何琳莉 黃一凡

摘 要：在組織學(xué)和病理學(xué)研究中，石蠟切片技術(shù)是一種常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)學(xué)生實(shí)驗(yàn)動(dòng)手能力的更好培養(yǎng)，更好地幫助其將所學(xué)理論知識(shí)與實(shí)踐緊密結(jié)合起來，文章試圖就石蠟切片技術(shù)在開放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用展開深入的研究探討，幫助學(xué)生將該技術(shù)的實(shí)驗(yàn)原理、方法牢固掌握，從而為后續(xù)免疫組化開放性實(shí)驗(yàn)的開展奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：病理學(xué) 石蠟切片技術(shù) 開放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)

在各種切片制作方法中，石蠟切片技術(shù)是一種應(yīng)用最為普遍的技術(shù)。該技術(shù)不僅用于病理學(xué)、生命科學(xué)領(lǐng)域?qū)?xì)胞組織形態(tài)變化的觀察，在其他諸多學(xué)科領(lǐng)域中也獲得了較為廣泛的應(yīng)用，在臨床手術(shù)中是一種不可或缺的重要診斷方法[1]。將石蠟切片技術(shù)應(yīng)用到開放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)中來，幫助學(xué)生將切片的制作過程順利掌握，學(xué)會(huì)判斷切片質(zhì)量好壞。同時(shí)學(xué)生通過動(dòng)手制作切片以及閱片，有助于將學(xué)生的積極性有效調(diào)動(dòng)起來，以達(dá)到培養(yǎng)學(xué)生動(dòng)手實(shí)踐能力的目的。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑和器材

試劑：10%甲醛水溶液、75%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、中性樹膠以及石蠟等。

材料：蓋玻片、載玻片、正常小白鼠腎組織標(biāo)本。

器材：水浴箱、包埋機(jī)、烤箱以及萊卡輪轉(zhuǎn)切片機(jī)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)過程

取材固定、清晰脫水、透明浸蠟、包埋切片、染色封片等是石蠟切片技術(shù)的主要步驟[2]。第一步，教師將石蠟切片技術(shù)的原理、石蠟切片的詳細(xì)制作過程對(duì)學(xué)生進(jìn)行一個(gè)細(xì)致的介紹，讓學(xué)生對(duì)該技術(shù)有一個(gè)大概的認(rèn)識(shí)和了解;第二步，教師借助多媒體播放教學(xué)視頻讓學(xué)生觀看石蠟切片技術(shù)的整個(gè)操作步驟以及學(xué)習(xí)以怎樣的標(biāo)準(zhǔn)來對(duì)切片的質(zhì)量加以判斷;第三步，分小組在教師的安排下前往醫(yī)院病理科實(shí)地觀摩怎樣制作切片;第四步，在教師指導(dǎo)下于實(shí)驗(yàn)室親自動(dòng)手運(yùn)用石蠟切片技術(shù)制作石蠟切片。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

（1）取材固定：取病理科闌尾手術(shù)標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)材料，組織厚度大概為0.2～0.3cm。然后使用10%甲醛對(duì)闌尾組織加以固定。固定的目的在于使實(shí)驗(yàn)材料保持固有的結(jié)構(gòu)和形態(tài)[3]。

（2）清洗脫水：具體步驟是80%乙醇2h→95%乙醇Ⅰ2h→95%乙醇Ⅱ2h→無水乙醇Ⅰ30min→無水乙醇Ⅱ30min。這一步至關(guān)重要，主要目的是為了使組織材料的急劇收縮得以減少，應(yīng)按照由低到高濃度遞增這樣的順序進(jìn)行。

（4）透明浸蠟：二甲苯透明0.5h→石蠟Ⅰ1h→石蠟Ⅱ1h→石蠟Ⅲ1h→浸蠟（設(shè)置溫度為58℃）。

（5）包埋切片：學(xué)生在教師的指導(dǎo)下疊包埋用的材料，然后進(jìn)行包埋。包埋的時(shí)候需要注意順時(shí)針對(duì)盛有石蠟和組織材料的小瓶輕輕搖晃，搖晃之后倒入事先疊好的包埋材料中，然后把包埋材料緩緩浸入事先準(zhǔn)備好的冷水之中，不能完全浸入，直到表層石蠟?zāi)虨橹?，隨后包埋好的蠟塊再使用刀片加以修整。

