古蘭·托合提木拉提，葉爾努爾·吐蘇甫汗，馬玉蘭，瑪依努爾·尼亞孜

（1.新疆自治區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)科，新疆 烏魯木齊830001；2.新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院 影像中心，新疆 烏魯木齊830063）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）在育齡婦女中發(fā)病率為5%～10%，是引起不孕、月經(jīng)異常等的主要原因[1]。由于PCOS 內(nèi)分泌異常涉及卵巢、下丘腦、腎上腺、垂體等多個(gè)器官，其生化改變、發(fā)病機(jī)制、臨床表現(xiàn)異質(zhì)性較高，確切病因尚未闡明[2]。最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，維吾爾族女性患者BMI 較高、體內(nèi)具有高雄激素的表現(xiàn)者，后代更易患PCOS，提示肥胖與PCOS 發(fā)病率有關(guān)，但其發(fā)病機(jī)制尚不明確[3-4]。目前關(guān)于PCOS的研究較多，但主要基于在不孕門(mén)診就診的育齡期女性，對(duì)青春期患者關(guān)注不足，且受倫理的限制，對(duì)宮內(nèi)環(huán)境因素致病作用的報(bào)道較少。本研究探討異常糖、脂代謝對(duì)子代小鼠卵巢功能與PCOS 發(fā)病率的機(jī)制與相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 主要試劑、儀器

Trizol （北京艾德萊生物科技有限公司），M-MLV Reverse Transcriptase （RNase H）、5×RT Reaction Buffer、ddH2O （DNase/RNase Free）（美國(guó)Genecopoeia 公司），RNase Inhibitor、dNTP Mixture（北京全氏金生物技術(shù)有限公司），50×ROX Reference Dye、2×All-in-one tm qPCR Mix （美國(guó)VAZYME 公司），Ex Taq TM、DL2000 DNA Marker（日本TaKaRa 株式會(huì)社），引物由北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司合成；760型全自動(dòng)生化檢測(cè)儀（日本日立株式會(huì)社），快速血糖儀（瑞士羅氏公司），離心機(jī)（美國(guó)Eppendorf 公司），電子秤（上海呈豐衡器有限公司），RM 2016 輪轉(zhuǎn)式病理切片機(jī)（德國(guó)Leica 公司），切片刀（日本羽毛公司，R35一次性刀片），JK-6 生物組織攤烤片機(jī)（武漢俊杰電子有限公司），載玻片及蓋玻片（江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司），BX53 型生物顯微鏡（日本奧林巴斯株式會(huì)社），QuantStudio 6 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀（美國(guó)ABI 公司），分光光度計(jì)（上海舜宇恒科學(xué)儀器有限公司），電熱恒溫水浴鍋（北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表有限公司），微波爐（韓國(guó)LG 公司），AJY-0501 型超級(jí)純水儀（美國(guó)艾科浦公司），pH 計(jì)（德國(guó)Metter-Toledo GmbH 公司），電子天平稱(chēng)（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），紫外分析儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4 周齡SD 鼠（新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心）[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（新）20130001]。SD鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，按雌雄3∶1 合籠，環(huán)境溫度20～23℃,濕度40%～60%，自由進(jìn)水，每日光照12 h，噪音＜60 dB。次日清晨觀察各籠雌鼠有無(wú)陰道栓脫落，如同一載玻片有3 處不同視野發(fā)現(xiàn)精子計(jì)為陽(yáng)性，當(dāng)日記為妊娠第1 天，未妊娠者繼續(xù)合籠飼養(yǎng)，合籠2 周未妊娠者放棄。期間給予的普通飼料購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，熱量分配：糖類(lèi)62%、脂肪13%、蛋白質(zhì)25%。

