宰國真 李維山 何曉燕

非小細胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）患者占肺癌患者的85%，且大約70% 的患者處于中晚期。近幾年在我國發(fā)病率逐漸上升，患者的生活及健康受到嚴重影響［1-2］。近年來，隨著遺傳學、分子生物學等科學實驗室檢測方法的飛速發(fā)展，其在臨床實踐中的廣泛應用，肺癌的診斷和治療也取得了一定的進展［3］。然而缺乏有效的早期發(fā)現和診斷方法，大多數患者在被發(fā)現時失去了手術的機會，導致患者存活時間不到10%［4］。Yes 相關蛋白1（YAP1）是一種多功能細胞內心和轉錄共活劑，在正常細胞的信號轉導和基因轉錄調控中發(fā)揮作用［5］。研究發(fā)現，miR-200a 的異常表達量與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有一定的關系，miR-200a 的表達量在大多數惡性腫瘤中受到抑制或激活，其作用類似于腫瘤抑制基因或腫瘤基因［6］。目前YAP1 蛋白及miR-200a 在肺癌中的表達量研究很少，作用機制也不清楚?；诖?，本研究為探討非小細胞肺癌中miR-200a 與YAP1 表達量在癌組織和癌旁組織的相關性及其臨床病理意義。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年7月至2020年6月本院和濟源市腫瘤醫(yī)院收治的259 例非小細胞肺癌患者術后切除的腫瘤組織及癌旁組織為本次研究對象。納入標準：①本研究所有患者均符合《美NCCN 非小細胞肺癌治療指南》［7］對非小細胞肺癌的診斷標準；②所選患者均為初次治療且未接受放化療，臨床病理資料完整。排除標準：①患者合并全身感染或者其它腫瘤患者；②近3 個月有影響miR-200a、YAP1 表達量水平的相關藥物及手術治療者；③有嚴重心、肝、腎疾病等對本實驗有干擾者。

1.2 RT-PCR 方法檢測miR-200a及YAP1的表達量

實驗所需引物由上海生工生物科技有限公司合成。miR-200a 上游引物：5′-AGTATGTCAGTAGCATGACGAGGT-3′；miR-200a 下游引物：5′-ATTGATGGCAGTAGCAGTAGCTAA-3′。YAP1上游引物：5′-ACCCACAGCTCAGCATCTTC-3′；YAP1下游引物：5′-TCATGGCAAAACGAGGGTCA-3′。

用TRIZOL 試劑（Invitrogen）按照操作說明書提取肺癌組織、癌旁正常組織的總RNA，提取的RNA 經NanoDrop2000C（美國，Thermo Scientific）檢測其濃度和純度，A260/A280 比值在1.9 左右視為后續(xù)實驗使用樣本。以其為模板嚴格按照PrimeScript RT reagent Kit 反轉錄試劑盒（日本，Takara）說明書要求逆轉錄合成cDNA，采用SYBR Green PCR 試劑盒（美國，Thermo Fisher Scientific）進行PCR，終體積25 μL。每個樣本設三個復孔。擴增條件為：預變性95℃10 min，進入循環(huán)，95℃15 s，58℃30 s，擴增40 個循環(huán)。以U6 作為內參照校正，用2-△△Ct法分析基因的相對表達量。

1.3 統(tǒng)計學方法

數據處理運用SPSS 25.0 統(tǒng)計進行分析；計數資料以用（±s）表示，符合正態(tài)分布的計量平均數資料并行t檢驗或單因素方差分析；計數資料以n（%）表示，行卡方檢驗；預測效能應用ROC 曲線評價；P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 miR-200a、YAP1 表達量與非小細胞肺癌病理特征關系

miR-200a 與YAP1 表達量在癌組織和癌旁組織的平均年齡、性別、病理類型、腫瘤大小比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。miR-200a 表達量與YAP1 表達量的分化程度、淋巴結轉移比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 miR-200a 與YAP1 表達量在癌組織和癌旁組織中的比較

miR-200a、YAP1 在非小細胞肺癌組織表達量比癌旁組織較高，YAP1 的非小細胞肺癌組織表達量水平明顯高于miR-200a 的表達量水平，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 miR-200a、YAP1 與非小細胞肺癌的關系

