徐芳媛，許金森，潘曉華*，黃倩茹，萬 隆，羅 來，朱佳敏

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)針灸學(xué)院，福建 福州350122；2.福建省中醫(yī)藥科學(xué)院，福建 福州350003；3.福建省經(jīng)絡(luò)感傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州350003）

腦卒中為我國(guó)目前最常見的疾病之一，其臨床表現(xiàn)多以神經(jīng)感覺障礙、平衡能力減弱和記憶力減退為主［1-3］。目前對(duì)于腦卒中的治療無特效藥物，電針被廣泛應(yīng)用于腦卒中的治療，神庭、百會(huì)穴為臨床的經(jīng)驗(yàn)效穴，既往已有大量文獻(xiàn)證實(shí)其有效性［4-6］。但是電針治療改善腦卒中認(rèn)知功能的作用機(jī)制尚未明了，因此，本研究將通過電針神庭、百會(huì)穴對(duì)大腦中動(dòng)脈閉塞模型（MCAO）大鼠3個(gè)行為學(xué)指標(biāo)的影響，探討電針改善腦卒中患者認(rèn)知功能的療效，為其臨床進(jìn)一步推廣提供一定的參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 選用成年的SD清潔級(jí)雄性大鼠共18只，體質(zhì)量為（300±20）g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，飼養(yǎng)于福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［許可證號(hào)：SCXK（滬）2017-0005；合格證編號(hào)：201500558815］。飼養(yǎng)條件：溫度（22±2）℃，濕度（55±15）%，12 h明暗交替，自由進(jìn)食飲水。18只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為電針組、模型組和假手術(shù)組，每組6只，造模前先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。實(shí)驗(yàn)過程中均嚴(yán)格按照國(guó)際動(dòng)物保護(hù)及使用指南的規(guī)定進(jìn)行。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)器械與試劑 華佗牌30號(hào)0.5寸不銹鋼毫針、SDZ-Ⅱ型華佗牌電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；小動(dòng)物呼吸麻醉系統(tǒng)（深圳瑞沃德生命科技公司，型號(hào)：R407）；L3800號(hào)大鼠用MCAO線栓（廣州佳靈生物技術(shù)有限公司）；潔凈工作臺(tái)（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）。

1.3 造模 參考Longa改良線栓法［7］制備大鼠MCAO模型，在電針組和模型組的大鼠頸部左側(cè)進(jìn)行手術(shù)，操作方法：大鼠術(shù)前禁食不禁水12 h，5%異氟烷將大鼠麻醉，在造模過程中需觀察大鼠對(duì)手術(shù)刺激的反應(yīng)以調(diào)節(jié)異氟烷濃度、流量來維持麻醉的深度，使大鼠不至于在手術(shù)過程中清醒或者死亡；將大鼠固定、消毒后于頸部前正中線切開皮膚，鈍性分離左側(cè)頸總動(dòng)脈（CCA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）、頸外動(dòng)脈（ECA）；結(jié)扎ECA，使用動(dòng)脈夾夾閉ICA、ECA的遠(yuǎn)心端；在ECA距CCA的分叉1 cm處剪開一個(gè)小口，將大鼠用MCAO線栓緩慢沿ECA插入ICA，控制進(jìn)線的深度為18～22 mm，然后縫合大鼠頸部傷口并消毒；2 h后用剪刀把露出體外的線栓減去，實(shí)現(xiàn)再灌注損傷。等待大鼠完全蘇醒后，對(duì)所有的大鼠進(jìn)行提尾實(shí)驗(yàn)觀察［8］：將大鼠的尾巴提起，如果發(fā)現(xiàn)其右前肢呈現(xiàn)屈曲的狀態(tài)，那么就表明造模成功。假手術(shù)組只將大鼠頸部皮膚剪開，鈍性分離CCA、ICA、ECA后即縫合，不予結(jié)扎和插線。

