劉 賢，吳勝軍，李志明，茹寶瑞，薛亞輝，李新建*

（1.河南省畜牧總站，河南鄭州 450008；2.河南農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，河南鄭州 450046）

畜禽遺傳資源是生物多樣性的重要組成部分，是提升種業(yè)國際競爭力、實現(xiàn)畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)，同時還可滿足人們多樣化消費需求，提高國民生活質(zhì)量和水平[1]。近些年來，國家和各級政府對畜禽遺傳資源保護工作重視程度不斷提高，以政策和資金大力扶持，畜禽遺傳資源保護體系初步形成[2]。河南省有淮南豬、南陽黑豬、確山黑豬、豫西黑豬4 個地方豬遺傳資源，分別建設(shè)有淮南豬國家級保種場和南陽黑豬、確山黑豬2個省級保種場，保種場的建設(shè)使優(yōu)良種質(zhì)得以保存，但是改革開放以來，隨著社會經(jīng)濟發(fā)展、畜牧業(yè)生產(chǎn)方式轉(zhuǎn)變，以及國外高瘦肉率豬種的引進，地方豬遺傳資源的生存環(huán)境發(fā)生了改變，使河南省大部分地方豬群體數(shù)量急劇下降，加之長期的無序雜交、保種方法不科學等因素，導致一些優(yōu)秀基因在尚未研究其價值之前丟失，對地方豬的遺傳多樣性造成影響。本研究旨在通過對河南省淮南豬、南陽黑豬、確山黑豬及近期發(fā)現(xiàn)的豫西黑豬4 個地方豬品種生存狀況的調(diào)查和評價，為河南省地方豬保種工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 實地調(diào)查 2017 年6 月，在淮南豬、確山黑豬、南陽黑豬、豫西黑豬中心產(chǎn)區(qū)和分布區(qū)域，對各品種分布、數(shù)量、品種保護和開發(fā)利用等情況進行調(diào)查。

1.2 文獻調(diào)研 查閱《中國畜禽遺傳資源志.豬志》[3]、《河南省地方優(yōu)良畜禽品種志》[4]等相關(guān)文獻。

1.3 受威脅程度評價 按照Simon[5]以及馬月輝等[6]提出的畜禽遺傳資源受威脅程度評價方法進行評價。

1.3.1 受威脅程度 根據(jù)各品種保存100 年的近交系數(shù)，可將受威脅程度分為安全、潛在威脅、最低威脅、威脅、嚴重威脅5 類。根據(jù)馬、牛、羊、豬、禽的世代間隔及保存100 年的近交系數(shù)，得出群體有效大小，見表1。

1.3.2 有效群體大小 有效群體大小按照公式Ne=4Nm Nf/（Nm+Nf）進行計算，其中，Nm為參加繁育的公豬數(shù)量，Nf為參加繁育的母豬數(shù)量。

1.3.3 群體動態(tài)變化趨勢和外來種雜交因素影響 群體動態(tài)變化趨勢和雜交程度是受威脅程度的影響因素，因此，當出現(xiàn)繁育母畜數(shù)下降且低于1 000，或群體數(shù)量下降幅度大于50%，或群體雜交比例大于20%的情況之一時，將分類等級劃到威脅程度高一級類型。

1.4 群體遺傳多樣性分析 在地方豬保種場內(nèi)采集南陽黑豬、確山黑豬、淮南豬及豫西黑豬的耳組織樣品，提取DNA 并經(jīng)電泳檢測質(zhì)量。進行PCR 擴增，上游引物為：5'-AGGAGACTAACTCCGCCAT-3'，下游引物為：5'-CGCGGATACTTGCATGTGT-3'。將產(chǎn)物電泳檢測合格后進行Sanger 雙向測序。使用DNAstar 將序列核對和拼接；利用DNAsp 統(tǒng)計單倍型數(shù)量、單倍型多樣度、核苷酸多樣度、Tajima's D、Fu's FS；使用Mega 以鄰接法（NJ 法）構(gòu)建進化樹。

表1 各受威脅等級群體有效大小

2 結(jié)果與分析

2.1 分布區(qū)域及變化情況 由表2 可見，與2006 年相比，2017 年淮南豬、南陽黑豬、確山黑豬3 個地方豬遺傳資源的分布范圍基本無變化。豫西黑豬為新發(fā)現(xiàn)資源，分布范圍變化情況未知。

