郭曉瑞，武 威，陳 靜，王友利，周華金，袁建敏

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 100193）

延長蛋雞的飼養(yǎng)周期，提高經(jīng)濟效益是營養(yǎng)學(xué)研究的熱點。蛋雞進入產(chǎn)蛋后期，由于體內(nèi)新陳代謝的變化導(dǎo)致其生殖與代謝機能逐漸衰退，腸道結(jié)構(gòu)與功能受到破壞，消化酶數(shù)量和活性下降，從而降低機體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用能力，最終影響生產(chǎn)性能[1]。馬寧[2]研究發(fā)現(xiàn)，育成期農(nóng)大3 號蛋雞和海蘭褐蛋雞各腸段相對重量、腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)與50 周齡成年階段的趨勢不同。馬丹丹[3]研究發(fā)現(xiàn)，隨著周齡增加，太行雞各段消化道相對長度逐漸降低，且腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，但消化酶活性基本保持不變。王淑紅等[4]研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)蛋后期蛋雞體重顯著影響產(chǎn)蛋量，但對蛋重影響不顯著，體重越大則產(chǎn)蛋數(shù)越低。本研究前期發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)蛋高峰期農(nóng)大3號蛋雞消化、吸收機能和養(yǎng)分代謝率顯著高于海蘭褐蛋雞；如不考慮品種因素，產(chǎn)蛋高峰期體重偏輕組蛋雞消化、吸收機能顯著高于體重正常組[5]。但產(chǎn)蛋后期不同體重農(nóng)大3 號和海蘭褐蛋雞消化生理功能是否仍然存在差異；產(chǎn)蛋后期蛋雞脂肪積累，超重現(xiàn)象嚴重，產(chǎn)蛋后期蛋雞體重對消化生理指標(biāo)有何影響等問題仍待探究。

因此，本實驗旨在比較產(chǎn)蛋后期不同體重農(nóng)大3 號蛋雞和海蘭褐蛋雞消化生理的差異，為制定農(nóng)大3 號蛋雞適宜的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和體重標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)和理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 實驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理 試驗采用2×2 因子設(shè)計，采用76 周齡體重偏大（平均體重/標(biāo)準(zhǔn)體重為1.2）、體重正常（平均體重/ 標(biāo)準(zhǔn)體重為1.0）健康的商品代農(nóng)大3 號蛋雞與海蘭褐蛋雞共216 只，分為4 個處理，每處理6 個重復(fù)，每重復(fù)9 只蛋雞，體重分組見表1。采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，其組成及營養(yǎng)成分見表2。代謝日糧在基礎(chǔ)飼糧中添加0.5% TiO2，充分混勻，冷壓制粒。試驗于中國農(nóng)業(yè)大學(xué)涿州養(yǎng)殖基地進行，雞只采用舍內(nèi)籠養(yǎng)方式飼養(yǎng)，每個雞籠3 只蛋雞，自由采食和飲水。每日人工光照加自然補光16 h，黑暗8 h。雞舍配備濕簾風(fēng)機，縱向負壓通風(fēng)降溫。每日07:00 以及14:00 飼喂，15:00 收集雞蛋。按正常程序免疫和雞舍消毒。

表1 產(chǎn)蛋后期蛋雞分組

1.2 產(chǎn)蛋性能測定與代謝試驗 每天以重復(fù)為單位記錄蛋雞產(chǎn)蛋數(shù)和只數(shù)，計算各組蛋雞產(chǎn)蛋率、平均蛋重；每周測定各組蛋雞耗料量，計算平均日采食量、日均產(chǎn)蛋量和料蛋比（日采食量/日均產(chǎn)蛋量）。統(tǒng)計周期12 d。

采用指示劑法，預(yù)試期12 d，飼喂相同粉狀基礎(chǔ)料；正試期3 d，飼喂相同顆粒狀代謝料，最后一天收集8 h內(nèi)新鮮糞樣。挑揀出糞盤中羽毛、飼料，混勻噴灑10% 鹽酸溶液固氮，置于-20℃冰箱保存。通過檢測飼料和糞樣中能值、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和指示劑含量計算蛋雞表觀代謝能和粗蛋白質(zhì)、粗脂肪表觀代謝率。計算公式：

