夏靜雪 趙 琳 周海珍

1.河南峰創(chuàng)檢測(cè)技術(shù)有限公司 河南 鄭州 450001；2.漯河食品職業(yè)學(xué)院 河南 漯河 462300

引言

巴比妥類藥物屬于巴比妥酸的衍生物，是一類作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的鎮(zhèn)靜劑，還可以用作抗焦慮藥、安眠藥、抗痙攣藥，但長(zhǎng)期使用則會(huì)導(dǎo)致成癮性，吸毒成癮者服用后可減輕其焦慮，與鴉片類毒品進(jìn)行混合服用后，能夠達(dá)到更強(qiáng)烈刺激的目[2]。

目前巴比妥類藥物提取方法主要是液液萃取、固相萃取等凈化[2，4]，檢測(cè)方法主要有液質(zhì)譜聯(lián)用法、氣質(zhì)譜聯(lián)用法。實(shí)驗(yàn)對(duì)肌肉組織中的巴比妥類藥物，經(jīng)乙腈提取，固相萃取柱凈化，利用LCMSMS檢測(cè)，取得了較好的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 XevoTQLCMSMS，Waters公司；ML802E型電子天平，MettlerToledo公司；VX-III型多管平行振蕩器，Targin公司；GL-21M型離心機(jī)，湘儀離心機(jī)有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置，Eyela公司；固相萃取裝置，Waters公司。

1.2 試劑和材料 巴比妥類標(biāo)準(zhǔn)品，中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；乙腈(質(zhì)譜純)、甲醇(色譜純)和乙酸乙酯(色譜純)均購(gòu)自Fisher公司；水為屈臣氏水；PEP-2固相萃取柱，60mg/3cc，Agela公司。

1.3 試劑及標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.3.1 0.2mol/L乙酸鈉緩沖液(p H5.2)。

1.3.2 0.1%乙酸乙腈溶液。

1.3.3 淋洗液Ⅰ 乙酸鈉緩沖液-甲醇(90+10)。

1.3.4 淋洗液Ⅱ 正己烷-乙酸乙酯(95+5)。

1.3.5 洗脫液 正己烷-乙酸乙酯(50+50)。

1.3.6 標(biāo)準(zhǔn)系列的配制 用乙腈+水(10+90，v/v)溶液將標(biāo)準(zhǔn)使用液稀釋成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

1.4 儀器條件

1.4.1 液相色譜條件[5]色譜柱：WatersBEH-C18柱(2.1×50mm，1.7μm)；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)相：A：水，B：乙腈，梯度洗脫。

1.4.2 質(zhì)譜條件 采用ESI-多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式，掃描方式：負(fù)離子掃描：毛細(xì)管電壓：2.5KV；離子源溫度：150℃；干燥器溫度：400℃，干燥氣流量：900L/h；錐孔反吹氣流量：35L/Hr。選擇離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件見(jiàn)表1所示。

表1 MRM模式下巴比妥類的檢測(cè)條件

1.5 樣品處理

1.5.1 提取 稱取樣品2.00±0.01g于50ml離心管中，加入適量無(wú)水硫酸鈉和10m L0.1%乙酸乙腈溶液，振蕩混勻10min，離心5min，取上清液于另一離心管中，重復(fù)提取一次，合并上清液。在提取液中加入10mL乙腈飽和的正己烷，振蕩混勻10min，離心5min，取下層乙腈于加有5ml正丙醇的50ml蒸餾瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45℃蒸干。用5mL淋洗液Ⅰ復(fù)溶，待凈化。

1.5.2 凈化 先后用5m L甲醇和5m L乙酸鈉緩沖液預(yù)淋洗，把提取液上柱。用5m L淋洗液Ⅰ洗滌柱子，并徹底抽干，再用5mL正己烷和5m L淋洗液Ⅱ淋洗，最后用10mL洗脫液洗脫。收集洗脫液氮?dú)獯蹈?。?.0mL乙腈+水(10+90)溶解殘?jiān)?，濾膜過(guò)濾，上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理的優(yōu)化 由于生物檢材基質(zhì)成分復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)通過(guò)溶劑提取后，選取PEP-2柱及HLB柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[1]，結(jié)果表明使用PEP-2柱巴比妥類回收率要比HLB柱略高，但過(guò)PEP-2柱時(shí)，由于樣品較臟，需抽真空或加壓處理。

2.2 儀器條件的優(yōu)化[1]巴比妥類在ESI-電離模式下易失去H形成較為穩(wěn)定的[M-H]-的分子離子，本試驗(yàn)采用全掃描和子離子掃描獲得巴比妥類物質(zhì)的母離子掃描圖和特征碎片離子掃描圖，選擇最優(yōu)的定量及定性離子，優(yōu)化后的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件見(jiàn)表1。

圖1 巴比妥類特征碎片離子掃描圖

2.3 回收率和精密度 分別以選定的定量離子峰面積y對(duì)含量x(ng/mL)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，三種巴比妥加標(biāo)量分別為1、2、5μg/kg時(shí)對(duì)應(yīng)的回收率及精密度見(jiàn)表2。

表2 肌肉組織中巴比妥類回收率及精密度

3 結(jié)論

采用LC-MS/MS測(cè)定肌肉組織中的巴比妥類藥物殘留量，方法簡(jiǎn)單、快速且靈敏度高，雜峰干擾小。方法定量限為1.0μg/kg，線性范圍為0.5-10ng/mL，在肌肉組織樣品中的回收率為63%-87%，RSD為1.6%-13.4%。本方法可適用于司法鑒定中檢測(cè)肌肉組織中巴比妥類的定性定量分析。