陳 芳，陳 黎，肖子靖，杜 曉，常明泉#

(1.十堰市太和醫(yī)院藥學部，湖北 十堰 442000； 2.湖北醫(yī)藥學院藥學院，湖北 十堰 442000)

Δ基金項目：湖北省衛(wèi)鍵委項目(No.WJ2019M057)；太和科研基金項目(No.2018JJXM057)

*副主任藥師。研究方向：醫(yī)院藥學。E-mail：13997800322@163.com

#通信作者：主任藥師。研究方向：新藥研究。E-mail：907622985@qq.com

目前，一些婦科陰道炎癥的治療多采用具有抗菌消炎效果的化學溶液或復方中藥洗液稀釋后腔道沖洗、口服抗菌藥物和陰道栓劑給藥的三聯(lián)療法。皮膚科濕疹、特應性皮炎等的治療采用外用糖皮質(zhì)激素、保濕潤膚乳膏和口服抗組胺藥的三聯(lián)療法較多。近年來，中藥復方洗液陸續(xù)應用于陰道炎、濕疹及特應性皮炎的治療。婦安消疹洗液是湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院自主研發(fā)的中藥復方外用洗液，批準文號為鄂藥制字Z20180417，規(guī)格為250 ml/瓶[1-2]，該藥目前主要在皮膚科用于濕疹、汗皰疹及特應性皮炎的藥浴和外涂治療，在婦科主要用于陰道炎的沖洗治療。該藥的臨床療效已獲得肯定，但其藥理作用尚不明確。為了明確婦安消疹洗液治療上述疾病的作用機制，彌補藥理研究的空白，為臨床科學用藥建立依據(jù)，本研究采用平皿稀釋法研究其體外抑菌效果，建立炎癥小鼠實驗模型研究其抗炎效果。

1 材料

1.1 儀器

1374-A2型凈化工作臺(賽默飛世爾蘇州儀器有限公司)； WATER JNCKETED INCUBATCR型水套式恒溫培養(yǎng)箱(上海力申科學儀器有限公司)；HGZF-II-101-2型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海躍進醫(yī)療器械有限公司)；FST型耳打孔器(北京友誠嘉業(yè)生物科技有限公司，6 mm/11.5 cm)；zr-08型小鼠固定器(上海普辛儀器科技有限公司)；YC-300L型醫(yī)用冷藏箱(中科美菱低溫科技股份有限公司)；GL 1241-1SCN型分析天平(北京賽多利斯科學儀器有限公司，精度0.1 mg)；RE-52AX型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。

1.2 藥品與試劑

金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌及白色念珠菌株均來自湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院感染與免疫性疾病研究所；營養(yǎng)肉湯、瓊脂培養(yǎng)基購自青島海博生物技術(shù)有限公司(批號：161108)，二硝基氯苯(DNCB)(天門恒昌化工有限公司；規(guī)格：100 g；含量98.0%；批號：20181206)；0.9%氯化鈉溶液(青島海博技術(shù)有限公司；規(guī)格：100 ml；批號：20181112)；金歸洗液(浙江圣華藥業(yè)有限公司；批號：20190224)；婦安消疹洗液原液(湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院；批號：20180411)；高濃度婦安消疹洗液(取婦安消疹洗液原液100 ml在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上65 ℃旋轉(zhuǎn)濃縮至50 ml，即得)；中濃度婦安消疹洗液(同婦安消疹洗液原液)；低濃度婦安消疹洗液(取婦安消疹洗液原液50 ml加純化水按體積比1∶2的比例稀釋，攪拌均勻，即得)。

1.3 實驗動物

實驗動物取自湖北醫(yī)藥學院動物實驗中心，小鼠型號為C57BL/6/ICR，平均體重為(20±2)g，所用小鼠6個周齡，分組時雌雄均等，動物的使用許可證為SYXK(鄂)2016-0031；實驗許可證為SCXK(鄂) 2016-0008，實施場所在湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院武當中醫(yī)藥研究所動物實驗室。實驗小鼠每日給予專用固體鼠食，保證充足飲水和所需的維生素，在恒濕、恒溫的條件下飼養(yǎng)。

