青 嬌， 蔣海軍， 王旭明，， 唐刻意， 王 瓊， 劉少英， 陳順德*

（1.四川師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，四川 成都610066； 2.四川省林業(yè)科學(xué)研究院，四川 成都610081）

遠(yuǎn)東鼩鼱（Sorex isodon Turov，1924）屬于勞亞食蟲目（Eulipotyphla）鼩 鼱科（Soricidae）鼩 鼱 屬（Sorex），模式標(biāo)本產(chǎn)地在俄羅斯的索索夫卡河.該物種的分布范圍橫跨亞歐大陸，從斯堪的納維亞延伸到太平洋（堪察加半島、庫頁島和朝鮮半島），在我國僅分布于黑龍江省和內(nèi)蒙古自治區(qū)［1］.1978年，Corbet［2］根據(jù)其體型、毛色及頭骨形態(tài)等特征，認(rèn)為遠(yuǎn)東鼩鼱為陜西鼩鼱（Sorex sinalis）的同物異名.Hoffmann［3］發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)東鼩鼱體型較陜西鼩鼱小，顱骨更窄，吻更短，尾長占體長比例小，且兩者的發(fā)現(xiàn)地相距超過2 000 km，從而支持遠(yuǎn)東鼩鼱的物種地位.

2018年10月，運用陷阱法于遼寧省新賓縣（東經(jīng)125°24′24″，北緯41°36′11″，海拔537.52 m）捕獲15只鼩鼱，如圖1，其中，黑色三角形代表本次研究所用標(biāo)本發(fā)現(xiàn)的地點，I點代表黑龍江省漠河縣，H點代表新紀(jì)錄的遼寧省新賓縣，黑色圓點A-G點代表其他已知分布點.經(jīng)形態(tài)和分子鑒定，證實它們均為遠(yuǎn)東鼩鼱.這批標(biāo)本的頭骨、皮毛和組織樣品現(xiàn)保存于四川師范大學(xué)動物標(biāo)本室.另外，選取2號黑龍江漠河標(biāo)本用于遠(yuǎn)東鼩鼱皮毛變異研究，這2號標(biāo)本現(xiàn)館藏于四川省林業(yè)科學(xué)研究院.

圖1 遠(yuǎn)東鼩鼱在中國的分布圖Fig.1 Current distribution of the Sorex isodon in China

1 材料與方法

1.1 形態(tài)學(xué)測量方法 對野外采集到的鼩鼱標(biāo)本進(jìn)行外形測量.首先用電子天平（精確度為0.01 g）稱量標(biāo)本的體質(zhì)量，再用游標(biāo)卡尺（精確度為1 mm）測量標(biāo)本的體長、尾長.標(biāo)本帶回實驗室后，從15號標(biāo)本中選取5號完整的標(biāo)本（樣品原始編號 為SCNU01496、SCNU01552、SCNU01597、SCNU01599、SCNU01612）制成剝制標(biāo)本和頭骨標(biāo)本，用游標(biāo)卡尺（精確度為0.01 mm）進(jìn)行頭骨測量.本研究的測量方法主要參照文獻(xiàn)［4-6］，共測量9個頭骨數(shù)據(jù)，包括顱全長（Condylo-incisor length，CIL）、眶間寬（Interorbital breadth，IOB）、頭骨寬（Cranial breadth，CB）、顎骨寬（Maxillary width，MW）、顎骨-門齒間距（Palate-incisol length，PIL）、上齒列長（Upper tooth row length，UTRL）、第二上臼齒寬（M2to M2breadth，M2-M2）、下頜長（Mandible length，ML）、下齒列長（Lower tooth row length，LTRL）.

