易 瓊， 韓 娥， 馬政發(fā)， 吳文旋*， 陳鑫珠， 劉 景， 吳佳海， 牟 瓊

（1.貴州大學(xué)西南特色藥用生物資源開發(fā)利用教育部工程研究中心，貴州省生化工程中心，動物科學(xué)學(xué)院，動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)研究所，新農(nóng)村發(fā)展研究院，貴州省山地畜禽養(yǎng)殖污染控制與資源化技術(shù)工程實驗室，貴州貴陽550025；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福建福州350013；3.貴州省草業(yè)研究所，貴州貴陽550006）

我國養(yǎng)殖業(yè)取得長足進(jìn)步， 但也帶來蛋白質(zhì)飼料匱乏和動物排泄物環(huán)境污染的問題。 采取動物營養(yǎng)調(diào)控技術(shù)提高蛋白質(zhì)的消化利用率， 是節(jié)省蛋白質(zhì)飼料和降低污染環(huán)境的有效方式。 蛋白質(zhì)由氨基酸組成， 平衡的氨基酸比例可改善氮的平衡，減少氮的排泄。 研究顯示，適當(dāng)降低飼糧蛋白質(zhì)（CP）水平，并添加限制性氨基酸不會影響動物的生產(chǎn)性能， 還可降低氮的排放量和提高蛋白質(zhì)利用率（郭偉等，2020；Lee 等，2012）。

作為反芻動物的高位限制性氨基酸之一，賴氨酸（Lys）在機體蛋白質(zhì)合成、動物生長繁育上發(fā)揮著重要作用。 但由于瘤胃的特征，直接添加氨基酸會被瘤胃微生物降解，因此生產(chǎn)中常額外添加過瘤胃賴氨酸（RPLys），其進(jìn)入小腸后消化吸收，滿足反芻動物機體的需求（郭俊強，2019）。目前鮮見低CP補飼過瘤胃賴氨酸的研究報道。 據(jù)此，本試驗通過研究低CP 補飼RPLys 的飼喂效果， 為低CP 水平飼糧的實際應(yīng)用提供更多的數(shù)據(jù)參考和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計 采用單因素隨機區(qū)組設(shè)計，按年齡 （2.5）、 體重一致的原則， 將18 只初始體重（39.56±2.01）kg、體況良好的黔北麻羊隨機分為3組，即對照組、處理Ⅰ組、處理Ⅱ組，每組6 個重復(fù)，每個重復(fù)1 只羊。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，CP 設(shè)定為12%，不添加RPLys；處理Ⅰ組CP 為10%，補飼0.5%的RPLys； 處理Ⅱ組CP 為10%， 補飼1%的RPLys（過瘤胃率為85%）。 采用逐級混勻法將RPLys 與精料充分混合，并按先精后粗的飼喂順序投喂，保證RPLys 采食完全。 試羊單籠飼養(yǎng)管理，每天定時飼喂2 次，自由飲水，羊舍干凈衛(wèi)生、通風(fēng)良好。 試驗期共21 d，其中預(yù)試期14 d，正試期（采樣期）7 d。 試羊飼糧參照《中國肉用山羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）》配制（蘭云賢，2008），其組成及營養(yǎng)水平見表1，精粗比為40:60。

表1 山羊飼糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.2 檢測指標(biāo)

1.2.1 生長性能 每天以重復(fù)為單位記錄試羊干物質(zhì)采食量（DMI），始重和末重為預(yù)飼期第1 天和正試期結(jié)束后（22th）時空腹體重，計算平均日增重（ADG）、平均凈增重（ANG）及料重比（F/G）。

1.2.2 養(yǎng)分消化率 在試驗期內(nèi)每3 d 收集1 次飼糧樣品， 正試期結(jié)束前的最后5 d 連續(xù)對每只試羊進(jìn)行24 h 收糞，準(zhǔn)確記錄并稱重，加入10%鹽酸固氮。 將飼糧樣和糞樣置于（65±2）℃烘箱中烘干，回潮24 h 后粉碎，參照《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》對飼糧樣和糞樣進(jìn)行分析測定（張麗英，2007）。采用氧彈式測熱儀（美國PARR-6400）測定能量（GE），凱氏定氮法（K1100F，Hanon）測定粗蛋白質(zhì)（CP），灼燒法測定有機物（OM）、酸不溶灰分（AIA）含量，Van Soest 纖維素分析法測定中性洗滌纖維（NDF）、酸性洗滌纖維（ADF）。 養(yǎng)分消化率的計算采用內(nèi)源指示劑法（4 N AIA），計算公式為：