（6）染色封片：具體步驟是二甲苯Ⅰ0.25h→二甲苯Ⅱ0.25h→無水乙醇Ⅰ2min→無水乙醇Ⅱ2min→95%乙醇Ⅰ1min→80%乙醇Ⅰ1min→自來水沖洗1min→蘇木素、蒸餾水洗0.25h→蒸餾水洗→1%鹽酸乙醇加以分化→自來水沖洗→1%稀氨水予以返藍(lán)→流動(dòng)自來水沖洗→蒸餾水洗→0.5%伊紅2min→自來水沖洗→80%乙醇20s→95%乙醇30s→無水乙醇Ⅰ1min→無水乙醇Ⅱ1min→二甲苯Ⅰ5min→二甲苯Ⅱ3min→最后使用中性樹膠予以封片。染色的主要目的在于讓細(xì)胞組織內(nèi)不同結(jié)構(gòu)能夠呈現(xiàn)出不一樣的顏色，便于學(xué)生觀察。

2 結(jié)果

本次開放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，石蠟切片技術(shù)的教學(xué)過程開展順利，達(dá)到了預(yù)期的教學(xué)效果。相較于以前只可以從書本上看到動(dòng)物組織的顯微結(jié)構(gòu)，此時(shí)通過教師的講授、觀看教學(xué)視頻、實(shí)地參觀最后再在教師的引導(dǎo)下自己動(dòng)手操作。由于是學(xué)生自己動(dòng)手制作出來的切片，所以使學(xué)生對(duì)該技術(shù)產(chǎn)生了更加深刻的印象，極大地提升了學(xué)生對(duì)開放性實(shí)驗(yàn)的參加興趣。石蠟切片技術(shù)操作簡(jiǎn)便，同時(shí)有著較強(qiáng)的實(shí)用性，將其應(yīng)用到開放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)中來，有著尤為深遠(yuǎn)的意義。

3 討論

在傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，大多是學(xué)生肉眼觀察已經(jīng)制作好的大體標(biāo)本或者是在顯微鏡下觀察已經(jīng)事先染色好的組織切片，這樣的教學(xué)模式自然很容易使得學(xué)生認(rèn)為太過枯燥無味，未能將實(shí)驗(yàn)教學(xué)注重培養(yǎng)學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作能力的特點(diǎn)很好地體現(xiàn)出來。而將石蠟切片技術(shù)應(yīng)用到開放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)中來，讓學(xué)生能夠親自動(dòng)手參與到組織制片以及HE染色過程中來，無疑更容易將學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣很好地調(diào)動(dòng)起來。同時(shí)，在自己動(dòng)手實(shí)驗(yàn)這個(gè)過程中，也有利于學(xué)生對(duì)照所學(xué)知識(shí)來判斷切片的質(zhì)量，了解每一張切片背后都有一個(gè)復(fù)雜的制作過程，使學(xué)生更加真切地認(rèn)識(shí)到組織切片的來之不易，以及其在臨床診斷中的重要性，畢竟直接關(guān)乎到病人病情的診斷。

項(xiàng)目名稱：2017年川北醫(yī)學(xué)院開放性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目;項(xiàng)目編號(hào)：川北醫(yī)教[2017]7號(hào)：10。

參考文獻(xiàn)：

[1] 劉浩，董文文，鐘勝華，等.快速石蠟切片技術(shù)在病理檢驗(yàn)中的臨床價(jià)值[J].深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2019，29（12）：88-89.

[2] 王秀文.石蠟切片法中染色技術(shù)的改良[J].植物研究，2015，35（01）：158-160.

[3] 金銀姬，陳立本，劉曉慶，等.快速石蠟切片技術(shù)在病理檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33（12）：211-213.

川北醫(yī)學(xué)院病理教研室（川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科） （四川省南充市 637000）