張遠(yuǎn)華，羅瑜

(韶關(guān)市中醫(yī)院，廣東 韶關(guān) 512026)

0 引言

甘草于中醫(yī)用藥應(yīng)用甚廣，用藥可達(dá)益氣補(bǔ)中、解表散寒、緩急止痛、解毒瀉火之效果。但臨床多將其炮制，避免生用，以弱化其偏涼性質(zhì)[1]。但從傳統(tǒng)炮制方式上看，炮制成品較易炒至氣味焦、生熟不均的現(xiàn)象，且炒制過(guò)程中，易因粘鍋產(chǎn)生焦屑、焦斑，同時(shí)不易控制水分，成色不佳，成品含水量過(guò)高，難保管，易長(zhǎng)霉，影響中藥材質(zhì)量。故臨床急需探尋一條具備穩(wěn)定性、可靠性的炮制方法，提升炮制成功率?；诖?，本文將對(duì)不同條件下蜜炙甘草炮制樣品進(jìn)行研究，對(duì)不同樣本中甘草酸、甘草苷含量使用高效液相測(cè)定法(HPLC)測(cè)定，并引入回歸方程的形式，優(yōu)選出蜜炙甘草炮制最佳工藝，旨在提升蜜炙甘草炮制質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

本研究中所用儀器詳細(xì)為①LC-2010HT型高效液相色譜儀(日本島津有限公司)；②L-3520二極管陣列檢測(cè)器(深圳普源精電科技有限公司)；③Mettler Toledo MS204TS電子分析天平(美國(guó)梅特勒-托利多集團(tuán))；④JM-05D-40超聲波清洗器(深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司)；⑤Waeters empower2色譜工作站；⑥九陽(yáng)C30-LC630型電磁爐；⑦DGF-4BS電熱恒溫干燥箱(力辰科技有限公司)。

1.2 處方

圓厚片生甘草：(馮了性(佛山)藥材飲片有限公司)；生蜜或未制過(guò)的蜂蜜(上海冠生園蜂制品有限公司)；溫開(kāi)水；色譜乙腈(美國(guó)Fisher有限公司)；磷酸(安縣川磷試劑有限公司)。

1.3 炮制工藝

①甘草烘烤：取甘草片于電熱恒溫干燥箱中，80攝氏度，干燥完成后篩選干凈備用；②煉蜜：取未煉制蜂蜜加熱容器中，容器加水，待其達(dá)到100攝氏度后，將浮沫濾除；③煉制嫩蜜：煉制出現(xiàn)魚(yú)眼泡時(shí)即可。完成后晾涼，過(guò)60目篩，備用；④拌蜜(潤(rùn)甘草)：取煉蜜加溫開(kāi)水后拌勻淋入凈甘草片中，隨后潤(rùn)悶。拌勻標(biāo)準(zhǔn)為：甘草片完全被嫩蜜滲透；⑤炒制：取甘草片適量于炒鍋中翻炒，炒成標(biāo)準(zhǔn)為甘草片表面呈黃色或深黃色，且不粘手，目視與清水拌潤(rùn)的甘草片狀態(tài)相同即可；⑥烘焙：取已蜜炙的甘草片于電熱恒溫干燥箱中；干燥完成后篩選干凈待分裝；⑦分裝：每袋5kg，完成制備。

2 含量測(cè)定

2.1 影響炮制樣品質(zhì)量均勻因素水平設(shè)計(jì)表

查閱有關(guān)文獻(xiàn)表明，影響蜜炙甘草炮制樣品質(zhì)量的因素包含煉蜜與溫開(kāi)水的比例(X1)、甘草片的潤(rùn)悶時(shí)間(X2)、炒制時(shí)間(X3)、炒制溫度(X4)有一定影響?，F(xiàn)將上4因素綜合，設(shè)計(jì)因素水平表，見(jiàn)表1。

表1 影響炮制樣品質(zhì)量均勻因素水平設(shè)計(jì)表

2.2 炙甘草中水溶性成分測(cè)定色譜條件

在含量測(cè)定的過(guò)程中，其色譜條件如下：

色譜柱：Alltima C18(4.6mm×250mm，5.00μm)；

流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸水；

梯度洗脫條件：0min-30%乙腈、70%(0.1%磷酸水)

20min-55%乙腈、45%(0.1%磷酸水)

柱溫度：30攝氏度

流速：1.00mL/min；

波長(zhǎng)：254nm

2.3 炮制樣品水溶物溶出含量檢測(cè)

