李然然，林小滿，孫禮強(qiáng)，張洪文，韓秋峪△

1.徐州醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，江蘇徐州 221004;2.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇徐州 221006

子癇前期(PE)為妊娠期疾病，以高血壓為主要特征，妊娠至20周后常伴有蛋白尿和(或)母體器官功能障礙[1]。有研究認(rèn)為，PE與胎盤中滋養(yǎng)細(xì)胞未充分浸潤(rùn)及血管生成受阻有關(guān)，細(xì)胞侵襲分子及血管生成分子的表達(dá)在PE中發(fā)生明顯改變[2-3]。PE使母體和胎兒的健康受到嚴(yán)重危害，其全球發(fā)病率約為3%～8%[4]。

(4)信任計(jì)算模塊。將策略決策模塊分析的結(jié)果，連同用戶使用反饋?zhàn)鳛樵u(píng)估CSP信任值的依據(jù)，并計(jì)算其信任值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料使用表示,比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

HtrA絲氨酸肽酶4(HtrA4)是一種絲氨酸蛋白酶，健康妊娠中，血清HtrA4水平在妊娠24～25周時(shí)逐漸升高，然后整個(gè)妊娠期間保持相對(duì)穩(wěn)定[5]。研究發(fā)現(xiàn)，HtrA4與PE關(guān)系密切[6]。有研究表明HtrA4促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲[7]，也有研究表明HtrA4抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的遷移和生長(zhǎng)。在早發(fā)型PE中，HtrA4的水平在發(fā)病時(shí)明顯升高[8]。然而，HtrA4在胎盤發(fā)育中的確切作用仍不清楚。

血管內(nèi)皮鈣黏素(VE-cadherin)為鈣黏素(cadherin)的重要成員之一，主要分布在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，為內(nèi)皮細(xì)胞中特異性表達(dá)的關(guān)鍵黏附性連接蛋白。VE-cadherin功能改變導(dǎo)致血管通透性異常。研究發(fā)現(xiàn)，VE-cadherin在正常胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)，可抑制滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)生長(zhǎng)，對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲行為有明顯抑制作用[9]。此外，VE-cadherin也影響妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[10-11]。本文主要研究母血和胎盤組織中HtrA4與VE-cadherin水平及其與臨床指標(biāo)的關(guān)系，探討HtrA4與VE-cadherin對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞分化的影響，深入研究PE的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

2.43組胎盤組織中HtrA4和VE-cadherin的蛋白表達(dá)水平比較 與健康妊娠晚期孕婦比較，PE孕婦胎盤組織中HtrA4和VE-cadherin的蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)；與PE早發(fā)組比較，PE晚發(fā)組HtrA4蛋白表達(dá)水平升高，VE-cadherin蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)。見圖2。

2.33組胎盤組織中HtrA4和VE-cadherin的mRNA表達(dá)水平比較 與健康妊娠晚期孕婦比較，PE孕婦HtrA4和VE-cadherin的mRNA表達(dá)水平降低(P<0.05)；與PE早發(fā)組比較，PE晚發(fā)組HtrA4的mRNA表達(dá)水平升高,VE-cadherin mRNA表達(dá)水平降低(P<0.05)。見圖1。

表1 引物序列

2.23組母血和胎盤組織中HtrA4和VE-cadherin水平比較 與健康妊娠晚期孕婦比較，PE孕婦母血及胎盤組織中HtrA4水平升高，VE-cadherin水平降低(P<0.05)；與PE早發(fā)組比較，PE晚發(fā)組母血及胎盤組織中HtrA4水平降低，VE-cadherin水平升高(P<0.05)。見表3。

2 結(jié) 果

2.13組一般資料比較 3組研究對(duì)象的年齡、BMI比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而PE孕婦在收縮壓、舒張壓等方面與健康妊娠晚期孕婦比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組一般情況比較

表3 3組母血和胎盤中HtrA4和VE-cadherin水平比較

1.2方法 分娩前空腹抽取研究對(duì)象靜脈血3 mL，室溫靜置，3 000 r/min離心10 min，取上清液。胎盤娩出后，立即取胎盤母體面中央部位組織(約1 cm×1 cm×1 cm)，避開出血及鈣化等部位，隨后采用生理鹽水漂洗，濾紙吸干水分，-80 ℃保存。分離母血及胎盤組織，采用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(ELISA)檢測(cè)VE-cadherin和HtrA4水平。蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)測(cè)定胎盤組織中HtrA4和VE-cadherin蛋白水平。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)測(cè)定組織中VE-cadherin和HtrA4的mRNA表達(dá)水平。采用Trizol提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，隨后采用qPCR試劑盒進(jìn)行qPCR反應(yīng)，以β-actin為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt計(jì)算其循環(huán)閾值。引物序列如下，見表1。

