韓健樂(lè) 楊帥平 王曉勃

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中常見的1種惡性腫瘤，主要出現(xiàn)在膀胱壁黏膜上的實(shí)體腫瘤，而非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌則指的是既往稱之為的淺表性膀胱癌。膀胱癌患者臨床確診后有70%～80%均為非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌，且該類腫瘤發(fā)病具有生物學(xué)行為的多變性，患者處于此病變階段時(shí)極易復(fù)發(fā)和進(jìn)展，具有很高的侵襲性和復(fù)雜的疾病進(jìn)程[1-2]。目前，臨床對(duì)非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的關(guān)注度不斷提高，對(duì)于非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中分子生物學(xué)指標(biāo)變化的認(rèn)識(shí)不斷加深，并且分子腫瘤病理學(xué)科的不斷完善也推動(dòng)了相關(guān)研究的深入[3]。富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2(proline rich protein tyrosine kinase 2,Pyk2)蛋白是1種富含脯氨酸的非受體型酪氨酸蛋白激酶[4]，既往報(bào)道顯示Pyk2在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、細(xì)胞增殖、遷移轉(zhuǎn)化等方面發(fā)揮重要的作用[5]。既往報(bào)道顯示Pyk2蛋白在多種腫瘤細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)移過(guò)程中均有著異常表達(dá)，可能是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的重要標(biāo)志物，并與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移和癌癥的預(yù)后產(chǎn)生某種關(guān)聯(lián)[6]。但在非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者中Pyk2蛋白的表達(dá)研究相對(duì)較少，為此本研究中以非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者為研究對(duì)象，探討Pyk2蛋白在其病灶組織中的表達(dá)情況及與腫瘤預(yù)后的相關(guān)性，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料及入選標(biāo)準(zhǔn)

取2016年1月至2019年12月收治的62例非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者為調(diào)查研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：① 患者經(jīng)CT、MRI、組織病理學(xué)檢查等手段確診為非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌；② 患者年齡40～75歲；③ 患者均具有手術(shù)根治治療的指征；④ 患者均完成手術(shù)治療，術(shù)中采集到完整的腫瘤病灶標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本；⑤ 患者自愿參與本項(xiàng)調(diào)查研究，研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審查通過(guò)。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 患者并發(fā)其他腫瘤疾??；② 基礎(chǔ)資料、臨床檢測(cè)資料缺失或不完善的患者；③ 合并嚴(yán)重的心血管疾病、自身免疫性疾病患者；④ 中途因各種原因自愿退出本研究的患者。62例患者男性34例、女性28例，年齡40～75歲，平均年齡(57.66±9.97)歲，病灶大小1.8～4.5 cm，平均病灶大小(3.79±1.76)cm，病灶數(shù)：?jiǎn)伟l(fā)40例、多發(fā)22例，腫瘤分期：Ⅰ期15例、Ⅱ期20例、Ⅲ期27例，分化程度：高26例、中22例、低14例。

1.2 檢測(cè)方法

取非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者手術(shù)后的腫瘤病灶組標(biāo)本和癌旁正常黏膜組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化法檢測(cè)Pyk2蛋白表達(dá)情況的檢測(cè)。將標(biāo)本進(jìn)行脫水、包埋、固定等處理，并加入鼠抗人Pyk2單克隆抗體過(guò)夜，然后按照SP試劑盒操作說(shuō)明對(duì)各組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，SP試劑盒購(gòu)自于上海艾博抗公司。在LV150N型光學(xué)顯微鏡(日本尼康公司)下觀察Pyk2蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率，陽(yáng)性率判斷標(biāo)準(zhǔn)為：顯微鏡視野下出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的特異性著色的棕色、黃色、褐色顆粒狀物質(zhì)即為陽(yáng)性，否則為陰性。將顯微鏡調(diào)節(jié)值低倍鏡視野(×100)下，選出每個(gè)標(biāo)本下10個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較多的視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算各個(gè)標(biāo)本中的Pyk2蛋白的表達(dá)水平。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

對(duì)觀察組膀胱癌病灶標(biāo)本和對(duì)照組癌旁正常黏膜組織標(biāo)本的Pyk2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率、表達(dá)水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比，并對(duì)Pyk2蛋白表達(dá)情況與非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的臨床病理學(xué)特征間的相關(guān)性進(jìn)行分析處理。并將患者分為Pyk2蛋白陽(yáng)性表達(dá)組和Pyk2蛋白陰性表達(dá)組，對(duì)兩組患者的預(yù)后效果進(jìn)行隨訪觀察，對(duì)比兩組患者術(shù)后的復(fù)發(fā)率、無(wú)進(jìn)展生存期(progression free survival,PFS)、總生存期(total survival,OS)，并進(jìn)行組間對(duì)比以探討Pyk2蛋白表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 觀察組、對(duì)照組Pyk2蛋白表達(dá)情況對(duì)比

