宋芷霜, 郭寶芝, 劉愛珍, 丁俊珊

鄭州市婦幼保健院婦科(河南鄭州 450000)

子宮脫垂是指子宮從正常位置沿陰道下降至宮頸外口達(dá)坐骨棘水平以下，甚至可全部脫出于陰道口之外，常伴有陰道前后壁脫垂及膀胱尿道和直腸膨出，是盆底功能障礙性疾病的主要組成部分，嚴(yán)重影響女性生活質(zhì)量[1]。有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，子宮脫垂多發(fā)于40～60歲之間，尤以絕經(jīng)后女性為主，認(rèn)為與絕經(jīng)后女性雌激素水平下降，生殖器官縮小，相關(guān)支撐結(jié)構(gòu)萎縮相關(guān)[2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，子宮脫垂有年輕化趨勢(shì)，高達(dá)30%，其中有盆底功能障礙性疾病家族史患者發(fā)病早、進(jìn)展迅速，高級(jí)別者親屬患病率是一般人群的2.4～5倍，提示遺傳易感性在子宮脫垂致病機(jī)制中可能占有一定地位[3-4]。硫酸基轉(zhuǎn)移酶(sulfotransferases,SULTs)是機(jī)體催化硫酸化反應(yīng)的關(guān)鍵酶，而硫酸化反應(yīng)是在各種內(nèi)源物(甾體激素或神經(jīng)遞質(zhì)等)和外源物(藥物制劑或食品添加劑等)生物轉(zhuǎn)化過(guò)程中占有重要地位[5]。目前研究發(fā)現(xiàn)至少有9個(gè)SULTs家族，其中人類SULTs基因家族主要有SULT1、SULT2、SULT4和SULT 6，對(duì)SULT1研究較多，有8個(gè)亞家族成員，以SULT1A3和SULT1E1為主[6-7]。研究發(fā)現(xiàn)，SULT1E1基因編碼蛋白與雌二醇、雌酮及合成雌激素均有較高親和性，與子宮肌瘤等雌激素依賴性疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[8-9]。本研究前期發(fā)現(xiàn)SULT1A3在子宮脫垂患者主韌帶組織中表達(dá)異常，但其具體相關(guān)機(jī)制尚不清楚。為此，本研究選取53例子宮脫垂患者和同期無(wú)盆腔臟器脫垂和無(wú)壓力性尿失禁但需行子宮全切術(shù)的53例患者作為研究對(duì)象探討SULT1A3在子宮脫垂主韌帶組織中的表達(dá)情況及臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月至2018年1月于本院收治并行手術(shù)治療(單純陰式子宮切除術(shù))的53例子宮脫垂(POP-Q分期為Ⅱ～Ⅳ期)患者作為觀察組；同期選取無(wú)盆腔臟器脫垂和無(wú)壓力性尿失禁但需行子宮全切術(shù)的53例患者作為對(duì)照組。

入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有研究對(duì)象均有產(chǎn)道分娩史；(2)所有患者知情，且簽署同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)近6月有雌激素類藥物服用史；(2)術(shù)后病理結(jié)果提示雌激素相關(guān)性疾病。

