葉先才，劉勝兵，閔繼斌

（1 嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院 浙江 嘉興 314000）

（2 嘉善縣中醫(yī)院 浙江 嘉興 314000）

脊髓鞘內(nèi)置管有助于將微量或小分子藥物定期導(dǎo)入蛛網(wǎng)膜下腔，從而研究藥物對脊髓的結(jié)構(gòu)和功能影響。例如，胡興國等脊髓鞘內(nèi)給予米諾環(huán)素探討了對脊髓G蛋白偶聯(lián)受體激酶2 表達的影響[1]。脊髓置管是研究脊髓相關(guān)結(jié)構(gòu)功能較常用、且給藥效果較理想的手段[2]。研究發(fā)現(xiàn)，脊髓鞘內(nèi)給藥的導(dǎo)管型號或?qū)Ч苓M入的途徑和方式不同，其對實驗大鼠的生存率和脊髓的結(jié)構(gòu)均有不同程度的影響[3]。其中，寰枕后膜置管因?qū)Ч茉诩顾枨蕛?nèi)穿過較長的距離直到腔腰椎膨大處，易對脊髓結(jié)構(gòu)會造成破壞，嚴重的還會引起大鼠癱瘓[4]。該置管方式對于研究周期較長、給藥頻繁而需長期置留的實驗而言，導(dǎo)管長久置留是否影響脊髓結(jié)構(gòu)尚不清楚。此外，對于如何固定體外部分導(dǎo)管，使其完整長久留存，從而保障整個實驗過程中經(jīng)導(dǎo)管給藥也是很多脊髓置管實驗中需要考慮的問題。有研究通過去除顱頂骨膜，在矢狀縫兩側(cè)鉆孔后釘入螺絲，將導(dǎo)管體外部分固定于兩螺絲釘之間，固定在顱骨[5]。這種顱骨鉆孔的固定方法存在手術(shù)時間長，實驗操作難度較大等不足。本研究通過體外導(dǎo)管縫合固定，探求一種簡單實用、適合大鼠單籠飼養(yǎng)的體外導(dǎo)管固定方法。通過大鼠脊髓鞘內(nèi)置管，比較兩種不同導(dǎo)管體外部分固定方式的固定效果，同時觀察PE-10 管置留與否對脊髓結(jié)構(gòu)的影響，為后續(xù)脊髓置管實驗提供參考。

1.材料和方法

1.1 實驗動物

雄性健康SD 大鼠30 只，2019 年11 月購自浙江省醫(yī)科院，體重300 ～320 g，分籠飼養(yǎng)，自由飲食。

1.2 材料

PE-10 管，50 μl 微量注射器，止血鉗，鑷子，剪刀，手術(shù)刀片，紗布，水合氯醛，苯巴比妥鈉。

1.3 方法

實驗分為三組，每組10 只，各組大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40 mg/100 g，麻醉后四肢固定于大鼠固定板，頸部用5mL 注射器針管墊起。常規(guī)消毒，頸部剪毛，脫毛器脫毛，70%酒精擦拭。手術(shù)刀片劃開兩耳中線下的頭頸部皮膚，分離頸部肌肉后，找到寰枕后模，手術(shù)鉗夾住兩側(cè)肌肉。用1mL 注射器針頭挑破寰枕后膜至清亮腦脊液流出。取PE-10 導(dǎo)管12 cm 由經(jīng)針頭挑破的寰枕后膜插入6 ～8 cm，以角針、3-0 手術(shù)線縫合切口，用石蠟封固PE-10 管暴露的末端，防止腦脊液流出。術(shù)后10萬單位青霉素0.5 mL 肌肉注射。

1.3.1 PE-10 兩種管體外固定方式：第一組大鼠PE-10 管體外部分用手術(shù)線固定縫合于頭頸部皮膚；第二組大鼠PE-10 管體外部分直立于頭頸部；實驗第三組大鼠為第一組和第二組各隨機取5 只大鼠組成。

1.3.2 PE-10 管脊髓存留對脊髓的影響：第一組和第二組保留PE-10 管至實驗結(jié)束，第三組術(shù)后第3 d 從脊髓拔除PE-10 管。

1.3.3 脊髓石蠟切片，HE 染色觀察：術(shù)后第四周分別各組取2 只大鼠，戊巴比妥鈉麻醉（40 mg/kg，腹腔注射），固定后，剪開背部皮膚，分離肌肉，取出脊髓L4/5 部位后固定于4%多聚甲醛固定液，固定48h 后，石蠟切片，HE 染色。

