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        酪蛋白檢測方法的分析與研究

        2021-05-16 10:30:06張道云,田桂艷,曹文燕
        食品安全導(dǎo)刊 2021年14期
        關(guān)鍵詞:沉淀物錐形瓶膜分離

        分析與研究GB31638-2016 酪蛋白的檢測方法,以降低檢測成本和縮短檢測時(shí)間,提高工作效率。方法:對膜分離酪蛋白的檢測方法進(jìn)行了探討,依據(jù)對具體檢測步驟的剖析,溶解樣品采用旋渦振蕩儀、器皿選擇50 mL 錐形瓶和直徑為9 cm 濾紙過濾沉淀等方法操作節(jié)約成本和提高檢測效率。結(jié)果:改變?nèi)芙鈽悠凡捎檬謸u操作方式、選擇合適器皿及濾紙等,此法涉及藥品種類少,檢測效率高,對于檢測收集沉淀量較小的樣品,有較高的優(yōu)勢。 結(jié)論:此法操作便捷,工作效率高,精密度好,在實(shí)際的檢測工作中,可以輔助使用。

        酪蛋白[1]是一種含有磷鈣的結(jié)合蛋白,對酸敏感,pH 值較低時(shí)會沉淀,這種蛋白質(zhì)主要存在哺乳動物中,是哺乳動物的主要蛋白質(zhì),可以降低蛋白質(zhì)的降解率以及氨基酸的氧化率,從而加大蛋白質(zhì)的身體吸收和利用率。酪蛋白對幼兒既是氨基酸的來源,也是鈣和磷的來源,酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。因此市場中也有很多酪蛋白產(chǎn)品,比如酪蛋白磷酸鈦、酪蛋白鈣都是以酪蛋白為主要成分的營養(yǎng)品[2],對人體的營養(yǎng)效果也是非常的好。不僅如此,鑒于這種緩釋特性,酪蛋白還會讓你有持續(xù)的飽腹感,這樣就是為什么健身減肥的人食用酪蛋白后減肥效果更加明顯。

        酪蛋白是以乳和/或乳制品為原料,經(jīng)酸法或酶法或膜分離工藝制得的產(chǎn)品[3],它是由α、β、κ 和r 及其亞型組成的混合物,對酸敏感,pH 值較低時(shí)會沉淀。以乳及乳制品為原料,經(jīng)脫脂、膜分離酪蛋白,再經(jīng)濃縮、殺菌、干燥等工藝制得的產(chǎn)品即為膜分離酪蛋白[4]。本文主要對膜分離酪蛋白的測定方法進(jìn)行研究。

        由于每位實(shí)驗(yàn)操作者的理解認(rèn)知不同,在進(jìn)行GB31638-2016 酪蛋白測定時(shí),檢測者無法快速檢測酪蛋白?;诖?,筆者綜述實(shí)驗(yàn)過程中的問題,探討更為方便的檢測新方法。通過對膜分離酪蛋白的具體檢測步驟的分析,溶解樣品采用旋渦振蕩儀和直徑為9cm 濾紙過濾沉淀等方法操作節(jié)約時(shí)間,提高檢測效率。

        材料與方法

        材料與儀器

        材料與試劑

        硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.05 mol/L)、氫氧化鈉溶液(400 g/L)、硼酸溶液(20 g/L) 、甲基紅乙醇溶液((1 g/L))、溴甲酚綠乙醇溶液((1 g/L))、乙酸鈉溶液(1 mol/L)、10%乙酸溶液

        主要儀器設(shè)備

        定氮儀:Kjeltec8100、電子天平:AL204、旋渦振蕩器

        方法

        稱取0.2 克試樣移入干燥的150mL 具塞錐形瓶中,加入8 mL 水混勻后置于65-67 ℃的水浴上使其完全溶解(每隔5 分鐘輕輕振搖一次,一般為10-15 分鐘)。冷卻后再加入乙酸溶液1 mL,混勻,靜置5 分鐘,再添加乙酸鈉溶液1 mL,混勻,靜置,使酪蛋白沉淀[5],用干濾紙過濾。用緩沖溶液少量多次反復(fù)洗滌錐形瓶及沉淀,將濾紙連同沉淀物折疊,置于消化管內(nèi)進(jìn)行消化,余下步驟GB5009.5-2016 操作。