觀察組Pyk2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率、表達(dá)水平均高于對(duì)照組，組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 觀察組、對(duì)照組Pyk2蛋白表達(dá)情況對(duì)比

2.2 Pyk2蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

Pyk2蛋白表達(dá)與非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者年齡、性別、病灶大小、病灶數(shù)等因素?zé)o關(guān)，而與患者的腫瘤分期、分化程度有關(guān)，見表2。

表2 Pyk2蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 Pyk2蛋白表達(dá)與患者預(yù)后關(guān)系

Pyk2蛋白陽(yáng)性表達(dá)組患者復(fù)發(fā)率高于陰性表達(dá)組，PFS、OS水平均低于Pyk2蛋白陰性表達(dá)患者，見表3。

表3 Pyk2蛋白表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

3 討論

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤疾病，隨著社會(huì)工作壓力的增加以及不良生活習(xí)慣的形成，膀胱癌在臨床上的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅患者的生命健康和生活質(zhì)量。其中膀胱癌患者中有70%～80%患者分型均屬于非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌，此病程階段患者復(fù)發(fā)率高、難治愈、預(yù)后效果差等特點(diǎn)，給此類患者的臨床治療帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)[7-8]。因此，對(duì)于此類患者診療過(guò)程中的病情監(jiān)測(cè)、預(yù)后效果的評(píng)估判斷是十分必要的，尋找1種無(wú)創(chuàng)敏感性、特異性高的生物標(biāo)志物作為非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的診斷和隨訪依據(jù)有著重要意義。目前，雖然有多種生物標(biāo)記物如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、環(huán)氧化酶、甲胎蛋白、核基質(zhì)蛋白22等用于膀胱癌的診療過(guò)程中，但存在著敏感性、特異性較差等問(wèn)題影響了其臨床應(yīng)用[9-10]。尋找1種敏感性和特異性更高的生物學(xué)標(biāo)志物作為非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)指標(biāo)，已成為近幾年臨床研究關(guān)注的重點(diǎn)方向。Pyk2蛋白是1種富含脯氨酸的非受體型酪氨酸蛋白激酶，既往報(bào)道顯示Pyk2在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、細(xì)胞增殖、遷移轉(zhuǎn)化等方面發(fā)揮重要的作用，為本項(xiàng)研究的開展提供了思路[11]。

在本研究中，選取非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者的手術(shù)后的腫瘤病灶組織和癌旁正常黏膜組織為檢測(cè)標(biāo)本，以免疫組化法對(duì)兩組標(biāo)本中的Pyk2蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比，結(jié)果顯示觀察組Pyk2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率、表達(dá)水平均高于對(duì)照組，表明觀察組Pyk2蛋白在非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者中呈現(xiàn)高表達(dá)，初步推斷Pyk2蛋白與非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移具有一定的關(guān)聯(lián)性，與既往臨床報(bào)道的結(jié)果基本一致[12]。進(jìn)一步對(duì)Pyk2蛋白表達(dá)與患者的臨床病理學(xué)特征關(guān)系進(jìn)行研究，結(jié)果顯示Pyk2蛋白的表達(dá)與非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者的年齡、性別、病灶大小、病灶數(shù)等因素?zé)o關(guān)，而與患者的腫瘤分期、分化程度有關(guān)。表明Pyk2蛋白的表達(dá)可能參與非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌腫瘤的進(jìn)展、分期、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程，對(duì)于宮頸癌腫瘤的加重扮演重要作用。也有報(bào)道表明Pyk2蛋白作為1個(gè)上游基因蛋白，可通過(guò)多種細(xì)胞通路對(duì)下游基因發(fā)揮廣泛的調(diào)節(jié)作用，也有報(bào)道指出Pyk2蛋白表達(dá)的增多可抑制膀胱癌腫瘤細(xì)胞的凋亡因子的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，使得非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌細(xì)胞大量繁殖，加重患者病情，促使患者的腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[13-14]。在預(yù)后效果對(duì)比中，Pyk2蛋白陽(yáng)性表達(dá)組患者的復(fù)發(fā)率高于陰性表達(dá)組，PFS、OS水平均低于Pyk2蛋白陰性表達(dá)患者，表明Pyk2蛋白的表達(dá)與非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者的預(yù)后效果有相關(guān)性，可用以預(yù)測(cè)患者的預(yù)后情況，有較高的臨床指導(dǎo)意義。

綜上所述，Pyk2蛋白在非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者病灶組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，其表達(dá)情況與非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌病灶的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、分期有密切關(guān)系，并與患者的腫瘤預(yù)后效果顯著相關(guān)。Pyk2蛋白的檢測(cè)對(duì)于非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌病情評(píng)估、預(yù)后判斷有指導(dǎo)意義。