劉玉瑰 劉 皓 劉麗霞

河南省鶴壁市人民醫(yī)院(458030)

子宮內(nèi)膜異位癥(EMS)是婦科常見疾病，發(fā)病率為10%～15%，好發(fā)于25～45歲育齡女性，不孕率達40%[1]。最新研究表明，微小RNA(miRNA)參與了EMS的發(fā)生發(fā)展，且不同miRNA在EMS患者血清中表達存在較大差異[2]。目前，關(guān)于EMS患者血清中miRNA表達差異的文獻較多，但有關(guān)血清miRNA與EMS病情程度及不孕的關(guān)系報道較少[3]。本研究探討血清miR-1304-3p、miR-17-5p水平在EMS患者血清中的表達及與患者病情程度及不孕的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集2017年4月—2019年4月本院收治的EMS患者臨床資料。納入標準：①符合EMS診斷標準[4]，經(jīng)實驗室、影像學檢查、腹腔鏡及術(shù)中病理組織學檢查確診；②年齡25～45歲；③月經(jīng)規(guī)律，且處于卵泡期。排除標準：①卵巢惡性腫瘤、盆腔炎性腫塊、子宮腺肌病、多囊卵巢綜合征；②合并嚴重器官功能障礙；③合并高血壓、糖尿病等代謝性疾??；④合并自身免疫??；⑤近6個月激素、抗生素治療史；⑥妊娠、哺乳期；⑦合并嚴重感染性、炎癥性疾病；⑧合并精神疾病?；颊呒凹覍倬炇鹬橥鈺１狙芯拷?jīng)本院倫理委員會審批。

1.2 方法

清晨抽取空腹靜脈血，采用TRIzol試劑盒[賽默飛世爾科技(中國)有限公司]提取總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TAKARA)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以U6為內(nèi)參基因，將合成cDNA模板于熒光定量PCR擴增儀(美國ABI 7900型)行PCR擴增，引物序列及擴增反應體系和條件見表1。miRNA相對表達量以2-ΔΔCT法計算，其中ΔCt=目的miRNA(AVG)-內(nèi)參基因(AVG)，以副孔檢測，AVG表示miR-1304-3p、miR-17-5p CT檢測值。

表1 PCR擴增反應

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 一般情況比較

共納入78例，年齡(34.6±7.5)歲(25～45)歲，病程(7.0±2.2)個月，體質(zhì)指數(shù)(BMI)(22.1±2.6)kg/m2。EMS疾病為卵巢型59例、腹膜型7例、深部浸潤型8例、其他部位型4例；美國生育協(xié)會修正子宮內(nèi)膜異位癥分期(r-AFS)Ⅰ期36例、Ⅱ期18例、Ⅲ期15例、Ⅳ期9例；痛經(jīng)程度(VAS評分)無疼痛(0分)20例、輕度疼痛(1～3分)28例、中度疼痛(4～7分)19例、重度疼痛(8～10分)11例，合并不孕癥31例、無不孕癥47例。不同r-AFS分期及痛經(jīng)程度的EMS患者一般資料無差異(P>0.05)。見表2。

表2 不同r-AFS分期EMS患者一般資料比較

表2 不同痛經(jīng)程度EMS患者一般資料比較

2.2 血清miR-1304-3p、miR-17-5p水平與病情程度

血清miR-1304-3p水平隨r-AFS分期及痛經(jīng)程度增加而升高， miR-17-5p水平隨分期及痛經(jīng)程度增加而降低(均P<0.05)。見表3。Spearman相關(guān)分析顯示，血清miR-1304-3p水平與EMS患者r-AFS分期、痛經(jīng)程度均呈顯著正相關(guān)(r=0.714、0.753，P<0.01)，miR-17-5p水平與EMS患者r-AFS分期、痛經(jīng)程度均呈顯著負相關(guān)(r=-0.619、-0.690，P<0.01)。