2.實驗結(jié)果

2.1 不同固定方式對術(shù)后大鼠的死亡率的影響

為了探討不同固定方式對實驗動物死亡率的影響，我們分析了頭頸部皮膚固定和縫合固定后直立兩種方式對大鼠死亡率的影響。結(jié)果如表1 所示，術(shù)后第2d 至實驗結(jié)束，第一組大鼠死亡數(shù)2 只，死亡率為13.3%，未見動物癱瘓；第二組未見動物死亡，但觀察到后肢癱瘓大鼠1 只；癱瘓率為6.7%。此外，還觀察到存活大鼠術(shù)后手術(shù)切口紅腫有滲出液。術(shù)后2 周，刀口基本愈合。兩組無顯著差異（P＞0.05）

表1 實驗大鼠死亡與癱瘓統(tǒng)計[n（%）]

2.2 縫合固定后直立的方式明顯優(yōu)于縫合固定于頭頸部皮膚

PE-10 管體外部分用手術(shù)線縫合固定于頭頸部皮膚的實驗組，2 周后，3 只大鼠的PE 管體外部分被損；2 只大鼠的PE 管體外的長度存留不足1cm，不利于后續(xù)給藥。PE 管直立于外的實驗組，PE 管存留完好，結(jié)果見表2。數(shù)據(jù)分析表明，縫合固定后直立的方式明顯優(yōu)于縫合固定于頭頸部皮膚的固定方式（P＜0.05）。

表2 PE-10 管體外兩種不同固定方式的比較

2.3 不同置管方式和置管時間對脊髓結(jié)構(gòu)無影響

為了進一步探討不同置管方式和置留時間是否對脊髓的解剖結(jié)構(gòu)產(chǎn)生明顯影響，我們對不同分組的動物術(shù)后第四周進行了病理解剖觀察。結(jié)果如圖1 所示，各組大鼠脊髓無明顯結(jié)構(gòu)破壞，脊髓組織結(jié)構(gòu)正常。

圖1 脊髓置管對脊髓結(jié)構(gòu)的影響

3.討論

自Yaksh 等通過大鼠鞘內(nèi)置管給藥后[6]，脊髓鞘內(nèi)置管在神經(jīng)相關(guān)的研究中得以廣泛應(yīng)用，其中，寰枕后膜置管具有手術(shù)操作簡單、插管入口明顯、置管便捷等優(yōu)點。但有文獻報道，該置管方式的早期實驗動物存在一定的死亡率，約3%～5%[4]。此外，因?qū)嶒瀯游锏膫€體有差別，易造成插入位置偏深，導(dǎo)致術(shù)后動物出現(xiàn)后肢癱瘓；甚至引起脊髓的結(jié)構(gòu)損傷。但本研究的結(jié)果表明，經(jīng)寰枕后膜置管未見明顯的脊髓結(jié)構(gòu)損傷，這可能與我們在手術(shù)過程中對相關(guān)操作存在的脊髓損傷等潛在風(fēng)險顯著重視有關(guān)。存留于體外部分的置管常因?qū)嶒瀯游锏淖隙撀浠虮灰?。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)第5 ～6 椎間脊髓鞘內(nèi)置管，超過半數(shù)以上的體內(nèi)置管和部分體外存留導(dǎo)管在實驗后的4d 中被破壞[7]。因此，選擇有效的體外固定方法，對脊髓置管的保存有重要意義。本實驗發(fā)現(xiàn)，術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)后，固定于頭頸部皮膚的PE-10 管，由于大鼠抓脫而影響后續(xù)通過PE-10 管給藥，而PE-10管直立于外，則PE-10 管保持完好，PE-10 管的直立優(yōu)于固定于頭頸部皮膚。

綜上所述，PE-10 管體外部分直立優(yōu)于固定于頭頸部皮膚，脊髓鞘內(nèi)PE-10 管置留時間的長短對脊髓結(jié)構(gòu)無顯著影響。