1.3 分組

雌鼠受孕后隨機(jī)分為宮內(nèi)高脂肪膳食組（HFI組）、宮內(nèi)及哺乳期高脂肪膳食組（HFII 組）和正常膳食組（NC 組），每組15 只。NC 組全程給予普通飼料，HFI 組妊娠期給予高脂肪飼料，HFII 組妊娠期、哺乳期均給予高脂肪飼料。飼料均購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，普通飼料的熱量分配：糖類(lèi)62%、脂肪13%、蛋白質(zhì)25%，常溫保存。高脂肪飼料的熱量分配：糖類(lèi)20%、脂肪60%、蛋白質(zhì)20%，置入-20℃冰箱保存。

1.4 方法

每天觀察雌鼠妊娠及產(chǎn)子情況。出生后每周測(cè)仔的體重，第3 周時(shí)離乳并雌雄分籠，棄雄仔。每籠養(yǎng)5～6 只，第4 周起檢查雌仔陰道細(xì)胞涂片，1 次/d，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。操作方法：用沾有生理鹽水的棉簽，于每日早晨輕輕插入大鼠陰道后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)，獲取黏液標(biāo)本，細(xì)胞涂片，自然干燥。使用瑞士姬姆薩染色，鏡下觀察。動(dòng)情前期：可見(jiàn)大量圓形有核上皮細(xì)胞，少量角化上皮細(xì)胞；動(dòng)情期：可見(jiàn)大量角化上皮細(xì)胞，少量圓形有核上皮細(xì)胞；動(dòng)情后期：可見(jiàn)角化上皮細(xì)胞及大量白細(xì)胞。動(dòng)情間期：可見(jiàn)少量白細(xì)胞，有核扁平上皮細(xì)胞及少量黏液。

1.4.1 空腹血糖、血清胰島素測(cè)定各組雌仔6 周時(shí)夜間禁食12 h，次日行尾部取血1 ml，即刻采用血糖儀及配套試紙測(cè)定靜脈全血葡萄糖水平為空腹血糖（fasting blood glucose concentration, FBG）。取血后4℃下靜置1 h，以5 000 r/min 離心5 min，取上清，-80℃冷藏，采用雙抗體夾心ELISA 法測(cè)血清空腹胰島素水平（fasting serum insulin concentration, FINS）。計(jì)算胰島素敏感指數(shù)（insulin sensitivity index, ISI）：ISI=1/（FBG×FINS），胰島素抵抗指數(shù)（homeostasis model assessment -insulin resistance index, HOMA-IR）=（FBG×FINS）/22.5。采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定甘油三酯（Triglyceride,TG）水平。

進(jìn)行靜脈糖耐量試驗(yàn)（IPGTT）和胰島素釋放試驗(yàn)（IRT），用20%葡萄糖按2 g/kg 腹腔注射，葡萄糖負(fù)荷15 min、30 min、60 min 及120 min 后，取尾靜脈血0.5 ml，即刻測(cè)血糖、胰島素水平。

1.4.2 動(dòng)物處理、生殖內(nèi)分泌水平檢測(cè)10%水合氯醛（4 ml/kg）腹腔注射麻醉后，開(kāi)腹，迅速取卵巢組織，用電子天平秤測(cè)量卵巢濕重，并計(jì)算臟器系數(shù)，臟器系數(shù)= 臟器的重量（g）/體 重（100 g），再置于4%多聚甲醛中固定。常規(guī)脫水，石蠟包埋，5μm 厚度切片，常規(guī)脫蠟，水化，蘇木精5 min，伊紅襯染2 min，脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察各組大鼠的卵巢形態(tài)學(xué)變化。

暴露胸部，注射器在心臟取血，分離血清，置于-20℃保存待測(cè)。采用放射免疫法測(cè)定血清雌激素（E2）、孕激素（P）、促黃體生成素（LH）、睪酮（T）水平。

1.4.3 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)脂肪組織雄激素轉(zhuǎn)化酶的表達(dá)取皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪組織，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)雄激素轉(zhuǎn)化酶3β 羥類(lèi)固醇脫氫酶1（3β-HSD1）、3β 羥類(lèi)固醇脫氫酶2（3β-HSD2）、3β 羥類(lèi)固醇脫氫酶5（3β-HSD5）、17β 羥類(lèi)固醇脫氫酶1（17β-HSD1）、5ɑ 還原酶1（5ɑ-R1）mRNA 相對(duì)表達(dá)量。