表2 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)成分

1.3 血液生化指標(biāo)測定 糞便收集完畢，在蛋雞自由采食狀態(tài)下，每個處理隨機選取6 只蛋雞進行翅下靜脈采血。血液經(jīng)3 000 r/min 離心10 min 制備血清。采用德國Prodia Diagnostics 試劑盒使用日立7600 全自動生化檢測儀（日本日立公司）檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總膽固醇、甘油三酯、尿酸、葡萄糖含量；采用南京建成生物工程研究所總膽汁酸試劑盒（E003-2）使用Multiskan MK3 酶標(biāo)儀（Thermo Fisher Scientific 公司）檢測血清膽汁酸含量；采用天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司試劑盒，使用GC—2010型免疫計算器（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）檢測三碘甲狀腺原氨酸（T3）和四碘甲狀腺原氨酸（T4）含量。

1.4 器官相對重量測定 采血結(jié)束后，每個處理每個重復(fù)選取1 只蛋雞麻醉致死，屠宰取樣。迅速分離腺胃、肌胃、肝臟、胰腺、輸卵管、卵巢（帶卵泡）。稱量腺胃、肌胃（去除食糜）、肝臟、胰腺、輸卵管、卵巢（帶卵泡）重量，用于器官相對重量的計算。

1.5 空腸消化酶活性測定 取空腸食糜、黏膜，糜蛋白酶（試劑盒編號：No.A080-3）、淀粉酶（試劑盒編號：No.C016-1）、脂肪酶（試劑盒編號：No.A054-2）以及空腸黏膜麥芽糖酶（試劑盒編號：No.A082-3）、蔗糖酶（試劑盒編號：No.A082 -2）活性均采用南京建成生物工程研究所試劑盒進行檢測，具體操作參考南京建成生物工程研究所試劑盒相關(guān)說明。胰腺、空腸食糜胰蛋白酶（試劑盒編號：BC2315）活性采用Solarbio 試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）檢測，檢測方法參考試劑盒說明書。

1.6 營養(yǎng)素轉(zhuǎn)運載體測定 取空腸分子樣于-80℃冰箱保存，用于測定脂肪酸轉(zhuǎn)運載體表達量?？漳c總RNA 的提取、反轉(zhuǎn)錄以及熒光定量PCR 操作方法參考Wang 等[6]的方法。目的基因以及內(nèi)參基因引物序列見表3，基因豐度表達的結(jié)果采用2-ΔΔCT進行分析比較。

表3 實時熒光定量PCR 引物序列

1.7 統(tǒng)計分析 所有數(shù)據(jù)均通過Grubbs 法進行異常值剔除，采用SPSS 21.0 的一般線性模型（GLM）進行雙因子方差分析，互作效應(yīng)差異顯著的數(shù)據(jù)采用Duncan's多重比較檢驗，以P＜0.05 作為差異顯著標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞生產(chǎn)性能比較 蛋雞品種、體重對其生產(chǎn)性能均無顯著互作效應(yīng)（P＞0.05）。農(nóng)大3 號蛋雞產(chǎn)蛋率、總蛋重、平均蛋重、日均產(chǎn)蛋量、日均采食量均顯著低于海蘭褐蛋雞。不考慮品種因素，體重正常組蛋雞產(chǎn)蛋率、總蛋重、日均產(chǎn)蛋量均顯著高于體重偏大組，但料蛋比顯著低于體重偏大組，其余指標(biāo)無顯著差異（圖1）。