表2 2006 年和2017 年河南省地方豬品種分布范圍

2.2 存欄數(shù)量及變化趨勢 河南省地方豬品種存欄數(shù)量見表3，2017 年淮南豬與南陽黑豬存欄數(shù)量比2006 年分別下降了56.7%、75.7%，確山黑豬存欄數(shù)量比2006年增加了207.7%，豫西黑豬由于發(fā)現(xiàn)時間較短，部分資料暫時缺失。

表3 1986—2017 年河南省地方豬品種存欄量 萬頭

2.3 受威脅程度評價結(jié)果 由表4 可知，淮南豬處于受嚴重威脅狀態(tài)，南陽黑豬處于受威脅狀態(tài)，確山黑豬存在潛在威脅。豫西黑豬為新發(fā)現(xiàn)畜禽遺傳資源，無2006 年群體數(shù)量，無法開展評價。

2.4 河南地方豬遺傳多樣性分析 對4 個地方豬群體進行基于線粒體DNA D-loop 序列的遺傳多樣性分析，結(jié)果見表5，河南省地方豬的單倍型多樣度（Hd）在0.788 2～0.854 5，核苷酸多樣度（Pi）在0.003 6～0.004 6；中性檢驗的Tajima's D 值在-1.254 2～0.987 6，F(xiàn)u'Fs 值在-11.043 4～3.403 6，且差異均不顯著（P＞0.05），說明這4 個群體符合中性進化。

表4 河南省3 個地方豬遺傳資源受威脅程度評價結(jié)果

表5 河南地方豬線粒體DNA D-loop 區(qū)遺傳多樣性指數(shù)

對4 個地方群體間的群體分化系數(shù)（Fst）和遺傳距離進行分析，結(jié)果見表6。結(jié)果顯示，F(xiàn)st 范圍在0.077 0～0.171 6，其中，遺傳分化最小的是南陽黑豬和確山黑豬，遺傳分化最大的是淮南豬和確山黑豬；基于Nei's 遺傳距離數(shù)值范圍在0.004 9～0.010 0，其中，遺傳距離最小的是豫西黑豬和確山黑豬，遺傳距離最大的是南陽黑豬和淮南豬。分析結(jié)果顯示了4 個群體各自的品種特異性與地域性。

表6 河南地方豬群體的遺傳距離和遺傳分化指數(shù)

對河南省4 個地方豬種進行聚類分析，結(jié)果見圖1，與其他豬種相比，南陽黑豬與確山黑豬親緣關(guān)系較近，聚為同一分支；淮南豬與其他地方豬種親緣關(guān)系則較遠，這與其地域分布關(guān)系也較為相符。

圖1 基于Nei's 遺傳距離構(gòu)建的河南4 個地方豬群體的NJ 系統(tǒng)發(fā)育樹

3 討 論

3.1 分布范圍變化分析 淮豬分布于淮河流域，包括淮北豬、山豬、灶豬、定遠豬、皖北豬和淮南豬6 個類群，淮南豬主產(chǎn)于河南省信陽市的固始、商城、光山、羅山、新縣五縣，據(jù)當?shù)厥妨嫌涊d該品種在當?shù)匾延幸磺Ф嗄甑臍v史[3,7]；南陽黑豬主產(chǎn)區(qū)淅川縣地處伏牛山南麓，地形主要為淺山、丘陵和緩坡；確山黑豬主產(chǎn)區(qū)確山縣東臨黃淮平原，西為桐柏山、伏牛山的連接地帶；豫西黑豬主產(chǎn)區(qū)為豫西山區(qū)的欒川、盧氏兩縣，該區(qū)域山勢陡峭，道路崎嶇，長期處于一種自然半封閉狀態(tài)。經(jīng)考證，在豫南、豫西南和豫西的山區(qū)群眾都有食用黑豬肉和制作臘肉的傳統(tǒng)習俗。地方豬分布范圍未發(fā)生變化，說明淮南豬、南陽黑豬、確山黑豬和豫西黑豬的原產(chǎn)地具有一定的封閉性，傳統(tǒng)的養(yǎng)殖習俗和飲食文化保留較好。