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與PE早發(fā)組比較，bP<0.05。

1.1一般資料 隨機(jī)選取2018-2019年于本院住院分娩的PE孕婦78例，其中早發(fā)型40例(發(fā)病孕周≤34周)為PE早發(fā)組，晚發(fā)型38例(發(fā)病孕周>34周)為PE晚發(fā)組。選取同期健康妊娠晚期孕婦40例為對(duì)照組。收集所有研究對(duì)象的年齡、身高、體質(zhì)量，計(jì)算體質(zhì)量指數(shù)(BMI)，以及所有研究對(duì)象的分娩孕周、收縮壓、舒張壓等基本情況。

注：A為Western blot檢測(cè)胎盤組織中蛋白表達(dá)水平結(jié)果；B為Western blot檢測(cè)胎盤組織中蛋白表達(dá)水平結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與PE早發(fā)組比較，bP<0.05。

3 討 論

HtrA4是一種特異性絲氨酸蛋白酶，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、應(yīng)激反應(yīng)和衰老過程中有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，HtrA4與PE密切相關(guān)，HtrA4水平升高可能與PE的發(fā)病相關(guān)，HtrA4可作為診斷PE的生物標(biāo)志物[6]。然而，另外的研究則認(rèn)為，PE中HtrA4水平降低[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，HtrA4在健康妊娠晚期孕婦及PE孕婦中均有表達(dá)，與健康妊娠晚期孕婦比較，PE孕婦HtrA4水平升高，與PE早發(fā)組比較，PE晚發(fā)組HtrA4水平降低，研究結(jié)果與孔紅芳等[15]一致。然而，本研究Western blot和qPCR結(jié)果提示PE孕婦HtrA4的mRNA和蛋白表達(dá)水平低于健康妊娠晚期孕婦，與PE早發(fā)組比較，PE晚發(fā)組HtrA4的mRNA和蛋白表達(dá)水平升高。

PE是最常見且潛在的嚴(yán)重的妊娠相關(guān)疾病之一，是孕產(chǎn)婦死亡的主要原因，幾乎占妊娠相關(guān)疾病病死率的15%～20%[12]。PE并非簡(jiǎn)單的妊娠并發(fā)癥，而是涉及肝、腎、肺、凝血系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等多器官功能衰竭的綜合征。研究表明PE與氧化應(yīng)激、內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙、血管收縮、代謝變化、血栓性疾病及炎性反應(yīng)等有關(guān)，然而確切的機(jī)制仍不清楚[13-14]。

但是技術(shù)變革的速度還是令消費(fèi)者和環(huán)保組織感到震驚，因?yàn)樗麄冋J(rèn)為新的基因編輯技術(shù)尚未通過充分的審查就已經(jīng)上市，他們已經(jīng)請(qǐng)求監(jiān)管組織進(jìn)一步加強(qiáng)基因編輯食品安全性審查。

VE-cadherin影響正常滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲及分化等，檢測(cè)VE-cadherin的mRNA 表達(dá)水平或?qū)⒊蔀槿焉镒甜B(yǎng)細(xì)胞疾病的重要參考指標(biāo)之一[16-18]。TSENG等[19]研究發(fā)現(xiàn)，隨著HtrA4水平升高，VE-cadherin在人臍血管內(nèi)皮細(xì)胞的水平降低；HtrA4在人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中裂解VE-cadherin以破壞細(xì)胞接觸并增加通透性，同時(shí)表明HtrA4可能是胎盤來源的蛋白酶，其通過裂解VE-cadherin破壞母體內(nèi)皮細(xì)胞。

實(shí)施保護(hù)畜禽動(dòng)物防疫工作，準(zhǔn)確掌握畜禽動(dòng)物疫情和控制因素，保證為畜禽動(dòng)物能夠健康成長(zhǎng)。但在畜禽動(dòng)物防疫中，依舊存在著問題，需要有關(guān)部門重點(diǎn)對(duì)待，緊密配合，實(shí)行有效保護(hù)防疫策略，方可獲得較好效果，從而起到防疫目地。

本文研究結(jié)果提示，HtrA4與VE-cadherin均參與了PE疾病發(fā)展，隨著PE孕婦孕周的增加，HtrA4與VE-cadherin水平也發(fā)生改變，VE-cadherin的表達(dá)可能與PE滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲分化發(fā)生改變有關(guān)。