2 方法

2.1 體外抑菌實驗

在超凈工作臺下按照無菌規(guī)程操作，采用平皿營養(yǎng)基打孔灌藥法[3-5]。取干熱滅菌后的10 ml玻璃試管6支，編號。1號試管加入婦安消疹洗液原液3 ml，第2、3及4號試管各加入0.9%氯化鈉溶液3 ml，吸取婦安消疹洗液原液3 ml加入2號試管中，混勻，取2號試管中混合均勻的婦安消疹洗液3 ml于3號試管中，搖勻，然后取3號試管中混合均勻的婦安消疹洗液3 ml于4號試管中，混勻，5號試管中加金歸洗液原液3 ml，6號試管加入無菌0.9%氯化鈉溶液3 ml。取瓊脂培養(yǎng)基在水浴上加熱熔化，放至約40 ℃，加20 ml至滅菌平皿中，搖勻，待凝固，用無菌打孔器(直徑6 mm)在平皿培養(yǎng)基上均勻打4孔，將各平皿孔中分別加入第1—6號試管中相應溶液0.2 ml，最后再將金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均勻接種于各孔四周,于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，取出，測量每個平皿中抑菌圈直徑，取均值，比較抑菌效果。

2.2 DNCB致炎實驗

將60只合格小鼠分為6組，每組10只，分別為空白組、模型組、金歸洗液組和婦安消疹洗液組(包括低、中及高濃度組)，每組雌雄均等[6-8]。用剃毛器小心剃去每組小鼠左右耳廓毛發(fā)，注意剃毛時勿傷及皮膚，備皮面積約為2 cm×2 cm，備皮完成后逐一檢查小鼠耳廓，將有損傷的小鼠淘汰，替補合格小鼠。左耳為實驗區(qū)，右耳為參照區(qū)，小鼠左廓造模，對空白組和模型組小鼠左耳剃毛處分別涂抹0.9%氯化鈉溶液0.1 ml，金歸洗液組小鼠涂抹金歸洗液原液0.1 ml，婦安消疹洗液低、中及高濃度組小鼠分別給予相應濃度的婦安消疹洗液0.1 ml。24 h后，空白組小鼠不給予任何藥物，模型組、金歸洗液組和婦安消疹洗液組小鼠左耳廓剃毛處均給予5%DNCB丙酮溶液0.05 ml使其致敏，24 h后再給予同樣劑量的5%DNCB丙酮溶液1次，以增強其致敏效果。于第6日給藥1 h后，對每組小鼠行激敏攻擊，方法為在左耳廓兩面均勻涂抹5%DNCB丙酮溶液20 μl，涂抹1 h后將小鼠處死，在每組小鼠左耳和右耳對應處用打孔器分別打取同樣面積大小的耳片，用分析天平分別稱重，依法計算各組小鼠的耳腫脹度，計算各組藥物對小鼠炎癥的抑制率，抑制率=(模型組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度)/模型組耳腫脹度×100%，比較抗炎效果。

2.3 統(tǒng)計學方法

3 結(jié)果

3.1 體外抑菌效果

婦安消疹洗液對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌及白色念珠菌抑菌圈(mm)的大小代表其抑菌效果，實驗結(jié)果顯示，4個菌株抑菌圈隨該藥液稀釋倍數(shù)的增加而減小，表明婦安消疹洗液對上述4個菌種均有一定的體外抑菌作用，其抑菌效果與藥液的濃度具有量效關(guān)系，見表1。

表1 婦安消疹洗液體外抑菌效果抑菌圈，n=4)Tab 1 Antibacterial effects of Fu’an Xiaozhen lotion in vitro mm/antibacterial circle, n=4)

3.2 抗炎效果

婦安消疹洗液各濃度均能不同程度抑制由5%DNCB丙酮溶液引起的小鼠耳腫脹度，其中，婦安消疹洗液中、高濃度組的炎癥抑制效果與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，婦安消疹洗液對DNCB的抗炎效果隨著藥液濃度的升高而增強，其抗炎強度具有量效關(guān)系，見表2。