養(yǎng)分消化率/%=100-[100×（飼糧中AIA 含量/糞中AIA 含量）×（糞中養(yǎng)分含量/飼糧中養(yǎng)分含量）]。

1.2.3 血液生化指標(biāo) 在正試期第6 天，清晨空腹?fàn)顟B(tài)下用裝有肝素鈉的采血管對試羊頸靜脈采血10 mL，1006.2 g 離心15 min， 取上層血液于-20 ℃冷凍保存。 參考南京建成生物工程研究所試劑盒說明書測定總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、總氨 基 酸（TAA）、尿 素 氮（UN）、尿 酸（UA）、肌 酐（Cr）、堿性磷酸酶（AKP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA）、過氧化氫酶（CAT）含量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2010 軟件預(yù)處理， 再采用SAS 9.2 軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan’s 法多重比較。 結(jié)果采用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，P ＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長性能 從表2 可知，各組山羊初始體重接近（P ＞0.05）。 低蛋白飼糧添加RPLys 后不影響山羊的生長性能，各組間的DMI、ADG、ANG、F/G 差異均不顯著（P ＞0.05）。

表2 低蛋白補飼RPLys 對山羊生長性能的影響

2.2 養(yǎng)分消化率 由表3 可知，低蛋白飼糧補飼RPLys 不影響NDF、ADF 及OM 消化率，各組間差異不顯著（P ＞0.05）。 對CP 消化率，處理Ⅰ組、處理Ⅱ組分別高于對照組9.36%、14.26%，差異顯著（P ＜0.05）。 對EE 消化率，處理Ⅰ組、處理Ⅱ組分別高于對照組6.17%、10.10%， 差異均顯著 （P ＜0.05）；但處理Ⅰ組、處理Ⅱ組之間差異不顯著（P ＞0.05）。 RPLys 的添加可提升CP、EE 消化率，表明其具有劑量依賴效應(yīng)，表現(xiàn)為隨著RPLys 添加水平的增加，CP、EE 消化率也相應(yīng)增加。

表3 低蛋白補飼RPLys 對山羊養(yǎng)分消化率的影響 %

2.3 血液生化指標(biāo) 由表4 可知，低蛋白飼糧補飼RPLys 對山羊血液TP、Alb、TAA、UN、UA、Cr、AKP、AST、ALT、SOD、GSH-PX、MDA、CAT 均未產(chǎn)生明顯影響，差異不顯著（P ＞0.05）。

表4 低蛋白補飼RPLys 對山羊血液生化代謝指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 低蛋白補飼RPLys 對山羊生長性能的影響必需氨基酸在動物體內(nèi)不能自主合成，蛋白水平降低的同時需額外補充才能滿足機體需求，不然就會影響氮平衡并對動物的健康造成損害。研究表明，在基礎(chǔ)日糧中添加RPLys 有利于提高反芻動物的干物質(zhì)采食量和日增重，增加對養(yǎng)分的消化吸收（楊宇為，2015；劉保倉，2014；Xue 等，2011）。 Robinson 等（2011） 在泌乳早中期奶牛的TMR 飼糧中添加RPLys， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)飼喂RPLys 對DM 攝入量沒有顯著影響。 本試驗中2 個處理組山羊生長性能并沒有降低，這提示添加的RPLys 消除了蛋白質(zhì)降低引起的生長性能受損。與本研究結(jié)果不同的是，韓云勝等（2016）在基礎(chǔ)飼糧中添加RPLys 30 g/d，發(fā)現(xiàn)奶公牛的末重和ADG 均顯著提高， 表明添加RPLys 在一定程度上可改善其生產(chǎn)性能。原因可能是，試驗所用的黔北麻羊作為地方品種，已接近自身平臺期體重水平，生長狀態(tài)已過了生長發(fā)育的旺盛期，因此額外添加RPLys 對生長性能已無顯著效果。

3.2 低蛋白補飼RPLys 對山羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 養(yǎng)分消化率和生產(chǎn)性能具有密切關(guān)系， 是反映養(yǎng)分在體內(nèi)消化利用情況的重要指標(biāo)（王波等，2016）。 蛋白質(zhì)是動物機體組織的重要組成部分，蛋白水平的降低會導(dǎo)致動物生長性能、養(yǎng)分消化率和氨基酸消化率下降，影響體內(nèi)氨基酸的轉(zhuǎn)換和代謝平衡（黃健，2015）。在飼糧中補充過瘤胃氨基酸可使小腸中氨基酸含量增加，蛋白質(zhì)的消化吸收率提高，降低其在瘤胃轉(zhuǎn)化過程中的損耗。研究表明，添加一定水平的Lys 可增加反芻動物的自由采食量和氮存留率，提高CP 消化率，有效降低氮排放（歐陽靖等，2010；Wang 等，2010）。 本試驗結(jié)果表明，低蛋白補飼RPLys 能夠顯著提高飼糧CP 和EE 消化率，飼糧養(yǎng)分得到了充分利用， 原因可能是添加的RPLys改善了機體內(nèi)氨基酸的平衡，有利于對養(yǎng)分的消化吸收。 研究發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，在綿羊日糧中補充

