漆愛明，李彥君，譚杰

（廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣東廣州 510300）

隨著香料工藝的不斷發(fā)展與成熟，香料的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，帶來(lái)的安全性問(wèn)題也越來(lái)越引起人們的重視。其中，過(guò)敏問(wèn)題尤為多見[1-4]，并占到全部化妝品過(guò)敏案例的1/3以上[5]。國(guó)際日用香料研究所（RIFM）、國(guó)際香精香料協(xié)會(huì)（IFRA）、歐盟、中國(guó)香料香精化妝品工業(yè)協(xié)會(huì)（CAFFCI）等監(jiān)管評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)及行業(yè)協(xié)會(huì)收集和分析日用香料的相關(guān)科學(xué)信息，并對(duì)其進(jìn)行研究與評(píng)估，建成全球范圍內(nèi)關(guān)于香料香精的毒理學(xué)數(shù)據(jù)及文獻(xiàn)最全面、最完整的數(shù)據(jù)庫(kù)并不斷完善相關(guān)法規(guī)[6]，從根源上約束香料市場(chǎng)的規(guī)范性。

2003年3月，歐盟委員會(huì)提出了26種致敏原在化妝品中的限量，規(guī)定這26種致敏原在停留型產(chǎn)品中濃度如果高于0.001%，沖洗類產(chǎn)品中濃度如果高于0.01%，必須在化妝品標(biāo)簽上標(biāo)注過(guò)敏原名稱[7]。而我國(guó)化妝品法規(guī)并不要求在化妝品標(biāo)簽上標(biāo)注日用香精全成分[8]。然而香精成分和影響相當(dāng)復(fù)雜，其帶給消費(fèi)者的健康危害也更應(yīng)重視起來(lái)。因此，亟需通過(guò)化妝品風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)為出臺(tái)相關(guān)法規(guī)或措施以控制化妝品香料香精的安全性提供重要的數(shù)據(jù)支持。

為了加強(qiáng)對(duì)化妝品中香料使用安全和質(zhì)量的管理，我國(guó)已建立了同時(shí)檢測(cè)19種致敏香料的推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T24800.10-2009《化妝品中十九種香料的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法》。本研究依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)方法進(jìn)行了進(jìn)一步優(yōu)化，應(yīng)用優(yōu)化后的方法對(duì)護(hù)膚類、香水類以及口紅3類化妝品進(jìn)行了風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)研究。

本研究應(yīng)用氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定126批次風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)化妝品中的19種香料成分，并將測(cè)定結(jié)果與產(chǎn)品標(biāo)簽標(biāo)識(shí)和批件配方成分進(jìn)行比對(duì)和統(tǒng)計(jì)分析，了解化妝品香料的使用和質(zhì)量安全情況，為化妝品市場(chǎng)監(jiān)管提供可靠的數(shù)據(jù)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

GCMS-TQ8050氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法儀，島津；XS205分析天平，Mettler Toledo；CPA224S電子分析天平，Sartorius；LG10-2.4A離心機(jī)，北京京立；LAB DANCER S25渦流振蕩器，IKA公司。

苯甲酸芐酯（99%）、水楊酸芐酯（99%）、羥基香草醛（98%）、香葉醇（99%）、金合歡醇（95%）、甲位戊基桂醛（97%）、丁香酚（99%）、丁苯基甲基丙醛（97%）、芳樟醇（98%）、2-辛炔酸甲酯（98%）、異丁香酚（97%）、香茅醇（97%），阿拉?。槐郊状迹?00%）、苧烯（95%）、α-己基肉桂醛（95%）、肉桂酸芐酯（99%），百靈威；戊基肉桂醇（97%），Dr.E；新鈴蘭醛（97%），BASF；α-異甲基紫羅蘭酮（96.5%），PRIVI；甲醇，色譜純，德國(guó)Merck公司。實(shí)驗(yàn)用水為一級(jí)水，電導(dǎo)率≤0.01 mS/m。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取苯甲酸芐酯、水楊酸芐酯、羥基香草醛、香葉醇、金合歡醇（法呢醇）、甲位戊基桂醛、丁香酚、丁苯基甲基丙醛（鈴蘭醛）、芳樟醇、2-辛炔酸甲酯（庚炔羥酸甲酯）、異丁香酚、香茅醇、苯甲醇（芐醇）、苧烯、α-己基肉桂醛、肉桂酸芐酯、戊基肉桂醇、羥異己基3-環(huán)己烯基甲醛（新鈴蘭醛）、α-異甲基紫羅蘭酮對(duì)照品各1.0 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，配制成19種香料濃度均為10.0 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再取19種香料混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用色譜純甲醇定容至刻度，搖勻，配制成19種香料混合使用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4 ℃避光保存，可使用3個(gè)月。