2.2 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞器官相對重量和黃卵泡數(shù)比較 由圖2 可知，產(chǎn)蛋后期蛋雞品種、體重對肝臟相對重量具有顯著互作效應(yīng)，海蘭褐-體重正常＜海蘭褐-體重偏大＜農(nóng)大3 號-體重偏大＜農(nóng)大3 號-體重正常，海蘭褐蛋雞不同體重差異不顯著。農(nóng)大3 號蛋雞與海蘭褐蛋雞相比，肌胃、肝臟、卵巢相對重量顯著提高。其余器官指數(shù)差異不顯著。蛋雞品種、體重對大黃卵泡數(shù)存在顯著互作效應(yīng)，海蘭褐-體重正常＜農(nóng)大3號-體重偏大＜農(nóng)大3 號-體重正常＜海蘭褐-體重偏大，農(nóng)大3 號蛋雞不同體重大黃卵泡數(shù)差異不顯著。不考慮品種因素，體重偏大組蛋雞大黃卵泡數(shù)顯著高于體重正常組。品種、體重以及二者的交互作用對蛋雞小黃卵泡數(shù)均無顯著影響。

2.3 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞養(yǎng)分代謝率比較 由圖3 可知，產(chǎn)蛋后期蛋雞品種、體重對飼料粗脂肪表觀代謝率具有顯著互作效應(yīng)，農(nóng)大3 號-體重正常＜農(nóng)大3 號-體重偏大＜海蘭褐-體重正常＜海蘭褐-體重偏大（P＜0.05）。農(nóng)大3 號蛋雞與海蘭褐蛋雞相比，飼料粗脂肪表觀代謝率極顯著降低；不考慮品種因素，體重偏大組蛋雞粗脂肪表觀代謝率極顯著高于體重正常組（P＜0.001）。蛋雞品種、體重以及二者的互作效應(yīng)均對飼料表觀代謝能以及粗蛋白質(zhì)表觀代謝率無顯著影響。

2.4 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞空腸消化酶活性比較由表4 可知，產(chǎn)蛋后期蛋雞品種、體重以及二者的交互作用對空腸食糜、黏膜消化酶活性均無顯著影響。

圖1 不同體重農(nóng)大3 號蛋雞和海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能比較

圖2 不同體重農(nóng)大3 號蛋雞和海蘭褐蛋雞器官相對重量比較

圖3 不同體重農(nóng)大3 號和海蘭褐蛋雞養(yǎng)分代謝率比較

表4 不同體重農(nóng)大3 號蛋雞和海蘭褐蛋雞空腸消化酶活性比較

2.5 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞空腸脂肪酸轉(zhuǎn)運載體mRNA 相對表達量比較 產(chǎn)蛋后期蛋雞品種、體重對空腸脂肪酸合成關(guān)鍵酶乙酰輔酶a 羧化酶（ACC）和脂肪酸合酶（FASN）mRNA 相對表達量具有顯著互作效應(yīng)，海蘭褐-體重正常＜農(nóng)大3 號-體重偏大＜農(nóng)大3 號-體重正常＜海蘭褐-體重偏大，F(xiàn)ASNmRNA 相對表達量前兩者趨勢相反，農(nóng)大3 號蛋雞不同體重之間2種酶基因mRNA 相對表達量差異不顯著。農(nóng)大3 號蛋雞脂肪酸轉(zhuǎn)運體FAT/CD36mRNA 相對表達量顯著高于海蘭褐蛋雞，而FASNmRNA 相對表達量顯著低于海蘭褐蛋雞。不考慮品種因素，體重偏大組蛋雞FASNmRNA 相對表達量有高于體重正常組的趨勢，但差異不顯著（表5）。

表5 不同體重農(nóng)大3 號蛋雞和海蘭褐蛋雞脂肪酸轉(zhuǎn)運載體相對表達量

2.7 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞血液生化指標(biāo)比較 由圖4-a 和圖4-b 可知，產(chǎn)蛋后期蛋雞品種、體重僅對血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性具有顯著互作效應(yīng)，農(nóng)大3 號-體重正常＜海蘭褐-體重正常＜海蘭褐-體重偏大＜農(nóng)大3號-體重偏大，海蘭褐蛋雞不同體重血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性差異不顯著。農(nóng)大3 號蛋雞與海蘭褐蛋雞相比，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性、尿酸含量顯著升高；不考慮品種因素，體重正常組蛋雞血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性、甘油三酯、膽固醇、膽汁酸、尿酸含量顯著低于體重偏大組。其余指標(biāo)差異不顯著。蛋雞品種、體重以及二者的互作效應(yīng)對血清T3和T4含量均無顯著影響（圖4-c）。