4.0 g/kg 和8.0 g/kg 的賴氨酸鹽酸鹽， 有機物和粗蛋白質(zhì)消化率、 氮保留率都有所提高 （劉文杰等，2015）。 李雪玲等（2017）研究指出，斷奶羔羊飼糧中添加RPLys 能提升飼糧蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)化速率，氮的利用率和氮表觀消化率都有明顯增加?？梢?，在低蛋白飼糧中添加RPLys 有利于小腸平衡可吸收氨基酸水平，正向提高飼糧平均的消化能力，減少糞、尿氮的排放量，達(dá)到環(huán)保和降低飼料成本的目的。

3.3 低蛋白補飼RPLys 對山羊血液生化指標(biāo)的影響 血液TAA、TP、Alb、UN、UA 和Cr 水平是評定機體對蛋白質(zhì)消化吸收利用和氨基酸平衡狀態(tài)的重要指標(biāo)。 TAA 表示血液中氨基酸總量的變化情況；血液TP 由Alb 和Glb 構(gòu)成，在一定程度上可以衡量機體營養(yǎng)狀況代謝水平（崔萌萌等，2012）；Cr是血液中嘌呤的代謝產(chǎn)物， 能夠反映腎臟健康情況，當(dāng)腎臟受損時，血液中Cr 濃度增加（吳天佑等，2016）；UN 是蛋白質(zhì)代謝的終產(chǎn)物，受瘤胃中NH3-N 濃度和蛋白質(zhì)異化作用的影響 （劉飛等，2014），能評定飼糧中蛋白質(zhì)和瘤胃內(nèi)可溶性降解物的均衡情況。 高昌鵬（2019）報道，日糧中添加RPLys 可提高灘羊血清TP 水平，顯著降低UN 的含量；賈明?。?010）在泌乳奶牛中，也得到類似結(jié)論。 但在本試驗中各組血液TP、Alb、UN、UA、Cr并無顯著差異；與此類似的是，Rajwade 等（2019）在Sahiwal 雌性小?；A(chǔ)日糧中補充15 g/d 的RPLys，研究發(fā)現(xiàn)并不會對TP、Alb 水平造成顯著影響。 此外，從處理組補飼RPLys 可以發(fā)現(xiàn)，血液中TAA 水平有所升高，說明RPLys 的添加能夠使氨基酸總量增加，但并未有顯著性差異。

ALT、AST 和AKP 參與氨基酸代謝， 氨基酸不平衡時會導(dǎo)致肝臟組織受損，ALT 和AST 活性升高，AKP 活性降低（黃健等，2014）。 本試驗中，各組之間血液AST、ALT 及AKP 水平差異均不顯著，說明低蛋白補飼RPLys 不會對山羊的肝臟造成負(fù)面影響。 與本試驗結(jié)果相似，薛豐等（2010）也發(fā)現(xiàn)，日糧中添加RPLys 對肉牛血液TP、Alb、AST、ALT 含量無顯著影響。血液中SOD、GSH-Px、CAT、MDA 等抗氧化物質(zhì)可以維持機體細(xì)胞氧化、抗氧化動態(tài)平衡。CAT 和GSH-Px 是動植物和微生物內(nèi)普遍存在的抗氧化酶，其中GSH-Px 能催化還原形谷胱甘肽（GSH）對氫過氧化物的還原反應(yīng)（Borchi，2010），是細(xì)胞內(nèi)抗氧化作用的酶性保護系統(tǒng)的成分之一。SOD 是動物體內(nèi)重要的抗氧化酶， 能夠清除自由基， 在保護機體免受氧化損傷上發(fā)揮著關(guān)鍵作用。MDA 是機體脂質(zhì)過氧化鏈鎖反應(yīng)的產(chǎn)物， 其含量高低常用來評定脂質(zhì)過氧化作用狀況和細(xì)胞過氧化的程度。 Debele 等（2019）研究表明，在母牛產(chǎn)前補充RPLys 可提高血液GSH-Px 活性， 降低MDA含量；而在產(chǎn)后母牛中添加RPLys 可降低產(chǎn)犢后前三周的MDA 濃度，有助增加血液GSH-Px 水平。本試驗中， 低蛋白補飼添加RPLys 對SOD 活性無顯著影響； 但從數(shù)值變化趨勢來看，GSH-Px、CAT 有所提高，MDA 水平輕微降低，這提示RPLys 在提高血液抗氧化能力方面具有一定潛力。

4 結(jié)論

本試驗結(jié)果表明，在降低飼糧蛋白水平的同時補飼RPLys 可顯著提高山羊的粗蛋白質(zhì)、 粗脂肪消化率；且不會影響血液正常代謝和抗氧化應(yīng)激能力。 綜合考慮各指標(biāo)，以添加1%RPLys 效果最好。