李茂林，張七斤，徐青元

(1. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所 獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱 150069；2. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院，呼和浩特 010018)

藍(lán)舌病(bluetongue，BT)是由藍(lán)舌病病毒(bluetongue virus，BTV)引起的多種反芻動物易感的非接觸性蟲媒疫病，該病可以感染多種家養(yǎng)和野生反芻動物，其中綿羊最為易感。因病毒血清型、感染動物種類以及疫病是否首次流行等因素的不同，動物感染BTV后表現(xiàn)出的臨床癥狀有很大差異，可表現(xiàn)為無臨床癥狀、亞臨床癥狀乃至死亡。根據(jù)OIE報道，該病對于綿羊的病死率通常為2%～30%，有時可達(dá)70%，對于最為易感的綿羊，病死率甚至可達(dá)100%[1]。BT最早報道于1876年，發(fā)病動物為非洲的綿羊[2]，我國1979年于云南省師宗縣首次證明該病存在[3]。目前，該病在除南極洲外的其他大陸熱帶和亞熱帶絕大部分國家和地區(qū)存在，BT的分布范圍原本介于北緯40°至南緯35°之間，但是2006年以后，其流行范圍已擴(kuò)展到北緯50°。該病對畜牧業(yè)的危害包括疫病給生產(chǎn)造成的直接損失和對該疫病的防控費(fèi)用及影響國際貿(mào)易造成的間接損失，平均每年在全世界范圍內(nèi)造成的經(jīng)濟(jì)損失可達(dá)30億美元。BT被世界動物衛(wèi)生組織(Office International des Epizooties，OIE)列入OIE疫病名錄(OIE-Listed disease),為需通報動物疫病，我國則將其列為一類動物疫病。自1979年在我國云南省師宗地區(qū)首次正式報道BT以來，我國已在多個省份和地區(qū)開展了BT的血清學(xué)調(diào)查以及病毒分離工作。

1 BTV病原特性及傳播特點(diǎn)

BTV隸屬于呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬，其核酸由10個分節(jié)段的雙股RNA構(gòu)成，共編碼12種蛋白[4]。其中,VP2和VP5是BTV血清學(xué)分型的主要抗原，而VP7是血清學(xué)檢測中主要的群特異性抗原[4-5]。不同血清型病毒在自然感染狀態(tài)下可以發(fā)生基因節(jié)段互換。幾乎所有的反芻動物都可以感染BTV，其中，綿羊最為易感且最容易表現(xiàn)出臨床癥狀，其他動物通常表現(xiàn)為亞臨床癥狀或隱性感染。但是在2006年歐洲暴發(fā)了毒力更強(qiáng)的BTV-8相關(guān)疫情，牛在感染該病毒后也表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀。在BTV的傳播過程中，隱性感染動物特別是牛和其他野生反芻動物常作為病毒儲存宿主，在該病的傳播過程中扮演著重要的角色。易感動物間的直接接觸不會傳播本病，通過吸血昆蟲傳播是BTV的主要傳播方式。庫蠓屬蠓類是BTV最主要的傳播媒介，但在1 300～1 400種庫蠓中，只有約30種可以傳播BTV。除庫蠓外，在蚊子體內(nèi)也分離到了BTV，這表明蚊子在BTV的傳播過程中可能也起著重要作用。傳播媒介一旦感染BTV，將會終生帶毒[6]。BT流行情況與傳播媒介昆蟲的分布、習(xí)性和生活史密切相關(guān)，并且氣候與環(huán)境因素也會影響該病傳播，該病通常呈季節(jié)性流行。雖然有報道稱公牛和公羊精液樣品中檢測出BTV并可以傳播給雌性動物，甚至BTV可以通過胎盤傳播給胎兒，但這些傳播方式并非BTV的主要傳播方式，在該病流行過程中的意義不大。