使用電子天平將7組炮制樣品各取4g，設(shè)置7組實(shí)驗(yàn)，將檢測(cè)樣品置于三角燒杯內(nèi)，加入40mL蒸餾水超聲溶解60min即可。將溶解所得上清液置于對(duì)應(yīng)燒杯內(nèi)；重復(fù)上述檢驗(yàn)步驟后抽濾，分別檢測(cè)抽濾所得上清液逐一蒸干、稱(chēng)重，計(jì)算炮制樣品水溶物溶出含量(%)。

2.4 數(shù)據(jù)處理

收集檢驗(yàn)所得甘草酸含量、水溶出物溶出含量。數(shù)據(jù)及其賦值標(biāo)準(zhǔn)：以《中國(guó)藥典》2000年版第1部為依據(jù)，甘草酸含量每4%計(jì)20分，水溶物溶出含量每50%計(jì)20分。借助PEMS3.1軟件獲取多元一次回歸方程，根據(jù)系數(shù)值及P值確定工藝優(yōu)化項(xiàng)目。

2.5 工藝穩(wěn)定性驗(yàn)證

取適量甘草飲片，按最優(yōu)工藝炮制。處理方式同2.3、2.4；獲取水溶物溶出含量及甘草中各化學(xué)物質(zhì)含量數(shù)據(jù)，并按2.4中數(shù)據(jù)及其賦值標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，獲取實(shí)測(cè)值。對(duì)比預(yù)期試驗(yàn)綜合指標(biāo)與實(shí)測(cè)值差異，進(jìn)行炮制工藝穩(wěn)定性驗(yàn)證。

3 結(jié)果

3.1 色譜圖

圖1 灸甘草標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 驗(yàn)證品標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

3.2 炮制樣品均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

表2 蜜炙甘草樣品均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

3.3 數(shù)據(jù)分析

借助PEMS3.1軟件獲取多元一次回歸方程Y=5.20x1-0.66x3-0.19x4+69.38，其中，R=0.95，P=0.049，其中P＜0.05，回歸方程有意義，數(shù)據(jù)差異顯著。因此，可將煉蜜與溫開(kāi)水的比例、甘草片的潤(rùn)悶時(shí)間、炒制時(shí)間、炒制溫度認(rèn)為是影響綜合評(píng)分的相關(guān)指標(biāo)。在水平1-0.05=0.95區(qū)間內(nèi)是可信的。

將數(shù)據(jù)帶入計(jì)算可知，當(dāng)煉蜜與溫開(kāi)水的比例為1：7時(shí)，炒制溫度為240攝氏度時(shí)，炒制時(shí)間為21分鐘時(shí)，回歸方程解最大。在預(yù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)甘草無(wú)法耐受240攝氏度高溫，顏色、性狀、氣味均發(fā)生改變。考慮此因素后，經(jīng)直觀分析再次進(jìn)行數(shù)據(jù)篩選表明，煉蜜與溫開(kāi)水的比例為1：7、炒制溫度70攝氏度、炒制時(shí)間13分鐘甘草性狀、顏色性狀、氣味水平較佳。將數(shù)據(jù)帶入回歸方程計(jì)算可得Y=48.11，按最優(yōu)解參數(shù)獲取3份炮制樣品，將數(shù)據(jù)帶入回歸方程實(shí)測(cè)平均值為48.29。其中內(nèi)部參數(shù)n=3，RSD%=3.24%。

4 討論

甘草性甘，因此可與諸藥相調(diào)和，中醫(yī)學(xué)界將其稱(chēng)之為“國(guó)老”。但在實(shí)際應(yīng)用中，對(duì)甘草加以炒制，制作煎劑、開(kāi)水浸泡或口服均可發(fā)揮不同藥效。其中炒制中的灸者，主要指蜜炙入藥，臨床上有多種炮制方式，不同的炮制方式，主治病癥也有所差別。這一點(diǎn)在中國(guó)古代醫(yī)學(xué)典籍《本經(jīng)疏經(jīng)》所著：甘草之用炙、用生卻有不同。大率除邪氣、解毒生用皆可；止渴、補(bǔ)虛、緩中炙用皆可[2]。