1.3 樣品前處理

1.3.1 固體、膏狀、乳液類樣品

稱取1.0 g（精確至0.001 g）試樣于10 mL具塞比色管中，加入甲醇至10 mL超聲提取15 min。取部分溶液轉(zhuǎn)移至10 mL具塞塑料離心管中，以不低于12 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min，上清液加入2 g無(wú)水硫酸納脫水，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為待測(cè)樣液。

1.3.2 液體類樣品

稱取1.0 g（精確至0.001 g）試樣于10 mL具塞比色管中，加入甲醇至10 mL，充分搖勻，加入2.0 g無(wú)水硫酸納脫水，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為待測(cè)樣液。

1.4 19種香料系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備

精密移取19種香料混合使用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5.00 mL、4.00 mL、2.00 mL、1.00 mL、0.50 mL、0.50 mL分別置于 10 mL、10 mL、10 mL、10 mL、10 mL、50 mL容量瓶中，用色譜純甲醇稀釋，定容，得標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 S5、S4、S3、S2、S1、S0，濃度分別為 50.0 mg/L、40.0 mg/L、20.0 mg/L、10.0 mg/L、5.0mg/L、1.0 mg/L。

1.5 GC-MS條件

色譜柱：Agilent DB-Wax（30 m×0.50 μm×0.32 μm）；色譜柱溫度：40 ℃保持2 min，然后以5 ℃/min升溫至240 ℃，保持18 min。

進(jìn)樣口溫度：250 ℃；色譜-質(zhì)譜接口溫度：280 ℃；載氣：氦氣，純度≥99.999%，流速2.0 mL/min；電子轟擊電離（EI）源，電子能量70 e V，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，溶劑延遲4.0 min；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比10∶1。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱及色譜條件的考察

圖1為總離子色譜圖，對(duì)色譜圖中19種香料的保留時(shí)間、定量離子、MRM離子和豐度比進(jìn)行總結(jié)，結(jié)果如表1所示。

圖1 總離子色譜圖

表1 19種香料的GC-MC譜圖信息總結(jié)表

2.2 方法的線性方程及檢出限

由表2可知，19種香料成分的線性良好，線性范圍都落在1.0～50.0 mg/L，線性相關(guān)系數(shù)R2為1，檢出限（LOD）在0.000 14%～0.000 16%，低于《化妝品中十九種香料的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法》GB/T24800.10-2009標(biāo)準(zhǔn)中的檢出限0.000 30%，定量下限（LOQ）為0.001 0%。

表2 19種香料的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)（R2）、檢出限和定量限

2.3 精密度和回收率

分別平行測(cè)定中濃度（標(biāo)準(zhǔn)系列溶液S3的濃度）6次作為本實(shí)驗(yàn)的精密度，由表3可知，本方法中濃度對(duì)應(yīng)的組分精密度良好。19種香料成分的精密度相對(duì)偏差均小于2.0%，該方法的穩(wěn)定性和重復(fù)性良好。

表3 19種香料成分中濃度的精密度（n=6）

分別對(duì)2種基質(zhì)（液體和乳狀）樣品分別進(jìn)行19種香料成分S2濃度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),回收率測(cè)定結(jié)果6份間的RSD值作為各不同化妝品基質(zhì)中含S2濃度待測(cè)成分時(shí)的測(cè)定重復(fù)性。基質(zhì)是液體時(shí)，19種成分的回收率范圍為83.2%～100.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的范圍為2.7%～4.8%；基質(zhì)是乳狀時(shí)，19種成分的回收率范圍為84.5%～106.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的范圍為2.0%～4.4%。由表4可知，乳狀基質(zhì)和液體基質(zhì)回收率效果基本一致。