2 BT全球流行概況

BT最早發(fā)現(xiàn)于非洲，并且很可能在更早的時期BTV就已經(jīng)在非洲的野生動物中存在并流行。對于BT臨床癥狀最早的詳細(xì)記錄始于1902年，所記錄的患病動物為由歐洲引入南非開普敦殖民地的美利奴綿羊[7]。1905年，首次證實(shí)引起B(yǎng)T的病原是一種病毒[8]。1944年，首次證實(shí)BT的傳播媒介為庫蠓[9]。Howell等[10]在20世紀(jì)60年代首次通過病毒中和試驗(yàn)對BT進(jìn)行了血清學(xué)分型。20世紀(jì)40年代以前，BT僅存在于南非地區(qū)。1943年，亞洲國家塞浦路斯發(fā)生BT疫情，這是BT首次在非洲之外的地區(qū)發(fā)生[11]。1952年，美國加利福尼亞州出現(xiàn)BT疫情，標(biāo)志著BT成功入侵北美洲[12]。1956—1957年期間，在伊利比亞半島出現(xiàn)BT疫情并造成大約18萬只綿羊死亡標(biāo)志著BT成功入侵歐洲[13]。1976年，澳大利亞鑒定出BTV-20標(biāo)志著BT成功入侵澳洲[14]，接下來在除南極洲以外的各大洲陸續(xù)分離鑒定出BTV，至此BT開始在全世界范圍內(nèi)流行。鑒于1956—1957年BT給伊利比亞半島畜牧業(yè)造成的巨大經(jīng)濟(jì)損失，20世紀(jì)60年代，OIE就已將BT列為A類動物疫病。迄今為止，全球已經(jīng)陸續(xù)鑒定出29個血清型的BTV[15-17]。

自BT首次在非洲以外的地區(qū)發(fā)現(xiàn)以來，已在全球范圍內(nèi)出現(xiàn)數(shù)次暴發(fā)，且在多個地區(qū)持續(xù)存在，表1列出了1943年以來全球BT暴發(fā)和病毒分離情況。由于全球經(jīng)濟(jì)水平差異、技術(shù)的不平衡性以及信息的滯后性，無法確定各個國家和地區(qū)目前有多少個血清型BT在流行。根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)統(tǒng)計，在1998—2006年，歐洲至少出現(xiàn)了BTV-1、BTV-2、BTV-4、BTV-9、BTV-16 5個血清型的病毒[18-20]，2006年8月，出現(xiàn)了毒力增強(qiáng)的BTV-8，該病毒首次導(dǎo)致牛出現(xiàn)明顯臨床癥狀，并且使BT的傳播范圍突破北緯40°[21]。2008年，在德國、新西蘭和比利時出現(xiàn)BTV-6和BTV-11兩個血清型的病毒，而在2008和2014年，分別在瑞士和法國首次鑒定出BTV-25和BTV-27兩個血清型的病毒[22-23]。在北美洲，1998年以前鑒定出的血清型分別為BTV-2、BTV-10、BTV-11、BTV-13和BTV-17，據(jù)統(tǒng)計每年造成的經(jīng)濟(jì)損失超過1億美元，1998年以后，在美國東南部陸續(xù)分離鑒定出BTV-1、BTV-3、BTV-5、BTV-6、BTV-9、BTV-12、BTV-14、BTV-19、BTV-22和BTV-24共計10個血清型的BTV[24-25]。在澳大利亞至少鑒定出BTV-1、BTV-2、BTV-3、BTV-7、BTV-9、BTV-15、BTV-16、BTV-20、BTV-21和BTV-23共計10個血清型的病毒，其中，BTV-1和BTV-21曾經(jīng)是該地區(qū)主要流行的血清型[25]。2011年之前，在亞洲已經(jīng)鑒定出BTV-1～BTV-24共計24個血清型的病毒，2011年，科威特首次分離鑒定出BTV-26，2016年，以色列在綿羊痘和牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫苗內(nèi)首次分離鑒定出BTV-28，2020年，我國鑒定出BTV-29，目前，亞洲至少存在27個血清型的BTV，其中印度通過中和試驗(yàn)和病毒分離鑒定的方法證實(shí)，該國存在BTV-1至BTV-21和BTV-23共計22個血清型病毒[16, 26-28]。由于缺乏準(zhǔn)確的流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)，人們僅能粗略地對BT的全球流行概況進(jìn)行闡述。但從BT在全球的流行來看，該病防控形勢仍然十分嚴(yán)峻，特別是新的血清型、亞型以及強(qiáng)毒株的出現(xiàn)，更應(yīng)引起我國高度重視。

