒檢測(cè)時(shí)，YN PPRV C-ELISA 試劑盒的檢查結(jié)果和ID VET 試劑盒十分接近，表明自主研發(fā)的檢測(cè)試劑盒效能良好。與ID VET 試劑盒相比，YN PPRV C-ELISA試劑盒的價(jià)格大幅下降，且可小量采購(gòu)，能滿(mǎn)足動(dòng)物疫病日常防控的需求，應(yīng)用價(jià)值顯著。

為進(jìn)一步驗(yàn)證YN PPRV C-ELISA 試劑盒的準(zhǔn)確性，本研究還對(duì)其可重復(fù)性展開(kāi)分析。重復(fù)性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，YN PPRV CELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒重復(fù)檢測(cè)與初次檢測(cè)的結(jié)果均保持一致，重復(fù)性良好。由此可見(jiàn)，YN PPRV C-ELISA 試劑盒的檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，可靠性強(qiáng)。另外，這一檢測(cè)試劑盒操作更簡(jiǎn)便，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的要求相對(duì)較低，無(wú)需在嚴(yán)格無(wú)菌條件下操作，且具有較高的自動(dòng)化程度，因此，在動(dòng)物疫病防控中可將這一試劑盒用作大規(guī)模血清樣品檢測(cè)。

總而言之，YN PPRV C-ELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒對(duì)小反芻獸疫病毒的檢測(cè)結(jié)果十分接近，YN PPRV C-ELISA 試劑盒費(fèi)用較為低廉，值得在動(dòng)物檢疫工作中推廣。