表3 不同特征EMS患者血清指標水平比較

2.4 血清miR-1304-3p、miR-17-5p診斷EMS合并不孕癥價值

合并不孕癥組血清miR-1304-3p(0.85±0.25)高于無不孕癥組(0.66±0.17)，miR-17-5p(0.78±0.23)低于不孕癥組(1.07±0.31)(t=3.999、4.458，均P<0.001)。ROC曲線分析，血清miR-1304-3p、miR-17-5p水平單項診斷EMS患者合并不孕癥價值一般，聯(lián)合檢測診斷敏感度、特異度均高于單項檢測。見表4。

表4 血清指標水平診斷EMS合并不孕癥效能

3 討論

miRNA是近年發(fā)現(xiàn)的具有調(diào)控基因表達作用的重要因子，在多種疾病的病理生理過程中起關(guān)鍵作用，可能參與了EMS的發(fā)生進展[5]。miRNA主要以轉(zhuǎn)錄并抑制mRNA方式調(diào)控基因表達，具體作用機制：①成熟miRNA和靶細胞mRNA中非翻譯區(qū)互補結(jié)合，抑制靶細胞翻譯、復制過程，此過程不影響靶細胞mRNA穩(wěn)定性；②成熟miRNA直接和靶細胞mRNA互補結(jié)合，并被RNA誘導沉默復合體(RISC)徹底降解，抑制靶細胞mRNA翻譯、復制過程[6-7]。

Maged[8]報道，miRNA在EMS病灶發(fā)生過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用。舒曉梅[9]發(fā)現(xiàn)EMS患者miR-199a-5p水平明顯高于輸卵管積水患者，且miR-199a-5p水平隨r-AFS分期增加而升高，表明miRNA表達異常與EMS發(fā)生密切相關(guān)。本研究中，EMS患者血清miR-1304-3p水平隨r-AFS分期、痛經(jīng)程度增加而升高，血清miR-1304-3p水平與r-AFS分期、痛經(jīng)程度呈正相關(guān)，表明血清miR-1304-3p表達水平升高可能為導致EMS患者病情加重的因素之一[10]。

Xu等[11]指出，miRNA除以抑制mRNA方式調(diào)控基因表達影響EMS發(fā)生進展外，另一個重要環(huán)節(jié)為細胞、組織血管形成的調(diào)控。馮雙苗等[12]表明，miR-17-92家族中的miR-17-5p通過抑制凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)、結(jié)締組織生長因子(CTGF)表達并調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達促使新生血管形成。本研究中，隨r-AFS分期、痛經(jīng)程度增加，EMS患者血清中的miR-17-5p表達水平明顯降低，且與r-AFS分期、痛經(jīng)程度呈負相關(guān)。與甘芳[13]研究結(jié)果一致。究其原因：miR-17-5p低表達能調(diào)節(jié)缺氧誘導因子-1(PTEN-HIF-1)-VEGF信號通路，誘導生成VEGF，進而誘導新生血管形成，最終引發(fā)EMS[14]。

本研究中，miR-1304-3p、miR-17-5p在不同r-AFS分期及痛經(jīng)程度EMS患者血清中表達水平存在差異，且隨病情嚴重程度加深而出現(xiàn)較大差異，表明血清miR-1304-3p、miR-17-5p與EMS患者病情嚴重程度密切相關(guān)。此外在合并不孕癥EMS患者血清表達也發(fā)生變化，提示miR-1304-3p、miR-17-5p可能與EMS患者合并不孕癥有關(guān)。ROC曲線分析顯示，血清miR-1304-3p聯(lián)合miR-17-5p檢測對EMS患者合并不孕癥有一定診斷價值。但本研究存在樣本量少、病例缺乏代表性的局限性，且缺乏與健康對照組比較，有待進一步多中心、大樣本、隨機對照性研究驗證。

綜上所述，EMS患者血清miR-1304-3p水平隨病情嚴重程度增高而升高，且合并不孕癥患者水平更高；血清miR-17-5p水平隨病情嚴重程度增高而降低，且合并不孕癥患者水平更低；聯(lián)合檢測該兩項指標可作為診斷EMS合并不孕癥的輔助手段。