蜜炙甘草，生甘草與蜂蜜比值為4：1，炒制金黃可得成品。若單獨(dú)將甘草予以炒制，則更偏重于清熱解毒之功效；若將甘草予以蜜炙處理，則更偏重止痛緩急、和胃以其之功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)分析表明，甘草具備多種藥物活性成分，諸如甘草多糖、甘草次酸、甘草甜素等，可起到抗變態(tài)反應(yīng)、抗炎的作用。另外，上述成分也可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，具備較強(qiáng)的止痛作用即抗腫瘤作用。中醫(yī)學(xué)研究表明，國(guó)內(nèi)相關(guān)人員將曾進(jìn)行過(guò)相關(guān)研究，相較于生甘草，炙甘草在止痛作用及抗驚厥方面優(yōu)于生甘草；動(dòng)物藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)也表明，其具備抗大鼠心理失常的作用，機(jī)理是甘草次酸可對(duì)抗氯化鋇[3]。而生甘草經(jīng)蜜炙后可降低內(nèi)部甘草酸含量，于患者用藥可將低假醛固酮癥發(fā)生率；同時(shí)能夠可提升甘草甙含量，其藥理作用為健脾補(bǔ)氣。

傳統(tǒng)炮制方式下，多為蜂蜜水浸潤(rùn)后即進(jìn)行蜜炙甘草炮制，但在炒炙后所獲得的成品，雖在療效上可達(dá)到使用要求，但受限于炒制時(shí)溫度無(wú)法調(diào)控，故在飲片炒制后多會(huì)出現(xiàn)甘草燒焦的現(xiàn)象，表面顏色表現(xiàn)為淡黃褐色或黑褐色，從而影響療效。因此臨床繼續(xù)探尋一條優(yōu)化炮制方式，從而驗(yàn)證不同因素對(duì)炮制質(zhì)量的影響。近年來(lái)，均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)法在藥物制備中，特別是在復(fù)方或單味中藥提取工藝中有著較為廣泛的應(yīng)用，因其能夠在多因素條件下，有效減少試驗(yàn)次數(shù)。但針對(duì)炮制工藝方面的均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)法開(kāi)展仍較少，為此筆者從影響蜜炙甘草炮制樣品質(zhì)量的因素出發(fā)，通過(guò)引入均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)、綜合評(píng)分來(lái)進(jìn)一步篩選優(yōu)化炮制方案。

通過(guò)將綜合評(píng)分帶入統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中可得回歸方程，分析各項(xiàng)自變量系數(shù)值，其中X2系數(shù)為0，證明甘草片的潤(rùn)悶時(shí)間對(duì)綜合評(píng)分無(wú)影響，通過(guò)分析自變量前系數(shù)大小，可得出影響因素大小排列為X1＞X3＞X4，當(dāng)X2為0時(shí)，對(duì)結(jié)果無(wú)影響。因此本研究最終可得結(jié)論影響因素排序?yàn)闊捗叟c溫開(kāi)水比例＞炒制時(shí)間＞炒制溫度。

若以工藝流程優(yōu)化角度分析，改進(jìn)后的蜜炙甘草炮制優(yōu)點(diǎn)有如下四點(diǎn)：首先，顏色性狀佳：方式中的煉蜜、拌蜜、蒸煮方式可有助蜜汁充分滲入，可進(jìn)一步優(yōu)化甘草成色，同時(shí)由于炒制溫度的合理調(diào)控，能進(jìn)一步控制炒制質(zhì)量，提升甘草炒制光澤度；其次，可改善炒制氣味；在本方式炮制后，能最大限度提升蜂蜜與甘草轉(zhuǎn)化水平，故可提升炒制氣味水平；再次，可增進(jìn)中藥效果。在最優(yōu)條件下，可最大化提升蜜炙質(zhì)量，將生甘草偏涼性質(zhì)予以充分轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化至甘溫，進(jìn)一步強(qiáng)化藥物療效；最后，可提升藥物保管水平：此方式下炒制出的蜜炙甘草質(zhì)量較佳，故有利于藥材的保存；在含水量上，此炒制方法能保持最佳的干燥水平，分裝時(shí)較為方便；蜂蜜的充分滲透可降低表面黏度，提升保管質(zhì)量。

綜上，改進(jìn)后的蜜炙甘草炮制方法，相較于傳統(tǒng)炮制方法在儲(chǔ)存方式、炒制溫度、儲(chǔ)存時(shí)間均高度可控，且實(shí)用性強(qiáng)，對(duì)保證炙甘草的質(zhì)量有一定的意義，可推廣。