4 討論

中醫(yī)范疇的肝郁化熱、脾虛聚濕、濕熱下注及帶下病可能是由念珠菌引起的附件炎與陰道炎[9]，該病常瘙癢難忍，使人焦躁不安，羞于啟齒，影響生活。而皮膚病中的特應性皮炎、濕疹不僅有瘙癢癥狀，也常伴有金黃色葡萄菌、綠膿桿菌感染。因此，對上述疾病的治療，根據(jù)具體病癥，除給予基礎治療并應用相應口服藥物外，采用具有抗菌消炎、止癢的中藥洗液沖洗、涂搽也能產(chǎn)生獨特的效果[10]。隨著婦安消疹洗液用途的拓寬，雖然在一些疾病的治療中獲得了肯定療效，但不同疾病具有不同的病理特征、病因病機，包括所感細菌種類。因此，對抗炎藥理作用、抗菌譜進行多角度的研究，為臨床應用提供科學依據(jù)十分必要。

表2 婦安消疹洗液抗炎效果Tab 2 Anti-inflammatory effects of Fu’an Xiaozhen lotion

婦安消疹洗液是以野菊花、苦參、漏蘆、土茯苓、蛇床子和白礬6味中藥組方，經(jīng)過水煎提取、過濾、沉淀、離心、濃縮及滅菌等工藝制備而成的中藥復方外用洗液。野菊花中所含糖苷、黃酮、萜類具有抗炎、抗病毒作用，對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌和白色念珠菌等能發(fā)揮較強的抑菌作用[11-12]?？鄥A、蛇床子素可殺蟲止癢、抗過敏，具有抗組胺樣作用；土茯苓中的落新婦苷、漏蘆中的噻吩類及萜類物質(zhì)具有抗菌消癰、改善外周微循環(huán)的功效，通過抑制組胺、毒性物質(zhì)的釋放產(chǎn)生抗炎作用，上述活性物質(zhì)能減輕DNCB誘導的小鼠耳腫脹炎癥反應[13-14]。蛇床子中的花椒毒酚除具有抗炎作用外，還具有一定的鎮(zhèn)痛與表面麻醉效果，其可能通過抑制N-型鈣通道，阻滯小鼠神經(jīng)傳導[15]。落新婦苷具有選擇性免疫抑制作用，可對小鼠炎癥及超敏反應產(chǎn)生抑制作用，通過抑制組胺、毒性物質(zhì)的釋放減輕DNCB誘導小鼠的耳腫脹[16-17]。噻吩類物質(zhì)的抗炎、改善外周微循環(huán)作用可活化小鼠皮損部位的細胞因子，促進其游走，從而對小鼠因DNCB導致的滲出、結(jié)痂產(chǎn)生修復作用[18-19]。白礬具有較強的蛋白凝固作用，低濃度有收斂、消炎和防腐作用，其溶液通過進入小鼠皮下組織細胞，抑制、延遲細胞介導反應，降低免疫球蛋白與細胞表面受體的結(jié)合，抑制白細胞介素的合成與釋放，促進Th1/Th2的平衡，產(chǎn)生免疫抑制作用，從而改善外周免疫狀態(tài)[20-21]。本研究所用對照藥物金歸洗液也屬于中藥復方外用洗液，具有抗菌消炎、清熱、祛濕和止癢的作用，對接觸性皮炎、脂溢性皮炎、神經(jīng)性皮炎、外陰瘙癢及帶下量多具有良好的治療作用。

本研究結(jié)果顯示，婦安消疹洗液對所選實驗菌株具有良好的抑菌作用，對DNCB誘導的小鼠耳腫脹具有顯著的抑制作用，這與婦安消疹洗液組方藥物所含活性成分有關(guān)。由白色念珠菌感染引起的婦科附件炎及陰道炎癥應用中藥洗液灌注沖洗有利于直接殺滅細菌，還可促進感染部位創(chuàng)面愈合，抑制炎性滲出(白帶)。婦安消疹洗液體外抑菌抗炎效果研究填補了該制劑基礎研究的部分空白，可為該制劑在臨床中的合理、科學用藥提供依據(jù)。其他相關(guān)藥理研究將陸續(xù)開展。