所有研究對(duì)象均知情且簽署同意書，并已通過(guò)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。兩組絕經(jīng)前和絕經(jīng)后年齡、體質(zhì)指數(shù)及產(chǎn)次等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 避開血管，確保切除組織處未見異常腫物及結(jié)節(jié)，且肉眼未見撕裂、斷裂及挫傷等，取接近子宮頸的主韌帶組織，大小約1 cm×1 cm×1 cm，用0.9%生理鹽水沖洗干凈，并將其為分成0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm組織塊，置于裝有RNA保存液的凍存管中，并于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?，?jīng)HE染色證實(shí)該組織為韌帶組織。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)[10]采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測(cè)兩組主韌帶組織中SULT1A3、雌激素受體-α(estrogen receptor-α,ER-α)和雌激素受體-β(ER-β) mRNA表達(dá)水平：第一，總RNA提取，取一小塊組織復(fù)溶，后將其置于含500 μL Trizol液(美國(guó)Thermo公司)以提取冰凍組織總RNA，并用NanoDrop 8000分光光度計(jì)對(duì)RNA進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。第二，逆轉(zhuǎn)錄，參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)說(shuō)明書合成cDNA，其中逆轉(zhuǎn)錄體系(20 μL)包括4 μL 5×primer script buffer、1 μL Random 6 mers、1 μL primer script RT Enzyme、1 μL Oligo dT primer、1 μg總RNA和RNAse Free(補(bǔ)足20 μL)，逆轉(zhuǎn)錄條件：37℃ 20 min，90℃ 10 s，獲得的cDNA用于PCR擴(kuò)增。第三，PCR，用Primer Primer5.0設(shè)計(jì)引物，并通過(guò)BLAST驗(yàn)證引物特性，由上海吉?jiǎng)P基因科技有限公司輔助完成；基于Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System(美國(guó)ABI公司)，用SYBR Green熒光染料(日本TaKaRa公司) 對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，以2-ΔΔCt表示mRNA相對(duì)表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo) 收集并對(duì)比各組主韌帶組織SULT1A3、,ER-α和ER-β mRNA表達(dá)水平，并對(duì)觀察組隨訪2年，記錄其復(fù)發(fā)情況。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)[11]檢查患者平臥用力向下屏氣處于最大脫垂?fàn)顟B(tài)，POP-Q臨床分期有5個(gè)級(jí)別：0度：無(wú)脫垂；Ⅰ度:脫垂最遠(yuǎn)處在處女膜內(nèi)，距處女膜>1 cm；Ⅱ度:脫垂最遠(yuǎn)處距處女膜邊緣1 cm內(nèi)，處女膜內(nèi)或是處女膜外；Ⅲ度:脫垂最遠(yuǎn)處在處女膜外，距處女膜邊緣在1～2 cm內(nèi)，且

2 結(jié)果

2.1 各組主韌帶組織SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA比較 在觀察組和對(duì)照組中，與絕經(jīng)前比較，絕經(jīng)后主韌帶組織中SULT1A3 mRNA水平升高，ER-α mRNA和ER-β mRNA水平降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與對(duì)照組比較，觀察組主韌帶組織中SULT1A3 mRNA水平更高，ER-α mRNA和ER-β mRNA水平更低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組主韌帶組織SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA比較

2.2 主韌帶組織SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA與子宮脫垂復(fù)發(fā)的關(guān)系 隨訪2年，53例子宮脫垂患者中10例復(fù)發(fā)，其中2例為絕經(jīng)前，8例為絕經(jīng)后。與未復(fù)發(fā)者比較，復(fù)發(fā)者主韌帶組織SULT1A3 mRNA水平相對(duì)較高，但ER-α mRNA和ER-β mRNA水平則相對(duì)較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在復(fù)發(fā)者中絕經(jīng)后主韌帶組織SULT1A3 mRNA水平高于絕經(jīng)前，但其ER-α mRNA和ER-β mRNA水平低于絕經(jīng)前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3、4。

表3 SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA與子宮脫垂復(fù)發(fā)的關(guān)系

表4 復(fù)發(fā)者絕經(jīng)前后SULT1A3 mRNA、ER-α mRNA和ER-β mRNA比較

2.3 SULT1A3 mRNA與ER-α mRNA和ER-β mRNA的關(guān)系 經(jīng)Pearson相關(guān)分析得知，SULT1A3 mRNA與ER-α mRNA和ER-β mRNA均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表5。

表5 SULT1A3 mRNA與ER-α mRNA和ER-β mRNA的關(guān)系

3 討論

盆底功能障礙性疾病是因各種原因?qū)е屡璧字С止δ鼙∪酰枨黄鞴傧乱频囊环N功能障礙性疾病，而子宮脫垂是其主要表現(xiàn)形式，與盆底結(jié)締組織結(jié)構(gòu)及功能完整性被破壞相關(guān)[12]。其中位于闊韌帶下部，橫行于宮頸兩側(cè)和骨盆側(cè)壁之間的主韌帶是盆底結(jié)締組織的重要組成部分，是固定宮頸位置、防止子宮脫垂的主要結(jié)構(gòu)[13]。目前公認(rèn)的導(dǎo)致子宮脫垂發(fā)生的致病因素主要包括妊娠及分娩所致盆底結(jié)構(gòu)組織損傷、年齡增長(zhǎng)所致雌激素水平降低、長(zhǎng)期腹壓增加與體質(zhì)指數(shù)增加、遺傳因素及先天性發(fā)育不良等[14-15]。研究發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致盆腔器官脫垂尤其是子宮脫垂發(fā)生的病因可能是單一的，也可能是多因素聯(lián)合作用的結(jié)果[16-17]。SULT1A3基因位于16號(hào)染色體短臂上，是硫酸基轉(zhuǎn)移酶1A家族重要成員之一，存在于胃腸、肺、血小板及腦組織當(dāng)中，與消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[18-19]。近年研究發(fā)現(xiàn)，SULT1A3還參與單環(huán)酚類化合物的硫化反應(yīng)，與雌激素及類似物代謝密切相關(guān)[20]。

