汪玉龍 郝維敏 郭志國 王晶 劉志

原發(fā)性膽汁性膽管炎(PBC)是消化系統(tǒng)中常見的一種疾病，罹患群體多為女性，發(fā)病原因較多且復(fù)雜，同時該疾病多與風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病等并存，不利于患者正常生活、工作的開展[1-2]。既往已有較多學(xué)者指出免疫紊亂與PBC的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，因此現(xiàn)階段針對PBC患者免疫機(jī)制的研究已成為一項熱門課題[3-4]。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)及白細(xì)胞介素-18(IL-18)均具有調(diào)控機(jī)體免疫的作用，本次研究對PBC患者治療時的外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中的Caspase-1、IL-18進(jìn)行觀察，分析其在PBC發(fā)生、發(fā)展中的作用，現(xiàn)報道如下。

資料與方法

一、一般資料

納入對象為安徽醫(yī)科大學(xué)附屬宿州醫(yī)院于2018年4月至2019年4月收治的PBC患者，共計54例，設(shè)為觀察組，另外選取同期體檢健康的志愿者54名納入研究對象，設(shè)為健康組。觀察組中男女占比為12/42例，最大年齡64歲，最小年齡42歲，中位年齡53歲，肝硬化分級[5]A、B、C級例數(shù)分別為25、18、12例；健康組中男女占比為14/40例，最大年齡64歲，最小年齡43歲，中位年齡53歲。兩組基礎(chǔ)信息對比P>0.05。研究開展經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

二、納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

(一)納入標(biāo)準(zhǔn) ①患者均參照疾病相關(guān)診斷共識確診[6]，志愿者體檢結(jié)果無異常且與患者不存在血緣關(guān)系；②>18歲且<65歲；③均簽署知情同意書。

(二)排除標(biāo)準(zhǔn) ①非PBC；②同時患有血液系統(tǒng)疾??；③同時患有惡性腫瘤與心腦血管疾??；④精神異常不能配合本研究。

三、實驗室檢查

患者(治療前)與志愿者入院后抽取EDTA-K2抗凝全血3 mL，經(jīng)離心Ficoll法分離PBMC，使用RNA蛋白提取試劑盒按照說明書提取RNA，并以微量核酸定量儀對RNA的濃度及純度進(jìn)行檢測，隨后取1 μg RNA行逆轉(zhuǎn)錄后行定量PCR擴(kuò)增，檢查Caspase-1、IL-18的mRNA水平，擴(kuò)增條件95 ℃ 30 s，1個循環(huán)，95 ℃ 5 s、95 ℃ 34 s，40個循環(huán)。Caspase-1上游引物5′-AGAGAACGGTGGTGCTGAACAA-3′，Caspase-1下游引物5′-CCTTTCGGAATAACGGAGT-3′，IL-18上游引物5′-GCTTGAATCTAAATTATCAG-TC3′，IL-18下游引物5′-GAAGATTCAAATTGC-ATCTTAT3′。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

一、兩組Caspase-1、IL-18水平觀察

觀察組Caspase-1、IL-18水平高于健康組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組Caspase-1、IL-18水平觀察 (±s)

二、不同肝硬化分級患者Caspase-1、IL-18水平觀察

不同患者Caspase-1、IL-18水平觀察，C級>B級>A級，均有P<0.05。見表2。

表2 不同肝硬化分級患者Caspase-1、IL-18水平觀察 (±s)

三、相關(guān)性分析

Caspase-1、IL-18水平與肝硬化分級呈正相關(guān)，差異均有P<0.05。見表3。

表3 Caspase-1、IL-18水平與肝硬化分級的相關(guān)性分析

討 論

PBC是一種起病隱匿且逐漸發(fā)展的慢性自身免疫性疾病，臨床特征表現(xiàn)為導(dǎo)管上皮細(xì)胞損失、抗線粒抗體陽性等，該疾病起病后會受機(jī)體免疫的影響形成膽管炎及進(jìn)行性肝膽纖維化、硬化，嚴(yán)重者甚至還會導(dǎo)致肝功能喪失[7-9]。PBC的治療藥物僅有熊去氧膽酸，但治療后效果并不理想，患者仍需接受肝移植手術(shù)，再加上我國近年來PBC的患病群體不斷增加，因此與該疾病治療有關(guān)的研究日益受到臨床醫(yī)師的重視[10-12]。

在本次研究中，觀察組Caspase-1、IL-18高于健康組，提示PBC患者體內(nèi)Caspase-1、IL-18水平呈現(xiàn)出高表達(dá)。Caspase-1是Caspase家庭中的一員，通常以pro-Caspase-1形式存在，當(dāng)Caspase-1活化后能夠發(fā)揮免疫、炎癥調(diào)控的作用[13-15]，IL-18為白細(xì)胞介素-1家族的一員，對體內(nèi)的炎癥因子增殖具有促進(jìn)作用，同時Caspase-1能轉(zhuǎn)化IL-18前體，形成IL-18[16-18]，在轉(zhuǎn)化的過程中容易導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)炎癥或自身免疫性疾病，故患者體內(nèi)Caspase-1、IL-18水平明顯高于健康人。樊佳等[19]在PBC患者的Caspase-1水平觀察中證實，PBC患者Caspase-1水平相對于正常人會明顯上升，同時其還會參與到疾病的發(fā)生中，與本次研究具有一定的相似之處。

在不同肝硬化分級患者的Caspase-1、IL-18水平觀察中，C級>B級>A級，表明Caspase-1、IL-18水平隨疾病嚴(yán)重程度的上升而增加，Caspase-1、IL-18可參與到疾病的發(fā)生與發(fā)展中。PBC是一種發(fā)病后逐漸進(jìn)展的疾病，本次研究PBC患者PBMC中Caspase-1、IL-18隨疾病進(jìn)展不斷增加，筆者分析可能是PBC發(fā)病后機(jī)體各種細(xì)胞受到危險信號的刺激，導(dǎo)致Caspase-1活化，并促進(jìn)IL-18成熟，從而造成機(jī)體出現(xiàn)持續(xù)的炎癥反應(yīng)、免疫失調(diào)，故加重病情。這與李騰達(dá)等[12]的研究結(jié)果相一致。最后為驗證Caspase-1、IL-18與肝硬化分級間的關(guān)系，筆者借助Spearman系數(shù)進(jìn)行檢驗，證實Caspase-1、IL-18水平與肝硬化分級呈正相關(guān)，能夠與上述研究結(jié)果相互驗證，故PBC的診治中臨床也可通過檢查Caspase-1、IL-18作為參考依據(jù)。

綜上，Caspase-1、IL-18與PBC的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，在PBC患者體內(nèi)Caspase-1、IL-18呈現(xiàn)出高表達(dá)。