ROC 曲線顯示，miR-200a 面積0.689 比YAP1的0.666 大，miR-200a 與非小細胞肺癌關系密切，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3、圖1。

3 討論

研究表明，YAP 是Hippo 通路的核心效應因子，其主要生物效應是調節(jié)細胞之間的接觸抑制，保持細胞增殖和凋亡之間的平衡［8］。YAP 的過度表達量會導致接觸抑制的喪失、細胞增殖過多和凋亡不足［9］。目前miR-200a 的異常表達量與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關。研究發(fā)現，miR-200a 在神經母細胞瘤中的表達量明顯低于相鄰組織。通過靶向AP-2γ 基因抑制腫瘤細胞增殖和腫瘤可以實現miR-200a 的上調節(jié)表達量，miR-200a在乳腺癌中的表達量減少［10-12］。在多種腫瘤細胞中發(fā)現miR-200a 基因過表達量促進腫瘤發(fā)生發(fā)展，但目前為止國內外相關文獻研究甚少，所選患者中miR-200a、YAP1 在非小細胞肺癌組織表達量比癌旁組織較高。

本研究為探討結果提示miR-200a 與YAP1 在非小細胞肺癌的增殖表達量中有重要意義。YAP1是Hippo 的主要下游效應因子，可以調節(jié)組織平衡、器官體積和腫瘤形成［13］。Hippo 的某些成分可以抑制細胞增殖，促進凋亡，調節(jié)干細胞和祖細胞的增殖，從而在調節(jié)器官體積方面發(fā)揮重要作用［14］。Hippo 信號失活可導致YAP1 去磷酸化積聚于細胞核中，然后向上調節(jié)轉錄因子，從而調節(jié)與細胞增殖、干細胞活性和抗凋亡相關的基因表達量［15］。

miR-200a、YAP1 對非小細胞肺癌ROC 曲線顯示，miR-200a 的ROC 曲線下面積0.689 比YAP1 的0.666 大，差異有統(tǒng)計學意義。提示miR-200a、YAP1 表達量水平與非小細胞肺癌臨床病理嚴重程度呈正相關。研究發(fā)現，miR-200a 可以通過靶向EGFR 抑制肺癌細胞的入侵和轉移，也可以通過靶向TSPAN1 來抑制肺腫瘤細胞的入侵［16］。

本研究存在一定局限性。首先，本研究納入的樣本主要為鱗癌和腺癌，對于其他類型的非小細胞肺癌未進行納入研究，可能導致研究結果不具有普遍性；其次，所選樣本數量較少，研究結果可能存在差異；最后，未進行生存分析及長期隨訪，對非小細胞肺癌中miR-200a 與YAP1 表達量在癌組織和癌旁組織的相關性未能進行長期研究。

綜上所述，miR-200a、YAP1 表達量水平與非小細胞肺癌臨床病理嚴重程度呈正相關，對非小細胞肺癌診斷有一定預測價值。

表1 miR-200a、YAP1 表達量與非小細胞肺癌病理特征關系分析Table 1 Analysis of the relationship between the expression of miR-200a，YAP1 and the pathological characteristics of non-small cell lung cancer

表2 miR-200a 與YAP1 表達量在癌組織和癌旁組織中的比較（±s）Table 2 Comparison of the expression levels of miR-200a and YAP1 in cancerous tissues and adjacent tissues in cancerous tissues and adjacent tissues（±s）

表2 miR-200a 與YAP1 表達量在癌組織和癌旁組織中的比較（±s）Table 2 Comparison of the expression levels of miR-200a and YAP1 in cancerous tissues and adjacent tissues in cancerous tissues and adjacent tissues（±s）

組別癌組織癌旁組織t/χ2值P 值n 259 259 miR-200a 表達量1.78±0.52 0.62±0.06 35.664 0.000 YAP1 表達量2.78±0.79 1.62±0.50 19.968 0.000

表3 miR-200a、YAP1 與非小細胞肺癌的關系比較Table 3 Comparison of the relationship between miR-200a，YAP1 and non-small cell lung cancer

圖1 miR-200a、YAP1 與非小細胞肺癌的ROC 曲線Figure 1 ROC curve of miR-200a，YAP1 and non-small cell lung cancer