3 討 論

3.1 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞生產(chǎn)性能比較 本研究中，產(chǎn)蛋后期蛋雞體重普遍較大，這可能與產(chǎn)蛋后期蛋雞脂肪沉積增加有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，蛋雞體重與蛋重呈正相關(guān)關(guān)系，但與產(chǎn)蛋率呈負相關(guān)關(guān)系[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)蛋后期不同體重蛋雞蛋重差異不顯著，但體重正常組蛋雞產(chǎn)蛋率顯著高于體重偏大組。這一結(jié)果與王淑紅等[4]研究結(jié)果類似，即產(chǎn)蛋后期蛋雞體重對產(chǎn)蛋量影響顯著，但對蛋重影響不顯著，體重越大則產(chǎn)蛋數(shù)越低。這可能是由于產(chǎn)蛋后期蛋雞體重偏輕，脂肪沉積少，更有利于產(chǎn)蛋。此外，產(chǎn)蛋后期農(nóng)大3 號蛋雞生產(chǎn)性能較產(chǎn)蛋高峰期而言，其劣勢更加明顯。Merat 等[8]研究發(fā)現(xiàn)，矮小型基因DW 對蛋雞后期產(chǎn)蛋率的不良影響要高于前期。喬紅光[9]的研究結(jié)果也同樣證實，在相同的飼養(yǎng)條件下，矮小型農(nóng)大3 號蛋雞72 周齡產(chǎn)蛋數(shù)比普通蛋雞要低。研究認為，當(dāng)?shù)半u產(chǎn)蛋率下降至75% 左右，同時卵巢內(nèi)的初級卵泡、次級卵泡和等級卵泡數(shù)量顯著減少，而卵泡閉鎖率顯著增加表明家禽卵巢機能快速衰退[10]。本研究中，農(nóng)大3 號蛋雞卵巢相對重量較海蘭褐蛋雞有顯著提高，但其大黃卵泡數(shù)顯著低于海蘭褐-體重偏大組；同時農(nóng)大3 號蛋雞產(chǎn)蛋率顯著低于海蘭褐蛋雞，僅在75% 左右，這說明農(nóng)大3 號蛋雞生產(chǎn)性能驟降可能與其產(chǎn)蛋后期卵巢衰退速度較快有關(guān)。

3.2 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞消化器官相對重量比較 本研究中，相較于海蘭褐蛋雞，農(nóng)大3 號蛋雞的肌胃、肝臟相對重量顯著提高。寧中華等[11]和周大薇[12]的研究也發(fā)現(xiàn)，矮小雞肌胃、腺胃、十二指腸相對重量顯著高于正常雞，消化系統(tǒng)較發(fā)達。許多學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，家禽的消化器官重量，尤其是肝臟、肌胃的相對重量與養(yǎng)分代謝率呈顯著正相關(guān)關(guān)系[13-14]。楊瑛[15]研究發(fā)現(xiàn)，矮小型黃羽肉種公雞對棉粕的總氨基酸消化率顯著高于正常型肉種公雞。這說明矮小型蛋雞可能是通過促進消化器官的發(fā)育進而提高飼料養(yǎng)分代謝率。