        研究新方法的實(shí)驗(yàn)步驟與分析

        樣品的溶解

        酪蛋白難溶于水,常溫下不易被混勻。稱取0.2 克試樣(精確至0.001 克)移入干燥潔凈的50 mL 錐形瓶中,加入8 mL 水于漩渦振蕩振蕩器2000 轉(zhuǎn)/min 旋渦1 min左右封口后置于65-67 ℃的水浴鍋使其完全溶解(每隔1分鐘輕輕振搖一次,一般為2-3 分鐘)。

        沉淀物的轉(zhuǎn)移

        國標(biāo)檢測方法中步驟是用緩沖溶液少量多次反復(fù)洗滌錐形瓶及沉淀,將濾紙連同沉淀物折疊,置于消化管內(nèi)進(jìn)行消化。實(shí)際操作時(shí)需要大量時(shí)間沖洗沉淀物也很難處理干凈,經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)得到結(jié)論:借助外物轉(zhuǎn)移沉淀即為增加一根適中長度的玻璃棒作為輔助工具,能快速、徹底地轉(zhuǎn)移沉淀物。

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        濾紙的選擇和硫酸的加入量控制

        消化不完全是消化完畢顏色出現(xiàn)黑色的主要原因。 導(dǎo)致消化不完全的影響因素有:消化溫度低;消化時(shí)間不夠等。本次研究新方法主要針對在消化時(shí)間、消化溫度、硫酸鉀和硫酸銅用量等滿足要求的條件下,進(jìn)行濾紙的選用的解析。

        濾紙大小對消化顏色的影響

        濾紙的選擇國標(biāo)檢測方法中沒有具體要求,因此選擇較小且能達(dá)到過濾效果的濾紙能節(jié)省檢測藥品(硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸和硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液)的用量,同時(shí)能更有效地解決了因催化劑、濃硫酸等用量小造成消化完畢的樣品顏色發(fā)黑無法繼續(xù)檢測的問題。新方法選擇不同濾紙?jiān)谙牡牧蛩嵊昧恳欢ㄇ闆r下對消化完畢顏色的變化進(jìn)行實(shí)驗(yàn),顏色深淺量越低表示越接近正常(淺藍(lán)色)顏色,其中濾紙直徑為9cm 時(shí)是最佳選擇。

        關(guān)鍵步驟檢測樣品時(shí)間

        針對酪蛋白具體檢測時(shí)間分別依據(jù)國標(biāo)方法和本次研究的新方法各做了6 組數(shù)據(jù)(表1),其中新方法中混勻樣品時(shí)間、水浴時(shí)間溶解消耗、轉(zhuǎn)移沉淀消耗時(shí)間都明顯減少很多。

        根據(jù)表1 可以看出:進(jìn)行消化前處理樣品消耗總時(shí)間新方法明顯低于國標(biāo)方法。

        不同人員間對比

        分別取3 個不同的酪蛋白樣品,不同檢測人員在同一檢測條件下,分別對不同樣品進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果的相對偏差均小于國標(biāo)要求偏差范圍(10%),人員間對比結(jié)果偏差較小,準(zhǔn)確性可靠。

        重復(fù)性

        取同一個樣品進(jìn)行檢測,重復(fù)性檢測次數(shù)為10 次,結(jié)果分別是:84.5 84.9 84.7 85.3 84.8 86.0 85.7 86.0 84.8 85.7(g/100g)相對偏差百分比分別是:0.08 0.04 0.06 0.010.05 0.09 0.06 0.09 0.05 0.06。精密度的檢測:取同一批次樣品結(jié)果,對酪蛋白進(jìn)行計(jì)算,精密度較高如(表1)。

        結(jié)論

        本文對膜法酪蛋白的檢測方法進(jìn)行了探討,依據(jù)對具體檢測步驟的分析,在明確清晰的操作過程中達(dá)到節(jié)省藥品、時(shí)間,為檢驗(yàn)者指明方向。此法涉及藥品種類少,檢測效率高,對于檢測收集沉淀量較小的樣品,有較高的優(yōu)勢。此法操作便捷,準(zhǔn)確度高,精密度好,在實(shí)際的檢測工作中,可以輔助使用。

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