取-80℃冰箱保存的新鮮冷凍組織，重量約為100 mg，加入1 ml Trizol 試劑，用勻漿器研磨成漿，移至無(wú)RNase 的1.5 ml EP 管中，裂解10 min。加入200 μl 氯仿，劇烈顛倒混勻數(shù)次，室溫放置5 min。4℃、 12 000 r/min 離心15 min， 可見(jiàn)分成上（RNA）、中（蛋白）、下（DNA）三相。轉(zhuǎn)移上層水相（約400 μl）于另一新1.5 ml EP 管中，加入400 μl 異丙醇，混勻后室溫靜置10 min。4℃、12 000 r/min 離心10 min，管底可見(jiàn)白色的RNA 沉淀。棄上清，加入無(wú)RNase 的75%乙醇1 ml，渦旋混勻后，4℃、10 000 r/min 離心5 min，并重復(fù)1次。棄上清，空氣中干燥RNA 沉淀5～10 min，將沉淀溶于20 μl 的DEPC 水中。取溶解后的RNA 2 μl 用微量分光光度計(jì)測(cè)定OD260、OD280，計(jì)算OD260/OD280 值和RNA的純度、濃度。根據(jù)OD260/OD280 估測(cè)RNA 質(zhì)量，比值在1.8～2.0 滿足實(shí)驗(yàn)要求。將總RNA 放于-80℃冰箱內(nèi)保存以備用。 qRT-PCR 引物序列見(jiàn)表1， 取上述RNA 3.199 μg，加入寡聚核苷酸引物2 μl、濃度均為2.5 mmol/L 的脫氧核糖核苷三磷酸混合物4 μl、PCR 緩沖液4 μl、逆轉(zhuǎn)錄酶1 μl、RNA 抑 制 劑0.5 μl，加入無(wú)RNA 酶水至20 μl 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，反應(yīng)條件：25℃溫育5 min，50℃溫育15 min，85℃加熱5 min，4℃冷卻10 min。取上述cDNA 4 μl，加入上下游引物各0.4 μl、SYBR Green（熒光插入染料）/熒光素qPCR 預(yù)混液10 μl、水5.2 μl，進(jìn)行qRT-PCR，檢測(cè)各目的基因相對(duì)表達(dá)量。反應(yīng)條件：50℃預(yù)變性2 min，95℃變性10 min，95℃退火30 s，60℃延伸30 s，共40 個(gè)循環(huán)。繪制熔解曲線，最終數(shù)據(jù)以2-△△Ct法分析。

表1 引物序列

1.5 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)雌鼠一般情況，比較各組子代小鼠各階段陰道涂片在性周期中占比，比較FBG、FINS、ISI、HOMA-IR、TG 水平，比較IPGTT、IRT 試驗(yàn)結(jié)果，比較卵巢形態(tài)與臟器指數(shù)，比較動(dòng)情間期生殖內(nèi)分泌，分析發(fā)生PCOS 的影響因素。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用單因素方差分析或重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，進(jìn)一步的兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)；影響因素的分析采用多因素Logistic回歸模型。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 雌鼠一般情況

4 周齡SD 雌鼠54 只及雄鼠18 只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，45 只雌鼠成功妊娠。HFI 組共產(chǎn)雌仔42 只，HFII 組共產(chǎn)雌仔48 只，NC 組共產(chǎn)雌仔50 只，最終各組均隨機(jī)納入15 只雌仔作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。各組小鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均發(fā)育良好，體毛潤(rùn)澤，行為無(wú)明顯差異，反應(yīng)靈活。

2.2 各組雌仔陰道涂片在性周期中占比比較

各組雌仔動(dòng)情前期、動(dòng)情期、動(dòng)情間期占比比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），HFI 組、HFII 組動(dòng)情期較NC 組長(zhǎng)（P＜0.05），HFII 組較HFI組長(zhǎng)（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組子代小鼠陰道涂片在性周期中占比比較 （n=15，±s）