1.4 干預(yù)措施 電針組于造模后24 h進(jìn)行電針干預(yù)，參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［9］選取大鼠神庭、百會(huì)穴，使用華佗牌30號(hào)0.5寸不銹鋼毫針沿頭部向上斜刺0.2～0.3 cm，連接SDZ-Ⅱ華佗牌電子針療儀，打開電源，選取疏密波，頻率為2～10 Hz，調(diào)整至大鼠耳朵輕微抖動(dòng)，且大鼠不撕叫、不掙扎為度。每次干預(yù)時(shí)間為20 min，每天1次，連續(xù)7 d。模型組和假手術(shù)組不予干預(yù)。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分 在干預(yù)第1天、第7天根據(jù)Longa法［10］對(duì)3組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，判斷其神經(jīng)功能缺損的情況。0分：無神經(jīng)功能缺失癥狀；1分：不能完全伸展患側(cè)前爪；2分：行走時(shí)向患側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分：行走時(shí)向患側(cè)傾倒；4分：不能自主行走，意識(shí)喪失。

1.5.2 平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)分 在干預(yù)第1天、第3天、第7天對(duì)3組大鼠進(jìn)行平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)分，判斷其平衡能力的表現(xiàn)。將大鼠放置在1根寬1.5cm、長(zhǎng)30 cm、高于地面30 cm的木條上，對(duì)其進(jìn)行觀察。實(shí)驗(yàn)前1周對(duì)各組大鼠進(jìn)行訓(xùn)練，每天8點(diǎn)和17點(diǎn)各訓(xùn)練1次，每次10 min，以大鼠能順利在平橫木上保持穩(wěn)定為標(biāo)準(zhǔn)。評(píng)分為0～6分，0分：大鼠在平衡木上能夠爬行并且保持平衡穩(wěn)定且時(shí)間≥60 s；1分：大鼠在平衡木上需要抓緊平衡木邊緣才能保持平衡穩(wěn)定且時(shí)間≥60 s；2分：大鼠需抓緊平衡木但是同時(shí)有一只腳落下才能保持平衡穩(wěn)定且時(shí)間≥60 s；3分：大鼠需要抓緊平衡木但是同時(shí)有兩只腳落下，能夠堅(jiān)持在平衡木上的時(shí)間≥60 s；4分：大鼠試圖在平衡木上保持平衡，但落下，同時(shí)能夠堅(jiān)持在平衡木上的時(shí)間≥40 s；5分：大鼠試圖在平衡木上保持平衡，但落下，同時(shí)能夠堅(jiān)持在平衡木上的時(shí)間≥20 s；6分：落下，沒有試圖保持平衡或抓住平衡木，能夠堅(jiān)持在平衡木上的時(shí)間≤20 s［11］。

1.5.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 分為定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)。在干預(yù)第3～6天每天對(duì)3組大鼠進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)，記錄其逃避潛伏期；第7天對(duì)3組大鼠進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，記錄其穿越平臺(tái)的次數(shù)。把圓形水迷宮裝置等分為4份，按順時(shí)針方向標(biāo)記為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4個(gè)象限，同時(shí)將平臺(tái)放置于第Ⅲ象限，實(shí)驗(yàn)前2 d將3組大鼠放置在水迷宮中進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練，使其能夠在水中正常找到平臺(tái)。定位航行實(shí)驗(yàn)操作步驟［12］：將3組大鼠根據(jù)順時(shí)針的方向從水池中設(shè)置好的4個(gè)象限面向池壁放入水中，如果大鼠在90 s內(nèi)能夠找到平臺(tái)并且爬上平臺(tái)同時(shí)停留了3 s以上，即認(rèn)為大鼠找到了平臺(tái)，大鼠進(jìn)入水中到爬上平臺(tái)時(shí)間稱為逃避潛伏期；如果大鼠在90 s內(nèi)不能夠找到平臺(tái)，一直在水中游動(dòng)，需引導(dǎo)大鼠爬上平臺(tái)，并且停留10 s，逃避潛伏期就計(jì)為90 s?？臻g探索實(shí)驗(yàn)操作步驟［12］：撤除水中的平臺(tái)，在上述設(shè)置好的4個(gè)象限將3組大鼠放入水中，使其自由游泳90 s，分別記錄各組大鼠90 s內(nèi)穿越原平臺(tái)象限的次數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 27.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布的以（±s）表示，2組間比較采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)，多組間比較采用One-WayAnova方法進(jìn)行檢驗(yàn)；方差齊時(shí)，采用Least Significant Difference方法；方差不齊時(shí)，采用Dunnett T3方法；不符合正態(tài)性分布的采用非參數(shù)檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 3組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較 見表1。