1.2 分子分析 本研究擴(kuò)增了這5號完整標(biāo)本的Cyt b基因序列（原始編號為SCNU01496、SCNU01552、SCNU01597、SCNU01599、SCNU01612，NCBI編號依次為MN877165-MN877169）以及2條黑龍江標(biāo)本的Cyt b基因序列（編號為SAF09899、SAF09923，NCBI編 號 依 次 為 MN877163、MN877164）.利用基因組DNA試劑盒提取樣品的總DNA，再根據(jù)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增樣品的Cyt b基因序列.PCR反應(yīng)體系為25μL：Tap PCR PreMix 12.5μL，引物各1μL，模板DNA 1μL，ddH2O加至25μL，此次所用引物為L14724＿h(yuǎn)k3和H15915＿h(yuǎn)k3［7］.擴(kuò)增程序為94℃預(yù)變性5 min；94℃變性40 s，49℃退火45 s，72℃延伸1.5 min，合計40個循環(huán)；72℃10 min；最后4℃保存［8-9］.PCR產(chǎn)物經(jīng)過電泳檢驗后交由成都擎科生物公司測序，測序結(jié)果在NCBI上進(jìn)行Nucleotide BLAST.

從Genbank上下載2條遠(yuǎn)東鼩鼱的Cyt b序列（AB028500為俄羅斯樣本、JX465364為內(nèi)蒙古自治區(qū)樣本），以及與其同屬的栗齒鼩鼱（Sorex daphaenodon）、扁顱鼩鼱（Sorex roboratus）Cyt b序列各4條，并選擇與鼩鼱屬親緣關(guān)系較近的甘肅川鼩（Blarinella griselda）Cyt b序列4條做為外群.利用JModelTest 2.1.3［10］對Cyt b基因進(jìn)行分子進(jìn)化模型檢驗，模型的適合度使用BIC信息標(biāo)準(zhǔn)（Bayesian information criterion）評估［11］，計算出的最佳進(jìn)化模型為HKY.用BEAST v1.6.1軟件［12］，根據(jù)貝葉斯法構(gòu)建系統(tǒng)樹，運行100 000 000代MCMC，每5 000代進(jìn)行一次抽樣.使用非相關(guān)的對數(shù)正態(tài)松散分子鐘模型（Relaxed uncorrelated lognormal clock model），每一次運算中均使用birth-death物種形成模型，并利用Tracer verson 1.5軟件［13］進(jìn)行統(tǒng)計，以確定所有參數(shù)都有大于200的有效統(tǒng)計樣本（Effective Sample Sizes，ESSs）.在BEAST軟件包中的TreeAnnotator version 1.8.2中生成最大譜系置信樹（Maximum clade credibility tree）.

2 結(jié)果

2.1 形態(tài)描述與體色變異 這5號標(biāo)本頭骨骨質(zhì)薄脆、顱骨寬、近圓形，相較同屬其他物種吻較短.它們的頭骨量度指標(biāo)值如下：顱全長（19.42±0.19）mm；顱寬（9.2±0.32）mm；眶間寬（3.80±0.54）mm；顎骨寬（4.98±0.33）mm；顎骨-門齒間距（8.80±0.44）mm；上齒列長（8.56±0.33）mm；第二上臼齒寬（4.85±0.75）mm；下頜長（12.2±0.13）mm；下齒列長（7.88±0.36）mm.齒式為1.5.1.3/1.1.1.3，牙齒尖銳部分染有栗色色素.上門齒較大，具有一大的前尖和較小的后尖，后尖大小接近于第二單尖齒，此外2顆門齒正面都有一個附齒尖，略低于著色線.上頜每側(cè)有5枚單尖齒，第一單尖齒到第五單尖齒逐漸減小.前臼齒1枚，臼齒3枚，第一臼齒到第三臼齒逐漸減小，其中第一臼齒和第二臼齒具有完整的W型齒冠結(jié)構(gòu).下頜有一枚下門齒、一枚單尖齒、一枚前臼齒以及3枚臼齒.下門齒刀狀且特別延長向前伸，有3個明顯的齒尖（如圖2）.標(biāo)本的皮毛及頭骨形態(tài)與遠(yuǎn)東鼩鼱的描述基本相符，初步證實為遠(yuǎn)東鼩鼱.