表2 各組子代小鼠陰道涂片在性周期中占比比較 （n=15，±s）

注：①與NC組比較，P ＜0.05；②與HFI組比較，P ＜0.05。

組別動(dòng)情間期動(dòng)情前期動(dòng)情期HFI組HFII組NC組F 值0.42±0.02 0.33±0.01①0.47±0.0 251.667 0.18±0.01①0.14±0.01①②0.25±0.02 232.500 0.40±0.05①0.53±0.06①②0.28±0.04 91.364 P 值①②2 0.000 0.000 0.000

2.3 各組雌仔FBG、FINS、ISI、HOMA-IR及TG比較

各組雌仔FBG、FINS、ISI、HOMA-IR 及TG 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），HFI 組、HFII 組FBG、FINS、HOMA-IR、TG 水平較NC 組高，ISI 較NC 組低（P＜0.05）；HFII 組FBG、FINS、HOMAIR、TG 水平較HFI 組高，ISI 較HFI 組低（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組雌仔FBG、FINS、ISI、HOMA-IR及TG比較 （n=15，±s）

表3 各組雌仔FBG、FINS、ISI、HOMA-IR及TG比較 （n=15，±s）

注：①與NC組比較，P ＜0.05；②與HFI組比較，P ＜0.05。

TG/（mmol/L）組別FBG/（mmol/L）FINS/（mIU/L）ISI HOMA-IR 1.09±0.23①1.62±0.35①②0.70±0.12 50.556 0.000 HFI組HFII組NC組F 值P 值4.61±0.41①6.41±0.46①②3.79±0.36 158.700 0.000 20.45±2.02①23.91±2.15①②18.86±1.64 26.335 0.000 0.011±0.001①0.007±0.001①②0.014±0.001 185.000 0.000 4.19±0.04①6.81±0.04①②3.18±0.03 38526.95 0.000

2.4 各組雌仔IPGTT 不同時(shí)間點(diǎn)血糖、胰島素比較

各組雌仔IPGTT 15 min、 30 min、 60 min 和120 min 的血糖、胰島素比較，經(jīng)重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果：①不同時(shí)間點(diǎn)間血糖、胰島素有差異（F=67.661 和10.505，均P=0.000）；②各組血糖、胰島素有差異（F=84.139 和16.942，均P=0.000）。③各組血糖、胰島素變化趨勢(shì)有差異（F=51.333 和15.264，均P=0.000）。見(jiàn)表4、5 和圖1、2。

表4 各組雌仔不同時(shí)間點(diǎn)血糖比較 （n=15，mmol/L，±s）

表4 各組雌仔不同時(shí)間點(diǎn)血糖比較 （n=15，mmol/L，±s）

組別15 min 30 min 60 min 120 min HFI組HFII組NC組11.96±1.23 14.94±1.42 9.89±0.87 9.46±0.86 12.01±1.28 7.41±0.68 7.85±0.74 10.01±1.30 4.88±0.90 5.31±0.70 7.51±1.05 4.38±0.82

表5 各組雌仔不同時(shí)間點(diǎn)胰島素比較 （n=15，mIU/L，±s）

表5 各組雌仔不同時(shí)間點(diǎn)胰島素比較 （n=15，mIU/L，±s）

組別15 min 30 min 60 min 120 min HFI組HFII組NC組22.17±2.15 21.34±1.98 18.86±2.04 38.79±2.67 43.86±3.39 30.55±3.42 28.44±1.74 31.39±2.85 25.81±3.09 22.79±1.62 24.13±2.13 20.06±2.35

2.5 各組雌仔卵巢形態(tài)

NC 組卵巢組織形態(tài)、卵泡正常；HFI 組、HFII 組均可見(jiàn)卵巢組織形態(tài)學(xué)出現(xiàn)異常變化，白膜增厚，黃體減少，多個(gè)不同發(fā)育階段的卵泡及囊性卵泡。NC 組雌仔卵巢臟器系數(shù)為（1.58±0.13）×10-3，HFI 組為（2.40±0.14）×10-3，HFII組為（3.34±0.16）×10-3，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=562.029，P=0.000），HFI 組、HFII 組較NC 組大， 且HFII 較HFI組大（P＜0.05）。見(jiàn)圖3。