表1 3組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較（±s） 分

表1 3組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較（±s） 分

注：與假手術(shù)組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05。

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2.2 3組大鼠平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)分比較 見表2。

表2 3組大鼠平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)分比較（±s） 分

表2 3組大鼠平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)分比較（±s） 分

注：與假手術(shù)組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05。

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2.3 3組大鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)比較 見表3、表4。

表3 3組大鼠逃避潛伏期比較（±s）s

表3 3組大鼠逃避潛伏期比較（±s）s

注：與假手術(shù)組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05。

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表4 3組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)比較（±s） 次

表4 3組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)比較（±s） 次

注：與假手術(shù)組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05。

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3 討 論

本研究結(jié)果顯示：電針第7天電針組神經(jīng)功能缺損評(píng)分高于模型組，但低于假手術(shù)組，說明電針干預(yù)可以改善MACO大鼠神經(jīng)功能缺損程度；電針第3天電針組平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)分高于模型組，但低于假手術(shù)組，電針第7天電針組平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)分高于模型組，但低于假手術(shù)組，同時(shí)低于第3天電針組的評(píng)分，說明電針干預(yù)可以改善MACO大鼠平衡能力的程度，并且隨著治療時(shí)間的增加，改善程度越明顯；電針第3天電針組與模型組逃避潛伏期無差異，且均短于假手術(shù)組，電針第4～5天電針組短于模型組，長(zhǎng)于假手術(shù)組，電針第6天電針組明顯短于模型組，且與假手術(shù)組無差異，說明電針干預(yù)可以促進(jìn)MACO大鼠方向定位能力的恢復(fù)，同時(shí)隨著干預(yù)時(shí)間的增加，改善效果越明顯；電針第7天電針組穿越平臺(tái)次數(shù)多于模型組，少于假手術(shù)組，說明電針干預(yù)可以改善MACO大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。

神庭穴為督脈之要穴，與百會(huì)穴相配可醒腦開竅，調(diào)和一身之陰陽(yáng)。督脈入絡(luò)腦，與腦相關(guān)，刺激督脈可參與腦的一系列調(diào)節(jié)。同時(shí)兩個(gè)穴位都位于頭部，也屬于近端取穴，可以明顯地改善和調(diào)節(jié)認(rèn)知功能［13］。電針通過連續(xù)的微電流對(duì)兩個(gè)局部穴位進(jìn)行刺激［14］，能夠改善手針治療無法做到的連續(xù)而持久的行針，顯著提高療效。同時(shí)微電流的刺激也能夠影響大腦的皮部，激發(fā)人體自身調(diào)節(jié)的功能，從而進(jìn)一步增加大腦血液循環(huán)和供應(yīng)，有助于疾病的好轉(zhuǎn)，同時(shí)促進(jìn)患者認(rèn)知功能的改善，提高其生活質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)為電針改善神經(jīng)功能缺損、平衡能力和記憶認(rèn)知能力提供了一定的理論依據(jù)，但是電針組認(rèn)知功能雖均有明顯好轉(zhuǎn)，仍然無法恢復(fù)至正常狀態(tài)，可能與電針療程，刺激強(qiáng)度、次數(shù)、頻率等因素有關(guān)。后續(xù)實(shí)驗(yàn)可以根據(jù)這些相關(guān)因素進(jìn)行設(shè)計(jì)探索，以明確影響電針治療腦卒中療效的具體因素。