3 我國BT血清學(xué)調(diào)查情況

1979年，在云南省師宗地區(qū)首次證明了BT在我國存在，自此開始在多個省份和地區(qū)開展了該病的檢測和監(jiān)測工作。在檢測方法上，1994年以前，我國主要采用瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(AGID)進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查，1994年以后，開始使用更為敏感和準(zhǔn)確的ELISA方法進(jìn)行檢測。將我國近40年來有關(guān)BT血清學(xué)檢測的報道進(jìn)行總結(jié)歸納，結(jié)果表明：在我國23個省份中，河北省[29]、山西省[30]、吉林省[31]、遼寧省[29]、陜西省[32]、甘肅省[33]、青海省[34]、山東省[30]、浙江省[35]、臺灣省[36]、湖北省[37]、江蘇省[30]、安徽省[30]、廣東省[38]、四川省[39]、貴州省[40]和云南省[5]均有BTV抗體陽性動物檢出；4個直轄市中，北京[41]和天津[29]有BTV抗體陽性動物檢出；5個自治區(qū)中，內(nèi)蒙古自治區(qū)[5]、新疆維吾爾自治區(qū)[42]、廣西壯族自治區(qū)[5]和西藏自治區(qū)[43]有BTV抗體陽性動物檢出；香港和澳門2個特別行政區(qū)沒有BTV抗體陽性動物檢出的報道。與其他BTV抗體陽性動物檢出省份不同，河北、天津和遼寧3個省(直轄市)雖有BTV抗體陽性動物檢出的報道，但該報道所記錄的信息十分籠統(tǒng)，每個省份進(jìn)行檢測的具體地點(diǎn)、檢測動物種類、樣品數(shù)量及陽性率均未提及[29]。河南省雖然沒有BTV抗體陽性動物檢出的報道，但是據(jù)推測應(yīng)有BT流行[30]。山東省沒有BTV抗體陽性動物檢出的報道，但是該省分離到1株 血清16型BTV，因此，可以確定該省存在BT抗體陽性動物[30]。目前，沒有BTV抗體陽性動物報道的地區(qū)中，重慶市、寧夏回族自治區(qū)、河南省、湖南省、江西省和福建省均處于北緯20°～40°，并且被檢出BT抗體陽性動物的省份所包圍，這些因素足以使人懷疑這些地區(qū)是否真的沒有BT存在。

4 我國BTV分離鑒定情況

BTV分離的主要方法是將感染動物抗凝血或紅細(xì)胞裂解物靜脈接種雞胚，再將特定時間死亡雞胚勻漿后接種易感細(xì)胞從而獲得病毒分離株，通常在血清學(xué)調(diào)查陽性區(qū)域放置哨兵動物更容易分離到病毒。自1979年在云南省曲靖地區(qū)師宗縣五龍鄉(xiāng)分離到第1株BTV至今的40年來，我國已分離到多株BTV。將我國首次報道的不同血清型BTV分離株進(jìn)行歸納整理，并對分離時間、分離地點(diǎn)、分離動物和病毒編號進(jìn)行統(tǒng)計，匯總結(jié)果如表2所示。我國目前已經(jīng)陸續(xù)分離到16個血清型的BTV，分別為BTV-1、2、3、4、5、7、9、11、12、14、15、16、17、21、24和29。

這16個血清型BTV分別在我國10個省份(地區(qū))分離到(圖1)，其中，云南分離到的血清型最多，共分離到11個血清型，分別為BTV-1、2、3、4、5、9、12、15、16、21和24。廣東次之，分離到BTV-2、4、5、7、12和16共計6個血清型。新疆分離到3個血清型。江蘇、四川和臺灣各分離到2個血清型。甘肅、廣西、內(nèi)蒙和山東各分離到1個血清型。此外在新疆分離到一株不與BTV-1至BTV-24陽性血清發(fā)生中和反應(yīng)的未定型病毒，在安徽、湖北、四川、甘肅、新疆等地分離到若干株病毒，但是沒有鑒定所分離病毒的血清型，這些沒有確定血清型的病毒未列入圖1。