圖4 不同體重農(nóng)大3 號蛋雞和海蘭褐蛋雞血液生化指標(biāo)比較

3.3 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞消化、吸收、代謝功能比較 研究發(fā)現(xiàn)，動物衰老的同時伴隨著小腸腸道形態(tài)、細胞增殖速率等的改變，導(dǎo)致對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力降低[16]。本研究中，產(chǎn)蛋后期農(nóng)大3 號蛋雞消化酶活性以及飼料表觀代謝能、粗蛋白質(zhì)表觀代謝率與海蘭褐蛋雞差異不顯著，這可能是由于產(chǎn)蛋后期蛋雞消化代謝功能衰退。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)蛋后期海蘭褐蛋雞粗脂肪表觀代謝率顯著高于農(nóng)大3 號蛋雞，以體重偏大組最高，顯著高于其他3 組。但產(chǎn)蛋后期農(nóng)大3 號蛋雞與海蘭褐蛋雞飼料表觀代謝能以及粗蛋白質(zhì)表觀代謝率無顯著差異。由此推斷，產(chǎn)蛋后期農(nóng)大3 號蛋雞日糧代謝能水平可以參考海蘭褐蛋雞營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，或略低于海蘭褐蛋雞。飼糧中的脂肪主要以三酰甘油的形式存在，被胃、胰腺消化酶水解為甘油一脂和脂肪酸，由脂肪酸轉(zhuǎn)運載體轉(zhuǎn)運吸收進入血液，隨血液運輸至各個組織器官，參與機體的合成代謝。此外，脂肪酸還可通過ACC和FASN等關(guān)鍵酶從頭合成，也可通過β氧化分解供能。本研究中，海蘭褐-體重偏大組這2 種酶（ACC、FASN）基因相對表達量顯著高于其他3 組，與粗脂肪表觀代謝率的結(jié)果一致。研究表明，F(xiàn)ASN、ACC基因表達量的增加會引起內(nèi)源脂肪酸含量增加，導(dǎo)致脂肪的沉積[17]。這說明產(chǎn)蛋后期海蘭褐體重偏大組蛋雞通過改變脂肪酸從頭合成的關(guān)鍵酶FASN、ACCmRNA 相對表達量，提高脂肪酸的合成效率，造成脂肪沉積量增加，進而改變粗脂肪表觀代謝率。

3.4 產(chǎn)蛋后期不同品種、體重蛋雞血液生化指標(biāo)比較丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶是催化脫氨基作用的關(guān)鍵酶，對肝臟的蛋白質(zhì)代謝起著樞紐的作用[18]。尿素氮是蛋白質(zhì)分解代謝的最終產(chǎn)物，血清尿素氮水平可以較準(zhǔn)確反映動物體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝情況和日糧氨基酸的平衡情況[19-21]。本研究中，農(nóng)大3 號蛋雞與海蘭褐蛋雞相比，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性、尿酸含量顯著提高。血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿酸的含量與蛋白的分解代謝相關(guān)，這說明農(nóng)大3 號蛋雞對飼糧蛋白質(zhì)的分解代謝速率高于海蘭褐蛋雞。體重正常組蛋雞相較于體重偏大組而言，血清甘油三酯、膽固醇、膽汁酸含量顯著降低。血清甘油三酯和膽固醇含量的升高導(dǎo)致脂肪沉積量以及體重增加。這說明體重偏大組蛋雞的脂肪沉積量高于體重偏輕組。膽汁酸主要是通過促進飼糧中脂肪的消化吸收并減少脂肪酸的分解，進而提高血清甘油三酯和膽固醇的含量。研究發(fā)現(xiàn)，血清中的總膽汁酸含量與甘油三酯及膽固醇的含量呈正相關(guān)，與前期研究結(jié)果一致[22]。

研究發(fā)現(xiàn)，矮小雞由于較低的肝臟脫碘酶活性，抑制T4向T3轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致血液中T3循環(huán)水平下降，而T4水平維持正?；蚵杂猩遊23]。而本研究中，農(nóng)大3 號蛋雞T3和T4含量與海蘭褐蛋雞無顯著差異。趙東偉等[24]研究發(fā)現(xiàn)，矮小型雞血清T3、T4含量與正常型雞未存在明顯差異，與本研究結(jié)果一致。喬紅光[9]研究同樣發(fā)現(xiàn)，6 周齡和10 周齡普通蛋雞血清T3含量顯著高于矮小雞，其余周齡顯著低于矮小雞。這說明檢測周齡以及品種選擇會影響血清中T3和T4含量。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果顯示，產(chǎn)蛋后期農(nóng)大3 號蛋雞脂肪酸轉(zhuǎn)運能力降低，造成其消化吸收功能以及粗脂肪表觀代謝率顯著低于海蘭褐蛋雞。因而，在配制產(chǎn)蛋后期農(nóng)大3號蛋雞日糧時，其代謝能需要量應(yīng)略低于海蘭褐蛋雞。產(chǎn)蛋后期體重正常組蛋雞可能通過降低對脂肪的合成代謝，減少脂肪沉積來提高生產(chǎn)性能。