于 婧,李 敏,高兆銀,弓德強,張紹剛,3,洪小雨,花靜靜,4,胡美姣
(1.海南大學(xué) 植物保護學(xué)院,???570228; 2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院 環(huán)境與植物保護研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶作物有害生物綜合治理重點實驗室,???571101; 3.海南大學(xué) 生命科學(xué)與藥學(xué)院,???570228;4.海南大學(xué) 園藝學(xué)院,???570228)
本課題組參照文獻(xiàn)[1]采用組織分離法對火龍果果腐病病原菌進(jìn)行分離純化,并通過形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)對病原菌進(jìn)行鑒定,確定引起火龍果果腐病的病原菌為桃吉爾霉(Gilbertella persicaria)。植物精油是一類植物源次生代謝物質(zhì),分子量較小,且具有一定揮發(fā)性[2],具有對環(huán)境友好的優(yōu)勢。植物精油在抑菌方面和果蔬采后保鮮方面均表現(xiàn)出較好的效果[3]。本實驗研究植物精油對火龍果果腐病病原菌的抑菌效果,為后期使用天然植物精油對火龍果果腐病進(jìn)行防治提供技術(shù)支撐。
1.1 材料桃吉爾霉(G.persicaria)編號為HLG-T,分離自海南省東方市某果園的貯藏期病果。由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護研究所采后病害及貯運保鮮課題組分離鑒定,經(jīng)致病性測定后純化保存?zhèn)溆?。供試植物精油:牛至精油、香茅精油、肉桂精油、芥末精油、丁香精油、樟腦精油、玫瑰草精油、草果精油、山茶花精油、茶樹精油、檸檬精油和橄欖精油等12 種精油。上述精油均購自上海源葉生物科技有限公司。接種用實驗果實采購自海南省海口市南北水果市場,選取新鮮健康、表面無損傷、大小和成熟度一致的果實。
1.2 不同植物精油的抑菌效果設(shè)置12 種植物精油的不同濃度梯度,以無菌水為空白對照。植物精油的抑菌效果實驗采用含藥平板法[4]。將病原菌菌餅(直徑d=5 mm)接種于PDA 平板中央,置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后,采用十字交叉法測量菌落直徑,每處理3 次重復(fù)。依據(jù)公式(1)計算抑菌率,以質(zhì)量濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo),以抑菌率幾率值為縱坐標(biāo)求毒力回歸方程,計算相關(guān)系數(shù)、EC50值,比較供試12 種植物精油對供試菌株的毒力大小。
1.3 病害控制效果病害控制效果實驗采用浸泡法。參照繆應(yīng)林[5]等方法稍作修改,選用抑菌效果較好的5 種植物精油,配制成1 000 μL·L?1精油溶液,將打好孔(d=5 mm)的火龍果果實在1 000 μL·L?1精油溶液中浸泡10 min,晾干后接種病原菌菌餅(d=5 mm),裝入密封保鮮盒中,于25 ℃恒溫保濕培養(yǎng)。每處理設(shè)置3 次重復(fù),以無菌水處理為空白對照。2 d 后采用“十字交叉法”測量病斑直徑,按公式(2)進(jìn)行計算。
2.1 不同植物精油對病原菌的抑菌效果在供試的12 種植物精油中,牛至精油的抑菌效果最好,其EC50值僅為94.1 μg·mL?1;其次是香茅精油、肉桂精油、芥末精油、丁香精油、樟腦精油、玫瑰草精油和草果精油,EC50值依次為122.9,174.0,254.3,261.1,311.6,349.6,372.7 μg·mL?1,均在100.0~500.0 μg·mL?1;而山茶花精油、茶樹精油、檸檬精油、橄欖精油的抑菌效果不好,EC50值均在500.0 ~ 1 000.0 μg·mL?1。
2.2 病害控制效果在供試的5 種精油中,芥末精油對該病害的控制效果最好,其控制率達(dá)到100%;其次是牛至精油和丁香精油,其控制率達(dá)到91.96%和56.80%;香茅精油和肉桂精油抑菌效果最差,其控制率均在50%以下。牛至精油對該病害的控制率雖然達(dá)到91.96%,但使用牛至精油浸果極易對果面造成藥害。
植物精油是從植物組織中提取的物質(zhì),具有抑菌廣譜、綠色安全、高效長效和不易產(chǎn)生抗性等特點,是一種很有潛力的新型殺菌物質(zhì)[6?7]。供試12 種精油對于桃吉爾霉(G.persicaria)在離體條件下的生長均有抑制作用,其中牛至精油抑菌效果最好,其次是香茅精油、肉桂精油、芥末精油、丁香精油、樟腦精油、玫瑰草精油和草果精油的抑菌效果也較強。選取抑菌效果較好的5 種精油(牛至精油、香茅精油、肉桂精油、芥末精油、丁香精油)進(jìn)行浸果實驗,病害控制結(jié)果表明,芥末精油對該病害的控制效果最好,其控制率達(dá)到100%,且果面未見損傷;牛至精油其次,其控制率雖然達(dá)到91.96%,但是牛至精油處理使果實出現(xiàn)嚴(yán)重藥害,不適合在實際生產(chǎn)中應(yīng)用。綜上所述,對桃吉爾霉(G.persicaria)引起的火龍果果腐病控制效果最好的是芥末精油,該精油處理可抑制該病原菌的生長,減少該菌引起的火龍果果腐病的發(fā)生。