圖1 各組雌仔不同時(shí)間點(diǎn)血糖變化趨勢(shì)

圖2 各組雌仔不同時(shí)間點(diǎn)胰島素變化趨勢(shì)

2.6 各組雌仔動(dòng)情間期生殖內(nèi)分泌水平比較

各組雌仔血清E2、LH 及T 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），HFI 組、HFII 組血清E2、LH 較NC 組低，血清T 較NC 組高（P＜0.05），HFII 組血清E2、LH 較HFI 組低，血清T 較HFI 組高（P＜0.05）。各組雌仔血清P 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表6。

2.7 各組雌仔脂肪組織雄激素轉(zhuǎn)化酶水平比較

各組雌仔3β-HSD1、3β-HSD2、3β-HSD5、17β-HSD1 及5ɑ-R1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），HFI 組、HFII 組較NC 組高（P＜0.05），HFII 組較HFI 組高（P＜0.05）。見(jiàn)表7。

2.8 PCOS影響因素的多因素Logistic分析結(jié)果

以是否發(fā)生PCOS 作為因變量，以FBG、FINS、ISI、HOMA-IR、TG、E2、LH、T 作為自變量，進(jìn)行多因素一般Logistic 回歸分析。結(jié)果顯示：E2 水平是PCOS 的保護(hù)因素（P＜0.05），F(xiàn)BG、TG 及T 水平是PCOS的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見(jiàn)表8。

表6 各組雌仔動(dòng)情間期生殖內(nèi)分泌水平比較 （n=15，±s）

表6 各組雌仔動(dòng)情間期生殖內(nèi)分泌水平比較 （n=15，±s）

注：①與NC組比較，P ＜0.05；②與HFI組比較，P ＜0.05。

組別T/（ng/ml）E2/（pmol/L）P/（nmol/L）LH/（u/L）HFI組HFII組NC組F 值P 值7.98±0.48①9.98±0.60①②5.85±0.54 217.634 0.000 19.77±5.26①15.83±4.37①②26.47±4.19 20.245 0.000 415.29±18.73 420.03±22.06 418.55±20.45 0.211 0.811 2.02±0.44①1.49±0.51①②3.15±0.46 48.625 0.000

表7 各組雌仔脂肪組織雄激素轉(zhuǎn)化酶水平比較 （n=15，±s）

表7 各組雌仔脂肪組織雄激素轉(zhuǎn)化酶水平比較 （n=15，±s）

組別3β-HSD1 3β-HSD2 3β-HSD5 17β-HSD1 5ɑ-R1 HFI組HFII組NC組F值P值1.35±0.12 1.67±0.14 1.01±0.11 106.334 0.000 1.56±0.11 1.97±0.13 0.99±0.08 307.924 0.000 1.50±0.22 2.05±0.34 1.13±0.20 47.272 0.000 1.74±0.04 2.32±0.05 1.00±0.02 4377.33 0.000 1.61±0.11 2.21±0.10 1.03±0.04 861.013 0.000

表8 PCOS影響因素的多因素Logistic分析參數(shù)

3 討論

PCOS 不僅可造成不孕，亦會(huì)增加糖尿病、妊娠期糖尿病、心血管疾病、子宮內(nèi)膜癌等發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，因此研究其發(fā)病機(jī)制，對(duì)盡早發(fā)現(xiàn)、干預(yù)，并改善子代的代謝狀態(tài)，保障子代的生殖健康意義重大[5-6]。而復(fù)制符合本研究需要的動(dòng)物模型是決定本研究能否成功的關(guān)鍵問(wèn)題之一。前期的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，高脂肪飲食中的脂肪含量高，小鼠的攝食量不高，且胎仔的死產(chǎn)率高，不能有效地復(fù)制模型，因而在本次實(shí)驗(yàn)中，改進(jìn)了飲食結(jié)構(gòu)，提供脂肪配方比例為60%的高脂飼料，既能保證高脂肪成分含量，又改善攝入飼料的口感，并聯(lián)合具有國(guó)際AAALAC 認(rèn)證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的新疆醫(yī)科大學(xué)，解決了模型復(fù)制的困難，為實(shí)驗(yàn)順利實(shí)施提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