從地理分布范圍來看，BTV-16分布最廣，在云南、廣東、四川和山東四省均分離鑒定出該血清型病毒；BTV-1分布于云南、新疆和四川；BTV-2分布于云南、廣東和臺灣；BTV-4和BTV-5分布于云南和廣東；BTV-12分布于與云南、廣東和臺灣；BTV-3、BTV-9和BTV-24只在云南分離到；BTV-7只在廣東分離到；BTV-14和BTV-29只在新疆分離到。從分離時間來看(圖2)，1979—1990年，我國首次分離到BTV-1和BTV-17共計2個血清型病毒；1991—2000年，首次分離到BTV-2、3、4、12、15和16共計6個血清型病毒；2001—2010年，沒有分離到新的血清型的BTV；2011年至今，首次分離到BTV-5、7、9、14、21、24和29共計7個血清型病毒；BTV-11因無法確定分離年限，沒有計入時間軸。病毒中和(VN)試驗(yàn)是BTV血清型鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)，但是隨著近年來基因測序技術(shù)的進(jìn)步，通過序列分析對BTV進(jìn)行分型的方法也逐漸被大家接受，并成為分離株溯源的重要手段，特別是在病毒發(fā)生重組的情況下，對病毒進(jìn)行全基因組測序顯得尤為重要。目前，我國已經(jīng)完成BTV血清1型、7型、15型、16型和21型病毒全基因測序工作，這些病毒全基因組測序工作的完成對我國BTV的研究具有重要意義。特別是血清21型病毒5149E株的全基因組測序結(jié)果表明該毒株的Segment 6基因節(jié)段可能來源于日本分離的BTV-16 KSB-6/C/08株，這意味著我國已有基因重組病毒存在，并且很有可能還存在其他重組病毒。

5 小 結(jié)

BTV主要由吸血昆蟲傳播，在2006年以前，BT主要分布于南緯40°和北緯35°之間，但在亞洲、美國西北部以及歐洲北部，BT流行區(qū)域可達(dá)北緯50°地區(qū)[13, 55-56]。在不同的地區(qū)，不同血清型甚至不同亞型的病毒，可能其傳播媒介存在差異，由于對BTV傳播媒介的研究相對較少，尚無法準(zhǔn)確掌握每個地區(qū)BTV的傳播媒介。人們推測BT流行范圍的擴(kuò)大與全球氣候變化相關(guān)，但其流行范圍的變化實(shí)際上是與傳播媒介的分布相吻合的，氣候變暖等因素可能首先對媒介昆蟲分布范圍產(chǎn)生影響，進(jìn)而導(dǎo)致了BT的流行范圍變化[18, 57-58]。BT在全球的流行過程中表現(xiàn)的特征：1)新血清型不斷出現(xiàn)；2)不同基因節(jié)段重組病毒陸續(xù)出現(xiàn)；3)不斷有新的傳播媒介出現(xiàn)，進(jìn)而導(dǎo)致BT流行范圍發(fā)生變化；4)某一地區(qū)可能同時存在多個血清型流行；5)某一血清型病毒可能在多個地區(qū)流行，并且病毒在基因水平出現(xiàn)地域特征。這些流行特點(diǎn)為BTV的基因變異提供了更為便利的條件，使強(qiáng)毒株出現(xiàn)的概率大大提高，從而導(dǎo)致畜牧業(yè)始終處于BTV的威脅之下。由于數(shù)據(jù)的缺乏，準(zhǔn)確闡述BT在全球的流行情況是非常困難的，但通過對現(xiàn)有數(shù)據(jù)的整理，仍可發(fā)現(xiàn)BT的在全球流行的復(fù)雜性。近年來，隨著我國“一帶一路”等國家重大戰(zhàn)略的實(shí)施，我國與其他國家的貿(mào)易更為頻繁，在此背景下，我們更應(yīng)對BT等外來動物疫病提高警惕，以免對我國養(yǎng)殖業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失。