表4 2種空白基質(zhì)（液體狀和乳狀）的加標(biāo)回收率及重復(fù)性（n=6）

2.3 化妝品中19種香料成分檢出情況

對(duì)126批（其中護(hù)膚類44批次、香水類11批次、口紅類71批次）化妝品進(jìn)行了分析檢測(cè)，結(jié)果如表3所示。從表3可以看出，香水類檢品目標(biāo)物芳樟醇、丁苯基甲基丙醛（鈴蘭醛）、苧烯、香茅醇、香葉醇、α-己基肉桂醛、α-異甲基紫羅蘭酮、羥基香草醛水楊酸芐酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、羥異己基 3-環(huán)己烯基甲醛（新鈴蘭醛）、金合歡醇（法呢醇）、丁香酚、甲位戊基桂醛、異丁香酚、2-辛炔酸甲酯、戊基肉桂醇和肉桂酸芐酯的檢出率分別為100.0%、90.9%、81.8%、81.8%、63.6%、54.5%、45.5%、45.5%、45.5%、36.4%、36.4%、27.3%、18.2%、9.1%、9.1%、9.1%、0、0和0。其中芳樟醇檢出率最高，為100.0%；檢出率最低的是2-辛炔酸甲酯、戊基肉桂醇和肉桂酸芐酯，檢出率為0，19種香料成分的檢出率為84.2%。護(hù)膚類檢品19種香料目標(biāo)物檢出率最高的是苧烯，樣品檢出率為68.2%；檢出率較高的是芳樟醇，樣品檢出率為56.8%，19種香料成分的檢出率為73.7%?？诩t類檢品19種香料成分檢出率最高的是芳樟醇，樣品檢出率為31.0%，檢出率較高的是香茅醇，樣品檢出率為22.5%，19種香料成分的檢出率為78.9%。從表5可以看出，香水類19種香料成分的檢出率相對(duì)護(hù)膚類和口紅類是最高的，檢出香料成分的含量相對(duì)護(hù)膚類和口紅類也是偏高的，這應(yīng)該是與香水的使用用途有很大關(guān)系。依據(jù)GB/T22731-2017日用香精標(biāo)準(zhǔn)來(lái)判斷126批產(chǎn)品是否合格，經(jīng)一一對(duì)照判定，所做檢品香料使用量是符合規(guī)定的，所有檢品檢測(cè)結(jié)果合格。

表5 實(shí)際樣品中19種香料成分的測(cè)定結(jié)果

2.4 口紅類測(cè)定結(jié)果與產(chǎn)品標(biāo)簽標(biāo)識(shí)和批件配方成分的比較研究

對(duì)71批次口紅類樣品的測(cè)定結(jié)果、樣品標(biāo)簽標(biāo)識(shí)和批件配方成分進(jìn)行了比較研究，結(jié)果如表6所示。其中標(biāo)簽標(biāo)識(shí)標(biāo)有含香料成分的共25批次，標(biāo)簽標(biāo)識(shí)標(biāo)有不含香料成分的共46批次；批件配方含香料成分的有21批次；批件配方不含香料成分的有21批次，批件配方未標(biāo)注是否含香料成分的29批次，批件配方未標(biāo)注在此次研究中作不判定處理。檢驗(yàn)結(jié)果與標(biāo)簽標(biāo)識(shí)、批件配方一致的檢品批次為44批，占總批次比率為62.0%；檢驗(yàn)結(jié)果與標(biāo)簽標(biāo)識(shí)、批件配方不一致的檢品批次為14批，占總批次比率為19.7%；檢驗(yàn)結(jié)果與標(biāo)簽標(biāo)識(shí)、批件配方不一致的檢品批次為14批，占總批次比率為19.7%；檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)簽標(biāo)識(shí)、批件配方未標(biāo)注的作為不判定批件共13批，批件比率為18.3%。

表6 71批次口紅樣品的實(shí)際檢驗(yàn)結(jié)果與標(biāo)簽標(biāo)識(shí)、批件配方的比較研究

續(xù)表6

3 結(jié)論

GC-MS同時(shí)測(cè)定化妝品中19種香料的檢出限為0.000 144%～0.000 159%，19種香料在相應(yīng)的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2均等于1.0；在乳狀和液體狀2種劑型化妝品加標(biāo)濃度下，液體狀加標(biāo)的回收率為83.2%～100.9%，乳狀加標(biāo)的回收率為84.5%～106.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5.0%。通過(guò)對(duì)126批次（護(hù)膚類44批次、香水類11批次、口紅類71批次）化妝品的檢驗(yàn)結(jié)果分析可以看出，香水類化妝品普遍含有香料成分，護(hù)膚類其次，口紅類化妝品香料的使用相對(duì)較少。其中芳樟醇在香水中使用率在此次檢驗(yàn)中100%的含蓋面，其次是丁苯基甲基丙醛的使用率也偏高，達(dá)到90.9%含蓋面?；瘖y品標(biāo)簽標(biāo)識(shí)與批件不一致接近20%，自制不判定檢品接近19%，因此應(yīng)加強(qiáng)標(biāo)簽標(biāo)識(shí)與批件不一致的監(jiān)管和自制化妝品產(chǎn)品標(biāo)簽標(biāo)識(shí)的規(guī)范化。隨著香料行業(yè)的不斷發(fā)展，香料在化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用種類也越來(lái)越多，香料的市場(chǎng)監(jiān)督檢驗(yàn)方法也需與時(shí)俱進(jìn)。