以往有研究指出，高脂飲食引起的PCOS 大鼠，血清FBG、FINS、HOMA-IR 高于正常大鼠[7]。XUE 等[8]對(duì)PCOS 大鼠應(yīng)用降糖藥物二甲雙胍，發(fā)現(xiàn)大鼠多囊、高胰島素血癥的癥狀得到改善，從側(cè)面反映FBG 與PCOS 發(fā)病有關(guān)。VONICA 等[9]納入了15 例患有PCOS 的白人婦女和15 例年齡匹配的白人健康婦女，使用超高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間電噴霧質(zhì)譜法進(jìn)行脂質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)高TG 是區(qū)分PCOS、健康女性的有效指標(biāo)，提示TG 亦與PCOS 有關(guān)。但母親攝食高脂飲食對(duì)子代糖、脂代謝及PCOS 發(fā)生的影響尚不明確。本研究發(fā)現(xiàn)NC組、HFI 組、HFII 組FBG、FINS、HOMA-IR、TG依次增高，ISI 依次降低，且與NC 組相比，IPGTT及IRT 試驗(yàn)后，HFI 組、HFII 組15 min、30 min 后血糖、胰島素較高，且血糖、胰島素高峰值增大，下降緩慢，曲線下面積較大，表明母親高脂飲食可影響雌性子代糖和脂代謝、胰島β 細(xì)胞的功能。ZHANG 等[10]研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期糖尿病大鼠的子代ISI 降低，HOMA-IR 增加。有觀點(diǎn)認(rèn)為，造成這一結(jié)果的原因是高脂飲食導(dǎo)致宮內(nèi)高糖環(huán)境損傷子代胰島細(xì)胞，加之子代出生后自身的葡萄糖水平對(duì)胰島細(xì)胞刺激不夠，致胰島細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育受限，從而影響糖、脂代謝[11-13]。亦有報(bào)道指出，宮內(nèi)高糖可影響后代基因甲基化、組蛋白翻譯和修飾，而基因甲基化、組蛋白翻譯和修飾是最基礎(chǔ)的基因表觀遺傳學(xué)修飾途徑，可保持染色體穩(wěn)定性，表觀遺傳修飾引起的“代謝性記憶”即使在后續(xù)血糖控制達(dá)標(biāo)后，仍持續(xù)啟動(dòng)，并介導(dǎo)核內(nèi)基因表達(dá)譜異常，從而從基因水平影響糖、脂代謝[14-16]。

同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)，HFI 組、HFII 組動(dòng)情期較NC 組長(zhǎng)，動(dòng)情前期、動(dòng)情間期較NC 組短，卵巢臟器系數(shù)、血清T 值較NC 組大，血清E2、LH 水平較NC 組低，提示糖、脂代謝異?？捎绊懧殉补δ?，這可能是其介導(dǎo)PCOS 發(fā)生的根本所在。ZHANG等[17]采用脫氫表雄酮注射方法復(fù)制PCOS 模型，發(fā)現(xiàn)加用45%和60%的高脂飲食均可導(dǎo)致雄激素過(guò)多、性周期不規(guī)則、多囊卵巢，表明高脂飲食可影響卵巢功能。PATEL 等[18]研究采用高脂飼料喂食青春期前雌性大鼠，發(fā)現(xiàn)大鼠糖耐量和FINS 升高，HE 染色可見(jiàn)囊性卵泡增多、顆粒細(xì)胞層減少、卵泡膜細(xì)胞層增厚等組織病理學(xué)改變，說(shuō)明青春期前開(kāi)始的高脂肪飲食會(huì)引起代謝紊亂和卵巢改變，與臨床觀察到的PCOS 患者相似，從側(cè)面支持本研究結(jié)論。卵巢功能異?？赏ㄟ^(guò)LH 等生殖內(nèi)分泌激素影響下丘腦-垂體-卵巢軸的正常功能，加重糖、脂代謝異常，糖、脂代謝異常又可影響卵巢功能，從而形成惡性循環(huán)，增加PCOS 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[19]。