從我國首次確定BT在我國存在至今已經(jīng)過去40年時間。在這40年中，不斷有新的省份檢測出BT抗體陽性動物，各地區(qū)分離鑒定到的BTV血清型也越來越多。從血清學(xué)角度來看，BT在我國全境絕大部分地區(qū)存在和流行，目前，大量血清學(xué)調(diào)查相關(guān)的報道僅停留在檢測群特異性抗體陽性水平，很多地區(qū)尚無法確定具體流行哪種血清型的BTV。沒有BT抗體陽性動物報道的地區(qū)中，寧夏、河南、重慶、湖南、江西和福建被BTV血清學(xué)陽性省份所包圍，并且氣候上具備BT流行的條件，對以上地區(qū)進(jìn)行血清學(xué)檢測，以確定是否有BT流行十分必要。黑龍江地處我國北部邊陲，氣候寒冷，其氣候條件可能影響了BT的傳播媒介，從而不具備BT流行的條件。上海、香港和澳門未見BT陽性動物報道，這可能與這三個城市畜牧業(yè)發(fā)展情況有關(guān)。海南省地獨(dú)特的地理位置應(yīng)該是沒有陽性動物報道的主要原因。從病原學(xué)角度來看，我國只在12個省級行政區(qū)域內(nèi)分離到BTV，只有10個省級行政區(qū)對分離的BTV進(jìn)行了血清型鑒定，尚有12個省級行政區(qū)域只有BTV抗體陽性動物報道而沒有分離鑒定BTV。因此，雖然我國已經(jīng)分離到16個血清型的BTV，但不排除其他血清型BTV存在的可能性。BT是一種蟲媒疫病，并且該病血清型眾多，各個血清型間不能完全交叉保護(hù)，因此，防控難度較大，通過對易感動物進(jìn)行免疫的方法來預(yù)防該病需要使用特定血清型的疫苗。在此前提下，對BT流行情況的準(zhǔn)確掌握就顯得尤為重要。確切掌握BT的流行情況，不但需要大量人財物的投入，同時，需要相關(guān)部門的重視以及各個部門的通力合作。目前，我國BT流行病學(xué)調(diào)查缺乏系統(tǒng)性，各個地區(qū)相關(guān)報道的數(shù)據(jù)數(shù)量和質(zhì)量參差不齊，某些地區(qū)監(jiān)測數(shù)據(jù)甚至出現(xiàn)必要參數(shù)缺失的現(xiàn)象。此外，我國對BTV傳播媒介所掌握的信息嚴(yán)重缺失，目前，我國有多少種蚊蟲可以攜帶并傳播BTV？各地BTV的主要傳播媒介是什么？這些問題都需要大量研究來給出答案。

目前，我國流行的BTV是否具有致病性是人們關(guān)注的一個焦點(diǎn)。從BT在我國發(fā)生的歷史來看，我國早期的BT病例是有臨床癥狀的，特別是1979年師宗首次分離到BTV的案例中，該病不但有明顯的臨床癥狀，還造成了大量動物死亡[3]。但近年來基本沒有BT自然感染病例出現(xiàn)臨床癥狀的報道。因此，有學(xué)者認(rèn)為BTV已經(jīng)不再對我國畜牧業(yè)構(gòu)成威脅，自然狀態(tài)下流行的各個血清型BTV使易感動物處于天然的“免疫保護(hù)”狀態(tài)，自然狀態(tài)下流行的病毒可以看作是天然的“弱毒疫苗”。但實(shí)際情況很可能并非如此，第一，該病毒血清型眾多，其基因極易發(fā)生突變和重組，即便是弱毒疫苗也發(fā)生過和野生型病毒重組的情況，任由病毒流行很可能發(fā)生不可預(yù)知的結(jié)果。如2006年在歐洲流行的BTV-8強(qiáng)毒株就與其他BTV-8毒株有很大差異，該毒株不但可以使感染羊表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，而且對牛也有致病性，在此之前，牛被認(rèn)為是隱性感染動物[56]；第二，即便是弱毒疫苗也存在一定的致病風(fēng)險，現(xiàn)階段已有弱毒疫苗引起免疫動物出現(xiàn)臨床癥狀或?qū)е律a(chǎn)性能下降的報道[59]。我國至少有16個血清型的BTV在各地流行，很難保證這些病毒確實(shí)都是對動物生產(chǎn)性能不產(chǎn)生任何影響的“天然疫苗”。我國養(yǎng)羊業(yè)目前還以散養(yǎng)為主，飼養(yǎng)管理較為粗放，很可能出現(xiàn)一些一過性臨床癥狀或亞臨床癥狀被忽略的情況；第三，我國作為BT的老疫區(qū)，即便是該病真的不會給我國動物飼養(yǎng)業(yè)造成直接經(jīng)濟(jì)損失，但是作為OIE規(guī)定的需通報疫病，該病也必然會對我國的進(jìn)出口貿(mào)易造成不良影響；最后，近年來小反芻獸疫、非洲豬瘟和牛結(jié)節(jié)性皮膚病等疫病的突然出現(xiàn)給我國造成非常嚴(yán)重的影響和損失。人們理應(yīng)以此為鑒，認(rèn)真做好BT的儲備研究，不但要準(zhǔn)確及時地掌握該病在我國的流行情況，而且要對鄰國疫情適時了解，以防止外來BTV傳入我國?；谝陨显?，即便近年來沒有該病在我國造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的報道，人們?nèi)匀灰匾曉摬。辽僖M(jìn)行必要的技術(shù)儲備，不但要準(zhǔn)確掌握該病在我國的流行情況，而且要在突發(fā)事件出現(xiàn)時能夠有效應(yīng)對。