本研究前期發(fā)現(xiàn)SULT1A3在子宮脫垂患者主韌帶組織中表達(dá)異常，但其具體相關(guān)機(jī)制尚不清楚；為此，本研究選取53例子宮脫垂患者和同期無(wú)盆腔臟器脫垂和無(wú)壓力性尿失禁但需行子宮全切術(shù)的53例患者作為研究對(duì)象進(jìn)行探討發(fā)現(xiàn)，觀察組絕經(jīng)前后主韌帶組織SULT1A3 mRNA水平均高于對(duì)照組，提示SULT1A3主韌帶組織表達(dá)異常可能是子宮脫垂發(fā)生的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。

通常認(rèn)為支持結(jié)構(gòu)形態(tài)及功能損傷是以子宮脫垂為代表的盆腔器官脫垂的主要致病原因，而雌激素在維持支持結(jié)構(gòu)形態(tài)及功能上占有重要地位；雌激素是一類核蛋白，主要通過(guò)結(jié)合細(xì)胞漿受體蛋白在維持盆底支持組織結(jié)構(gòu)、張力、血供及神經(jīng)再生中發(fā)揮著重要作用[21]。本研究檢測(cè)主韌帶組織ER-α mRNA和ER-β mRNA水平發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，觀察組絕經(jīng)前后主韌帶組織中ER-α mRNA和ER-β mRNA水平均明顯降低，提示主韌帶組織ER-α和ER-β表達(dá)水平降低也是子宮脫垂發(fā)生的一個(gè)重要原因，與既定研究事實(shí)吻合；那它與SULT1A3之間是否存在關(guān)系，又存在什么關(guān)系呢？為此，本研究對(duì)SULT1A3 mRNA與ER-α mRNA和ER-β mRNA數(shù)據(jù)進(jìn)行了Pearson相關(guān)分析，得知SULT1A3 mRNA與ER-α mRNA和ER-β mRNA均呈明顯負(fù)相關(guān)，提示SULT1A3可能通過(guò)降低ER-α和ER-β發(fā)揮作用。眾所周知，ER-α和ER-β水平與絕經(jīng)密切相關(guān)，為此，本研究對(duì)比了觀察組和對(duì)照組絕經(jīng)前后患者人數(shù)，發(fā)現(xiàn)兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，排除了患者絕經(jīng)情況分配不均對(duì)本研究的影響。本研究還發(fā)現(xiàn)，與絕經(jīng)前比較，觀察組和對(duì)照組絕經(jīng)后主韌帶組織SULT1A3升高，ER-α和ER-β下降，提示在同一組研究對(duì)象中絕經(jīng)與否也是子宮脫垂發(fā)生的一個(gè)重要原因。此后，本研究還對(duì)觀察組患者隨訪了2年，并記錄其復(fù)發(fā)情況，發(fā)現(xiàn)與未復(fù)發(fā)者比較，復(fù)發(fā)者主韌帶組織SULT1A3 mRNA水平相對(duì)較高，但ER-α mRNA和ER-β mRNA水平則相對(duì)較低(P<0.05)，與前述結(jié)論基本一致，并提示子宮脫垂患者主韌帶組織SULT1A3表達(dá)情況可直接影響其預(yù)后，提醒臨床工作者可重點(diǎn)關(guān)注主韌帶組織SULT1A3高水平患者，看是否可通過(guò)基因逆轉(zhuǎn)等新手段解決患者后顧之憂。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)中絕經(jīng)后患者占比較大(80%，8/10)，且絕經(jīng)后主韌帶組織SULT1A3 mRNA水平高于絕經(jīng)前，但其ER-α mRNA和ER-β mRNA水平低于絕經(jīng)前(P<0.05)，與前述部分結(jié)論一致，強(qiáng)調(diào)絕經(jīng)情況也是子宮脫垂的一個(gè)重要因素，為子宮脫垂研究提供更多的方向。

綜上所述，子宮脫垂患者主韌帶組織SULT1A3升高，與ER-α和ER-β下降相關(guān)，可能是子宮脫垂發(fā)生的重要原因之一。但本研究所涉研究對(duì)象樣本量少，且研究時(shí)間較短，后續(xù)可通過(guò)擴(kuò)大樣本量，并延長(zhǎng)研究時(shí)間以提高本文結(jié)論的可信度。