PCOS 患者典型癥狀之一是高雄激素血癥，而機(jī)體雄激素表達(dá)受雄激素轉(zhuǎn)化酶的影響，但現(xiàn)階段關(guān)于PCOS 中雄激素轉(zhuǎn)化酶表達(dá)的研究較少。3β-HSD1、3β-HSD2、3β-HSD5、17β-HSD1 及5ɑ-R1 均為雄激素轉(zhuǎn)化酶，其中3β-HSD1、3β-HSD2、3β-HSD5 主要作用是催化脫氫表雄酮向雄烯二酮轉(zhuǎn)化，17β-HSD1 可催化雄烯二酮向睪酮轉(zhuǎn)化，5ɑ-R1 可催化睪酮向雙氫睪酮轉(zhuǎn)化[20]。張哲等[21]研究顯示，17β-HSD1 與E2、LH 的合成具有相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，NC 組、HFI 組和HFII 組3β-HSD1、3β-HSD2、3β-HSD5、17β-HSD1 及5ɑ-R1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量依次升高，提示異常糖、脂代謝可影響雄激素轉(zhuǎn)化酶的表達(dá)，這可能是其誘導(dǎo)PCOS 發(fā)生的一個(gè)機(jī)制。同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)，E2 是PCOS 的相關(guān)保護(hù)因素，F(xiàn)BG、TG、T 是PCOS的相關(guān)危險(xiǎn)因素，提示以上因素與PCOS 的發(fā)生有關(guān)。詹艷萍等[22]報(bào)道顯示，雌鼠妊娠期肥胖是子代成年期發(fā)生PCOS 的一個(gè)高風(fēng)險(xiǎn)因素，而肥胖可導(dǎo)致糖、脂代謝異常，論證了本研究結(jié)論。以往關(guān)于母代高脂肪暴露對(duì)子代糖、脂代謝、卵巢功能、PCOS 發(fā)病率的研究較少，且目前國(guó)內(nèi)PCOS 的研究主要基于不孕門(mén)診就診的育齡期女性，對(duì)青春期患者關(guān)注不足。本研究除觀察宮內(nèi)高脂肪飲食暴露外，還探討了哺乳期高脂肪飲食暴露對(duì)幼鼠的影響，可為幼年期干預(yù)、預(yù)防PCOS 提供循證支持，以便盡早發(fā)現(xiàn)、干預(yù)，可能會(huì)改善子代的代謝狀態(tài)，保護(hù)卵巢功能，保障子代的生殖健康。同時(shí)既往采用高脂肪飲食暴露復(fù)制動(dòng)物模型時(shí)，脂肪含量高，小鼠的攝食量不高，模型復(fù)制成功率低，增加了實(shí)驗(yàn)成本，本研究提供脂肪配方比例為60%的高脂飼料，有效解決了造模困難的問(wèn)題，可為成功復(fù)制動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提供參考。此外，本研究證實(shí)，糖、脂代謝異?？捎绊懶奂に剞D(zhuǎn)化酶的表達(dá)，佐證了這一結(jié)論的可靠性，為PCOS 靶向干預(yù)提供了有力的證據(jù)。

綜上所述，高脂肪飲食暴露可引起子代糖、脂代謝異常，并導(dǎo)致子代卵巢形態(tài)、功能發(fā)生改變，是子代發(fā)生PCOS 的相關(guān)危險(xiǎn)因素，其機(jī)制可能與調(diào)控雄激素轉(zhuǎn)化酶的表達(dá)有關(guān)。