圖2 遠(yuǎn)東鼩鼱頭骨圖Fig.2 Cranium of Sorex isodon

5號標(biāo)本體型較大，頭體長（66.6±2.73）mm，體質(zhì)量（7.71±0.40）g，尾略長于頭體長之半，尾長（45.0±1.25）mm.眼小，耳廓藏于毛下.背覆細(xì)而密的軟毛，背部呈灰黑色，富有光澤，腹部毛色稍淺，背腹毛色在體側(cè)無明顯界線.與2009年在黑龍江省漠河縣采集的標(biāo)本相比，新賓標(biāo)本毛色整體偏黑灰色，漠河縣標(biāo)本毛色則偏黃褐色，兩者皮毛顏色差異明顯（如圖3）.

圖3 黑龍江省漠河地區(qū)（A-C）及遼寧省新賓地區(qū)（a-c）遠(yuǎn)東鼩鼱皮毛標(biāo)本Fig.3 Specimens of Sorex isodon from Mohe County，Heilongjiang Province（A-C）and Xinbin County，Liaoning Province（a-c）

2.2 基于Cyt b的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系 新擴(kuò)增的7條

Cyt b基因序列比對校正后，經(jīng)BLAST程序檢測，與遠(yuǎn)東鼩鼱（JX465364）的相似度均為98%以上.貝葉斯系統(tǒng)樹結(jié)果如圖4所示，其中，實心圓代表黑龍江標(biāo)本，實心三角形代表遼寧標(biāo)本，實心矩形代表俄羅斯標(biāo)本，空心圓代表內(nèi)蒙古自治區(qū)標(biāo)本.除了做為外群的甘肅川鼩外，鼩鼱屬的序列被分為3個分支.5個采自遼寧新賓的遠(yuǎn)東鼩鼱標(biāo)本及2個采自黑龍江漠河的遠(yuǎn)東鼩鼱標(biāo)本與網(wǎng)上下載的2條遠(yuǎn)東鼩鼱Cyt b序列構(gòu)成單系群，該結(jié)果支持采自遼寧的標(biāo)本為遠(yuǎn)東鼩鼱.

3 討論

本次在采集遠(yuǎn)東鼩鼱的采樣點共捕獲了66只中鼩鼱（Sorex caecutiens）、19只黑線姬鼠（Apodemus agrarius）、44只棕背 （Clethrionomys rufocanus）、21只大林姬鼠（Apodemus peninsulae）、11只山東小麝鼩（Crocidura shantungensis）、3只大麝鼩（Crocidura lasiura）、1只大鼩鼱（Sorex mirabilis）、1只大缺齒鼴（Mogera robusta），遠(yuǎn)東鼩鼱與上述物種存在同域分布.此前已知遠(yuǎn)東鼩鼱僅發(fā)現(xiàn)于我國黑龍江省和內(nèi)蒙古省東部［2，14］，而本次的研究結(jié)果擴(kuò)展了該物種的分布范圍，且屬于其在我國的最南分布.本次捕獲的遠(yuǎn)東鼩鼱的生境為落葉松林和草甸交界帶，該物種還分布在低地常綠林帶［1］和針闊混交林［14］.

圖4 基于Cyt b基因構(gòu)建的貝葉斯系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Bayesian phylogenetic tree based on Cyt b gene

本次研究發(fā)現(xiàn)采自遼寧新賓的遠(yuǎn)東鼩鼱與采自黑龍江漠河的標(biāo)本皮毛顏色明顯不同.有研究表明，降雨量對小型哺乳動物的皮毛顏色有影響：降水量多的地區(qū)，空氣潮濕，植被茂密，動物皮毛顏色更深［15］.根據(jù)黑龍江及遼寧省氣象志與中國氣象數(shù)據(jù)網(wǎng)（http：//data.cma.cn/）的數(shù)據(jù)，遼寧省全年平均氣溫和降雨量均較黑龍江省高.兩地遠(yuǎn)東鼩鼱的毛色差異可能與此有關(guān).

致謝 四川省林業(yè)科學(xué)研究院廖銳幫助采集黑龍江省漠河遠(yuǎn)東鼩鼱標(biāo)本，謹(jǐn)致謝意.