3.2 數(shù)量變化分析 20 世紀60 年代以來，為滿足人民對瘦肉型豬肉的需求，我國大量從國外引進豬種，開展豬雜交改良工作，對我國地方豬種造成了極大地沖擊，存欄數(shù)量下降，選育工作幾乎停滯，保種幾乎名存實亡[8-9]。近年來，由于畜牧業(yè)處于轉(zhuǎn)型升級發(fā)展時期，地方品種雖然具有耐粗飼、抗逆性強等優(yōu)點，但由于長期以來粗放飼養(yǎng)，尤其是在保種群不允許選擇的情況下，地方品種的一致性較差[10]，不適合當前畜牧業(yè)的標準化集約化生產(chǎn)方式。另外，保種場人員結(jié)構(gòu)老化、機制不靈活、地方豬保種目標不明確、技術(shù)開發(fā)和應(yīng)用嚴重滯后等因素，也使得地方豬優(yōu)質(zhì)特色不能發(fā)揮，因而地方豬保種工作舉步維艱[11]。最后，地方豬種質(zhì)資源優(yōu)異特性未被深入挖掘，其價值得不到體現(xiàn)[12]，導致在地方豬開發(fā)利用過程中，產(chǎn)品種類單一、附加值低，優(yōu)質(zhì)優(yōu)價的市場機制尚未形成，市場綜合競爭力較弱。綜上所述，受以上因素影響，河南省地方豬存欄數(shù)量逐年下降。

3.3 受威脅程度分析 淮南豬、南陽黑豬純種數(shù)量的下降，勢必導致參與繁育的種豬數(shù)量下降，群體有效含量低，存在近交系數(shù)上升的風險。確山黑豬雖然群體數(shù)量上升，但是主要集中在保種場養(yǎng)殖，保種場內(nèi)血統(tǒng)數(shù)量有限，近交風險仍較大，因此仍存在潛在威脅。豫西黑豬由于發(fā)現(xiàn)時間較短，“提純復壯”仍然是近期的工作重點。

3.4 遺傳多樣性分析 本研究中的4 個河南地方豬群體中，單倍型多樣度在0.788 2～0.854 5、核苷酸多樣度在0.003 6～0.004 6。本研究中的群體單倍型多樣度值低于二花臉豬（0.947）、桂中花豬（0.942）、合作豬（0.883），與保山豬（0.828）、五指山豬（0.838）處于同等水平；核酸多樣度低于陸川豬（0.007 4）、滇南小耳豬（0.005 21）、合作豬（0.005 49），與二花臉豬（0.003 73）、保山豬（0.003 71）、五指山豬（0.003 34）處于同等水平[13-16]。這說明河南省地方豬群體的遺傳多樣性遭受威脅，急需種質(zhì)資源保護。

在表示群體間的遺傳分化程度時，若Fst 介于0～0.05，表示遺傳分化極??；若Fst 介于0.05～0.15，表示遺傳分化中等；若Fst 介于0.15～0.25，表示遺傳分化較大[17]。本研究中的4 個群體之間屬于遺傳分化程度中等或較大，可能是由于地形與地勢影響了群體之間的基因交流，進而形成了各自的群體特征。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果顯示，河南地方豬遺傳資源的分布范圍雖然基本未發(fā)生變化，但淮南豬、南陽黑豬的群體數(shù)量出現(xiàn)大幅下降。淮南豬已處于受嚴重威脅狀態(tài)，南陽黑豬處于受威脅狀態(tài)，確山黑豬存在潛在威脅。豫西黑豬為新發(fā)現(xiàn)畜禽遺傳資源，有一定群體數(shù)量，重點是開展保種和提純復壯工作。對此提出以下建議：第一，完善河南省地方豬保種體系，采取分點保種、多場保種措施，防止依賴“一點一場”帶來的資源流失風險；第二，建設(shè)省級地方畜禽品種基因庫，開展精液、體細胞等遺傳材料保存；第三，建立地方豬品種種質(zhì)評價體系，加強對優(yōu)良種質(zhì)的認定、登記，確保地方品種優(yōu)良特性不丟失；第四，加大地方豬遺傳特性挖掘和利用，提高自主育種能力；第五，加快推進地方豬品種優(yōu)異性狀的開發(fā)利用，以優(yōu)質(zhì)豬肉開發(fā)、延伸產(chǎn)業(yè)鏈條等手段提高產(chǎn)品附加值，形成“以用促?！钡牧夹詸C制。