李敏敏，方雪松，陳晶晶，王月娥，鐘 文

隨著陰道鏡下子宮頸管搔刮術(shù)、消化內(nèi)鏡、穿刺針吸等醫(yī)療技術(shù)在臨床工作中的廣泛應(yīng)用，黏液樣碎組織及針尖樣細(xì)小組織的數(shù)量不斷增加[1]，這些松散碎小的組織在常規(guī)取材后進(jìn)行固定、脫水、透明、浸蠟等一系列脫水處理過程，常出現(xiàn)組織丟失[2]，無法包埋的現(xiàn)象，直接影響后期切片及病理診斷。本實(shí)驗(yàn)通過在取材前對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理來探討對黏液樣碎組織制片的影響因素。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1標(biāo)本 黏液樣碎組織標(biāo)本68例，主要來源于中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科陰道鏡下子宮頸管搔刮術(shù)(ECC)、消化內(nèi)鏡、支氣管鏡、肺穿刺等活檢標(biāo)本及網(wǎng)膜囊腫、中耳炎性肉芽腫等手術(shù)組織。

1.1.2儀器 離心機(jī)(AXTG16G)，組織包埋機(jī)(Thermo Histostar)，切片機(jī)(Leica RM2235)，VERTANA HE600全自動染色封片一體機(jī)。

1.1.3試劑及耗材 固定液(10%中性緩沖福爾馬林)，伊紅，無水乙醇，二甲苯，石蠟。

1.2 方法

1.2.1預(yù)處理 將收集到的黏液樣組織標(biāo)本轉(zhuǎn)管至10 mL離心管中，配平離心機(jī)后，4 000 r/min離心10 min，升5降9；棄上清，將離心軟管剪斷，底物用吸管完全取出，將組織置于包埋紙上滴加伊紅，靜置5 min；將滴染伊紅的組織團(tuán)按照取材規(guī)范包好，置于固定液中固定。

1.2.2組織處理及制片 將預(yù)處理的組織經(jīng)脫水、透明和浸蠟后進(jìn)行包埋、切片，切片厚4 μm，用全自動染色封片一體機(jī)進(jìn)行HE染色。

2 結(jié)果

經(jīng)取材醫(yī)師判斷不能進(jìn)行常規(guī)取材的黏液樣碎組織微小標(biāo)本，經(jīng)高速離心、伊紅滴染前期預(yù)處理(圖1)，在包埋時(shí)能較清晰的看到組織，易于包埋，且經(jīng)過伊紅滴染的組織更易于分辨，后期切片中也能極大減少誤修的概率，以確保極小組織精準(zhǔn)切片(圖2)。經(jīng)過處理的活檢標(biāo)本多數(shù)鏡下能觀察到腺上皮細(xì)胞、炎性細(xì)胞、黏膜上皮細(xì)胞等(圖3)。

①②③圖1 預(yù)處理后黏液樣組織圖2 切片染色后大體觀圖3 切片染色后鏡下觀

3 討論

目前臨床醫(yī)師在內(nèi)鏡下取出的微小組織標(biāo)本通常采用濾紙作為載體以減少顆粒樣微小組織的缺失，但黏液樣組織含水量高，極易吸附在濾紙上，更不利于取材，婦科ECC操作時(shí)使用不沾墊作為載體可以進(jìn)一步提高臨床取材成功率[3]，但對于如何提高送檢到病理科的內(nèi)鏡、纖支鏡等黏液樣碎小標(biāo)本的組織處理方法仍不明確。

病理科的微小組織標(biāo)本主要通過浸染伊紅提高組織的分辨率以利于切片[4]，以及部分采用瓊脂預(yù)包埋的方法進(jìn)行干預(yù)[5]。雖然這些方法在一定程度上可以防止樣本丟失，但瓊脂預(yù)包埋因受其濃度影響不易把控[6]，在操作上帶來不便。本實(shí)驗(yàn)主要針對ECC、支氣管鏡活檢的標(biāo)本，組織黏液多且部分呈散在分布于固定液中，直接取材后進(jìn)行脫水處理，黏液極易滲透到包埋紙外，導(dǎo)致出現(xiàn)組織缺失無法包埋，或組織貼附在包埋紙表面增加包埋難度，這些貼附的組織在刮取包埋的過程中也會造成進(jìn)一步遺漏。

采用高速離心技術(shù)時(shí)以最快降速將組織進(jìn)行充分沉淀，黏液碎組織形成聚集，這些成團(tuán)的組織再滴加伊紅預(yù)染并交由取材醫(yī)師進(jìn)行紙包，經(jīng)過離心成團(tuán)的組織較為致密，在后續(xù)組織脫水、透明處理的過程中不易從包埋紙內(nèi)滲透，由于預(yù)先滴加伊紅在包埋時(shí)能清楚看到組織，可對技術(shù)員后期包埋及切片提供有利條件。